技术领域本发明涉及水产饲料制备领域，具体涉及一种乳酸菌发酵型液体鱼饲料的制备方法。
背景技术：
鱼产品及其下脚料中含有丰富的蛋白质，将其开发生产为水产饲料对于减轻环境污染、实现废弃物的综合利用具有重要意义。原料鱼经水解得到的液体蛋白，其营养成分与优质鱼粉营养成分相近，且其含有的赖氨酸、蛋氨酸的含量均高于鱼粉，所含的必需氨基酸种类齐全、比例适当，维生素和微量元素的含量也十分丰富。相对于鱼粉而言，液体鱼蛋白不仅品种多、功能多、无毒副作用、香味浓郁，而且其加工制作简单，生产成本低，所需人力、物力少，原料广泛，适用范围广。谷胱甘肽(glutathione，GSH)是由γ-谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸组成的生物活性肽，分为还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽。通常所称谷胱甘肽是指还原型谷胱甘肽，是机体内的重要活性物质，具有清除自由基、解毒、促进铁质吸收及维持红细胞膜的完整性、维持DNA的生物合成、细胞的正常生长及细胞免疫等多种生理功能。目前，谷胱甘肽在畜禽生产中研究较多，已证实谷胱甘肽可以提高猪卵母细胞成熟率及显微受精胚的卵裂率，提高泌乳动物的泌乳性能，解除黄曲霉毒素对雏鸡的毒性，解除鱼体微囊藻毒素引起的中毒症等。迄今为止，有关谷胱甘肽在水产动物饲料方面应用极少，因此加快谷胱甘肽的研究开发对于替代水产动物饲料中抗生素的使用具有极其重要的意义。
技术实现要素：
为了减少水产动物饲料中抗生素的使用，保障鱼产品的质量安全，本发明提供了一种新的饲料加工制备方法，本发明方法是通过乳酸菌发酵将鱼废弃物转化为液体蛋白，再经过脱脂去油和添加辅料等一系列步骤制备而成，本法不仅能够实现养鱼的高产、多产，还能实现废物的合理利用，具有重要的进步意义。本发明的技术方案如下：一种乳酸菌发酵型液体鱼饲料的制备方法，方法如下：(1)取食品级葡萄糖加水配成质量浓度为2％的葡萄糖溶液，按1％的接种量将乳酸菌接种于葡萄糖溶液中，置于30℃的条件下培养活化24小时，得到乳酸菌液；(2)将鱼废弃物绞碎，取相当于鱼废弃物10％的木薯粉、10％的木瓜粉、5％的废糖蜜混合加入到绞碎的鱼废弃物中搅拌均匀，得到混合料；(3)将步骤(1)的乳酸菌液洒入步骤(2)的混合料中并搅拌均匀，乳酸菌液的用量为混合料总重量的2％；(4)将步骤(3)的混合料装入密闭容器内进行厌氧发酵，发酵时间约30天；(5)将发酵后的液化产品加热升温至60℃，用离心沉淀机离心去油，得到脱脂液体饲料；(6)在所得到的脱脂液体饲料中加入相当于其重量0.1％的大蒜素和0.1％的食盐搅拌均匀；(7)再在步骤(6)的脱脂液体饲料中加入还原型谷胱甘肽并使其终浓度为350mg/kg；(8)将步骤(7)的脱脂液体饲料密封在耐酸的容器内，室温下贮存，饲喂时将其泼洒到池塘里或与谷物饲料、蛋白饲料、青绿饲料等拌匀制成小团状投喂。本发明的有益效果：1、本发明制备方法操作简便，易于推广普及，所需人力、物力少，能源消耗低，原材料广泛，生产投资少、成本低，适用范围广，本发明不仅可以减少水产动物饲料中抗生素的使用，保障鱼产品的质量安全，还能够促进鱼苗生长发育，提高其成活率，降低死淘率，提高饲料效率，节省投入成本。2、本发明还能够实现废物的合理利用，实现鱼产品及其下脚料的资源化，减轻环境污染，具有节能环保的进步意义。3、本发明使用大蒜素、还原型谷胱甘肽(GSH)等辅料，不仅可以改善饲料的适口性、提高采食量和消化率、提高生产性能、增加肉质风味、增强鱼体免疫机能，还能延长饲料的贮存期。大蒜素具有较强的抗菌消炎作用，对多种球菌、杆菌、真菌、病毒等均有抑制或杀灭作用。还原型谷胱甘肽(GSH)能够清除自由基、过氧化物、重金属、微囊藻毒素及黄曲霉毒素等毒物，促进Fe、无机Se和Ca的吸收，并参与生物转化作用，能把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外，此外还能帮助保持正常的免疫系统功能。4、乳酸菌发酵的原理是在密闭缺氧的环境下乳酸菌大量繁殖并产生大量乳酸，降低了鱼废弃物的pH值，抑制了腐败菌的生长，同时由于乳酸的作用使鱼废弃物液化自溶，蛋白质分解，氨基酸、维生素和微量元素溶出，增加了饲料的营养含量，提高了消化率。具体实施方式下面将结合本发明实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，凡是其他在不脱离本发明核心的情况下做出的简单的变形或修改均落入本发明的保护范围。一种乳酸菌发酵型液体鱼饲料的制备方法，方法如下：(1)取食品级葡萄糖加水配成质量浓度为2％的葡萄糖溶液，按1％的接种量将乳酸菌接种于葡萄糖溶液中，置于30℃的条件下培养活化24小时，得到乳酸菌液；(2)将鱼废弃物绞碎，取相当于鱼废弃物10％的木薯粉、10％的木瓜粉、5％的废糖蜜混合加入到绞碎的鱼废弃物中搅拌均匀，得到混合料；(3)将步骤(1)的乳酸菌液洒入步骤(2)的混合料中并搅拌均匀，乳酸菌液的用量为混合料总重量的2％；(4)将步骤(3)的混合料装入密闭容器内进行厌氧发酵，发酵时间约30天；(5)将发酵后的液化产品加热升温至60℃，用离心沉淀机离心去油，得到脱脂液体饲料；(6)在所得到的脱脂液体饲料中加入相当于其重量0.1％的大蒜素和0.1％的食盐搅拌均匀；(7)再在步骤(6)的脱脂液体饲料中加入还原型谷胱甘肽并使其终浓度为350mg/kg；(8)将步骤(7)的脱脂液体饲料与玉米粉、大豆粉、麸皮、草浆、海藻粉拌匀，揉制成小团状投食喂鱼。下面将结合试验实例进一步说明本发明的积极作用：(1)试验鱼：平均体重约8.5g的草鱼幼鱼。(2)试验方法：将300尾草鱼幼鱼随机分成对照组与试验组两组，对照组与试验组各设3个重复，每个重复50尾，饲养在300L的循环流水过滤水族箱中。对照组喂普通饲料，试验组喂本发明所制饲料，试验期间定量投喂，每日分别于8∶30、11∶30和16∶30分3次投喂，日投喂量为体质量的4％。每天观察鱼只健康状况，记录死亡情况，每2周称重1次，试验期为8周。水温18-30℃，pH7.5，溶氧高于5mg/L，氨氮低于0.02mg/L。(3)试验数据采集：试验结束时，统计每箱草鱼的存活数量和称量每箱草鱼的总体质量，计算草鱼的特定生长率、存活率、饲料效率。每个重复随机取10尾草鱼，以无菌的10mL注射器及5号针头自尾动脉取血，分为2份，1份以肝素抗凝，制备抗凝血供测定白细胞数目；1份血液置于离心管中，经4000r/min离心5min，取上清血浆测定胰岛素样生长因子-1(IGF-1)。取抽过血的5尾草鱼，解剖，取肝胰脏称重，测定肝胰指数。(4)试验结果分析：表1：饲喂普通饲料与本发明所制饲料对草鱼特定生长率、存活率、饲料效率的影响注：表中同一栏内，右上角标有不同英文字母的数据之间具有显著差异(P<0.05)。特定生长率(％)＝(ln末体体重-ln初体体重)/饲养天数×100；存活率(％)＝(末尾数-初始尾数)/初始尾数×100；饲料效率(％)＝(末体体重-初体体重)/投饲总质量×100。由表1可见，饲喂本发明所制饲料比普通饲料的草鱼在特定生长率、存活率、饲料效率方面均有显著提高，说明本发明所制饲料可以促进草鱼的生长发育，具有显而易见的积极作用。表2：饲喂普通饲料与本发明所制饲料的草鱼的肝胰指数、胰岛素样生长因子-1含量和白细胞计数注：表中同一栏内，右上角标有不同英文字母的数据之间具有显著差异(P<0.05)。由表2可见，本发明所制饲料由于添加了350mg·kg-1的还原型谷胱甘肽(GSH)，因而饲喂出的草鱼其肝胰指数、胰岛素样生长因子-1及白细胞计数均比对照组显著提高。鱼类的肝胰指数是对长期和短期营养方式都很敏感的指标，肝脏的生长和发育往往受到饲料成分的影响。与对照组相比，试验组草鱼肝胰指数有不同程度升高，这可能是GSH促进了肝脏细胞DNA的合成，进而表现在草鱼肝胰指数有所增加。大量研究证实，血循环中的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)大部分由肝脏合成分泌。而本试验中摄食本发明所制饲料的试验组草鱼IGF-1活性明显提高，表明GSH促进了肝脏合成和分泌IGF-1的能力，进一步增强了肝脏细胞DNA合成能力，最终提高了肝胰指数。血循环中的IGF-1生物作用仅受生长激素的调节，而生长激素的促生长作用是通过IGF-1介导的，本试验中对照组草鱼IGF-1水平的提高说明在草鱼饲料中添加GSH能够调节草鱼生长激素水平，并最终达到促进草鱼生长的作用。这也恰与试验中草鱼特定生长率、饲料效率显著提高相对应。鱼类的嗜中性白细胞和单核细胞已经被证实具有很强的吞噬能力，相对于特异性免疫机能而言，这种能力对于比较低等的水生动物更为重要。白细胞的吞噬功能是动物非特异性免疫的重要组成部分。白细胞的溶酶体中含有溶菌酶、蛋白水解酶、髓过氧化酶等，这些酶对大多数微生物是致死性的。当白细胞受适当的刺激后，可产生前列腺素、凝血恶烷和三烯酸。因此，测定动物的白细胞数目在一定程度上能反映动物非特异性免疫能力。鱼类血液中白细胞数目可能因机体接触抗原性物质或者受到环境因子的刺激而上升。本试验结果表明，在草鱼饲料中添加GSH能够增加草鱼血液中白细胞数目，这恰与试验中草鱼存活率提高相对应，说明GSH通过刺激草鱼血液白细胞的产生从而进一步增强了草鱼的非特异性防御功能，进而达到增强抗病力的作用。