本发明属于保健食品的
技术领域：
，涉及脂质体及脂质体的制备方法，关键涉及一种壳聚糖修饰的芦笋脂质体及其制备方法。通过利用脂质体运载芦笋的活性成分可以延长其在体内的循环时间，使其功能因子的生物学活性进一步增强。
背景技术：
：随着社会的飞速发展，人们的工作压力不断增大，作息不规律，生活节奏严重紊乱等一系列外界因素，使大多数人处于亚健康状态，保健品和功能食品便应运而生，但由于天然产物中特定的功能因子含量较低，要提高其功效就需要改进其剂型以提高功能因子的生物利用度。纳米脂质体是目前公认的可提高包载物生物利用度的新型载体系统。目前，国内外制备的脂质体大多会添加一定的胆固醇以作为脂质体的膜材，但高胆固醇会引发动脉粥样硬化、冠心病等健康问题，随着人们追求健康食品的意识越来越强，胆固醇已被限制在食品以及保健品中的应用。发明一种水溶性物质的食品级纳米载体制备技术是目前亟待解决的问题。芦笋又名"荻笋"、"南荻笋"，为百合科植物石刁柏的嫩芽，在国际市场上享有"蔬菜之王"的美称，芦笋富含多种氨基酸、蛋白质和维生素，其含量均高于一般水果和蔬菜，特别是芦笋中的天冬酰胺和微量元素硒、钼、铬、锰等，具有调节机体代谢，提高身体免疫力的功效，在对高血压、心脏病、白血病、血癌、水肿、膀胱炎等的预防和治疗中，具有很强的抑制作用和药理效应。其中的活性成分芦笋皂苷具有增强免疫力、降血脂、促进睡眠、保护肝脏、抑制癌细胞增殖、治疗骨质疏松、抗糖尿病、延缓衰老、清热泻火、利水消肿、滋阴降火等功效。但单纯服用芦笋汁，其进入人体后只有少量的被吸收利用，大部分会经循环排出体外，不能有效的发挥其生物价值。技术实现要素：本发明的目的是提供一种壳聚糖修饰的芦笋脂质体及其制备方法，脂质体是一种类似于生物膜的双分子层囊泡，具有良好的生物相容性以及可生物降解的特性。通过将芦笋提取物包封进脂质体内，可以延长其在体内的循环时间，提高其功能因子的生物利用度。传统的脂质体的稳定性差、缓释效果不明显，这些缺点使它的应用受到限制，对脂质体进行功能修饰，可以进一步提高其稳定性，提高功能因子的功效发挥。本发明为实现其目的采用的技术方案是：一种壳聚糖修饰的芦笋脂质体，按重量份数计，包括以下组分：豆甾醇4-6份、卵磷脂30-90份、芦笋水提物5-20份、壳聚糖5-20份。一种壳聚糖修饰的芦笋脂质体的制备方法，采用薄膜水化法，包括以下步骤：A、按下述重量份数准备原料：豆甾醇4-6份、卵磷脂30-90份、芦笋水提物5-20份、壳聚糖5-20份；B、将豆甾醇，卵磷脂溶解于有机溶剂中，于20℃-70℃，20-70rpm的条件下，减压旋转蒸发去除有机溶剂，形成脂相薄膜,过高或过低的温度影响磷脂和甾醇的物理学特性，因而影响脂质体膜的形成，经过长期的创造性研究，总结出温度控制在20-70℃；减压旋转蒸发的转速是为了控制形成膜的厚度，经过长期的创造性研究，总结出只有在此转速才可以形成所需厚度的膜；C、取芦笋水提物加入到步骤B中得到的脂相薄膜中，于20℃-60℃，20-70rpm的条件下，旋转水化，形成脂质体粗悬液；20℃-60℃范围可以使磷脂和甾醇形成脂质体的物理学状态最适，有利于通过分子自组装形成所需的特性结构、粒径和形貌脂质体；转速控制是为了控制脂质体的形貌和尺寸的控制，过高的转速导致粒径尺寸会过小，过低的尺寸易出现脂质体的融合。D、将步骤C中得到的脂质体粗悬液进行震荡处理，得到芦笋脂质体；E、取壳聚糖溶解于水中，得到壳聚糖溶液；F、将步骤D得到的芦笋脂质体与步骤E得到壳聚糖溶液，按体积比(0.8-1.2)：(0.8-1.2)的比例混合，得到壳聚糖修饰的芦笋脂质体，当芦笋脂质体与壳聚糖溶液的体积比大于或小于这个范围时，无法制备出壳聚糖修饰的脂质体，得到的修饰后的脂质体稳定性差。步骤A中所述的有机溶剂为无水乙醇。步骤B中减压旋转蒸发的时间为1-4h，经过长期的创造性研究，将时间控制在该范围内，有助于产品的稳定性。步骤C中旋转水化的时间为1-4h。步骤D中震荡处理采用超声波进行超声处理2-20min。本发明通过超声使脂质体由多室变成单室，同时使脂质体的粒径变小、分散性更好。步骤E中，壳聚糖溶液的浓度为0.0001-0.01g/mL。将芦笋脂质体与壳聚糖溶液混合后，进行磁力搅拌1-4h。本发明的有益效果是：1、本发明制备的脂质体采用豆甾醇，在取代了胆固醇的同时，能有效的降低心血管疾病的发生率。2、制备方法操作简便，易于控制。3、能实现芦笋中功能因子的缓释效果，增加芦笋中有益的功能因子在体内的循环时间，促进人体的吸收利用，提高生物利用度，提高缓释和长效作用。4、本发明芦笋脂质体的脂质粒径为100-250nm。5、本发明芦笋脂质体结构为外层由磷脂双分子层组成的囊膜，内部的空腔里包封的芦笋水提物。附图说明图1是本发明实施例1所得芦笋脂质体透射电子显微镜图。图2是本发明实施例2所得芦笋脂质体透射电子显微镜图。图3是本发明实施例3所得芦笋脂质体透射电子显微镜图。图4是本发明实施例1所得芦笋脂质体zeta电位图。图5是本发明实施例2所得芦笋脂质体zeta电位图。图6是本发明实施例3所得芦笋脂质体zeta电位图。图7是本发明测定前绘制的芦笋皂苷标准曲线图。图8是实施例1芦笋脂质体粒径分布图。图9是实施例2芦笋脂质体粒径分布图。图10是实施例3芦笋脂质体粒径分布图。具体实施方式下面结合附图及具体实施例对本发明作进一步的说明。本发明所用芦笋水提物可由现有方法制备，也可以用下述方法制备：取干燥芦笋茎叶加水于80-100℃提取40-100min，提取次数1-2次，弃去残渣，抽滤，合并芦笋汁，得到芦笋水提物。其中芦笋干燥芦笋茎叶与水的重量比为1：(10-20)。实施例1取4mg豆甾醇(购自上海源叶生物技术有限公司)，24mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)，溶解于4mL无水乙醇中，在20℃，20rpm的条件下，减压旋转蒸发1h去除无水乙醇，形成脂相薄膜。取芦笋水提物6mL作为水相，加入到脂相薄膜中，在10℃，20rpm的条件下，旋转水化1h形成脂质体粗悬液。将得到的粗悬液在冰浴下利用超声波细胞破碎仪进行超声(2s/2s，50％W)2min，得到芦笋脂质体。将0.001g的水溶性壳聚糖溶解于10mL无菌水中，搅拌0.5h，得到0.0001g/mL壳聚糖溶液。取1mL的芦笋脂质体与1mL的壳聚糖溶液混合，经磁力搅拌0.5h，得到壳聚糖修饰的芦笋脂质体。应用透射电子显微镜对壳聚糖修饰的芦笋脂质体进行形貌表征，如图1所示，纳米脂质体呈球形。利用激光粒度仪检测壳聚糖修饰的芦笋脂质体带电荷状态，如图4所示，从图中可以看出脂质体带正电荷。利用高效液相色谱仪测定壳聚糖修饰的芦笋脂质体的芦笋皂苷的包封率为83.77％，标准曲线如图7所示。实施例2取4mg豆甾醇(购自上海源叶生物技术有限公司)，48mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)，溶解于7mL无水乙醇中，在45℃，45rpm的条件下，减压旋转蒸发2.5h去除无水乙醇，形成脂相薄膜。取芦笋水提物9mL作为水相，加入到脂相薄膜中，在35℃，45rpm的条件下，旋转水化2.5h形成脂质体粗悬液。将得到的粗悬液在冰浴下利用超声波细胞破碎仪超声(2s/2s，50％W)11min，即得到芦笋纳米脂质体。将0.05g的水溶性壳聚糖溶解于10mL无菌水中，溶解4h，得到0.005g/mL壳聚糖溶液。取5mL的芦笋脂质体与5mL的壳聚糖溶液，磁力搅拌混合4h，得到壳聚糖修饰的脂质体。应用透射电子显微镜对壳聚糖修饰的芦笋脂质体进行形貌表征，如图2所示，纳米脂质体呈球形。利用激光粒度仪检测壳聚糖修饰的芦笋脂质体带电荷状态，如图5所示，从图中可以看出脂质体带正电荷。利用高效液相色谱仪测定壳聚糖修饰的芦笋脂质体中芦笋皂苷的包封率为86.54％,标准曲线如图7所示。实施例3取4mg豆甾醇(购自上海源叶生物技术有限公司)，72mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)，溶解于10mL无水乙醇中，在70℃，70rpm的条件下，减压旋转蒸发4h去除无水乙醇，形成脂相薄膜。取芦笋提取物16mL作为水相，加入到脂相薄膜中，在60℃，70rpm的条件下，旋转水化4h形成脂质体粗悬液。将得到的粗悬液在冰浴下超声波细胞破碎仪超声(2s/2s，50％W)20min，即得到芦笋纳米脂质体。将0.1g的壳聚糖溶解于10mL无菌水中，搅拌8h，得到0.01g/mL壳聚糖溶液。取10mL的芦笋纳米脂质体与10mL的壳聚糖溶液，磁力搅拌混合8h，得到壳聚糖修饰的脂质体。应用透射电子显微镜对壳聚糖修饰的芦笋脂质体进行形貌表征，如图3所示，纳米脂质体呈球形。利用激光粒度仪检测壳聚糖修饰的芦笋脂质体带电荷状态，如图6所示，从图中可以看出脂质体带正电荷。利用高效液相色谱仪测定壳聚糖修饰的芦笋脂质体的芦笋皂苷包封率为88.05％，标准曲线如图7所示。实施例4本发明壳聚糖修饰的芦笋脂质体的稳定性试验：将已经制备好的纳米脂质体分别放置在4℃和25℃，测定14天中包封率的变化，结果见表1,表1常温和4℃下脂质体包封率随时间的变化项目初始包封率1d7d14d常温的包封率(％)87.385.580.279.84℃包封率(％)89.187.383.780.2根据上述表1及附图8-10，可以明显的看出，本发明制备的壳聚糖修饰的芦笋脂质体稳定性好，图8可知，平均粒径为81.00nm，PDI为0.246；图9平均粒径为79.36nm，PDI为0.258；图10平均粒径为79.73nm，PDI为0.222。由图8-10可以看出得到的脂质体平均粒径小，分散性良好。本发明制备的壳聚糖修饰的芦笋脂质体利用高效液相色谱仪测定壳聚糖修饰的芦笋脂质体的芦笋皂苷的包封率为72.77-90.5％。当前第1页1 2 3