一种具有抗氧化作用的食用睡莲乙醇提取物的制备及应用的制作方法

本发明涉及天然活性物质的提取领域，具体是一种具有抗氧化作用的食用睡莲乙醇提取物的制备及其应用。

背景技术：

睡莲（学名：nymphaeal.）；睡莲菜，瑞莲为睡莲的别称，是睡莲科睡莲属的常年生水生草本植物，在众多的水生花卉之中睡莲是当之无愧的高品质花卉，其观赏价值非常高。睡莲的外型与荷花极为相似，其不同之处在于荷花的花和叶子一般情况下露出水面，然而睡莲的花和叶子则多数漂浮在水面上。睡莲因其夜卷昼舒的特性被人们称之为“花中的睡美人”。叶丛生浮于水面；基部的心耳尖锐或钝圆，全缘；叶柄细长。花萼的基部呈四方形，萼片4；花瓣8～17，多层；雄蕊多数，3～4层，花药黄色；浆果球形，松软，有多数细小种子。胚胎素是食用睡莲中含量最为丰富的物质，因此被人们冠之以“纯洁和生命之花”，受到了众多的宗教的喜爱和推崇。用完完整整的一朵食用睡莲特别制作而成的睡莲花茶。根据对睡莲的各种营养成分进行分析，其结果表现出睡莲中含有17种以上氨基酸，睡莲蛋白为较优质蛋白。分析的结果还十分表现出睡莲中有贮藏丰富的vc、黄酮甙和微量元素锌，这些物质相互配合可以表现出十分强大的排铅功能。急性动物毒性实验、微核试验及精子畸变实验均能够充分展现出睡莲是它一种可靠安全并且没有任何毒副作用。睡莲花粉具有丰富的营养，具有完全性、均衡性、浓缩性等等特点，并且具有极其良好的利用开发的前景。

从植物中提取天然活性物质的提取方法中的传统方法主要包括的方法有蒸馏法，压榨法，浓缩法，等等。因为传统的提取法方法不用依靠特殊装备和仪器，所以被广泛应用。而然传统提取方法的缺点也比较明显。例如提取的时间过长，操作步骤复杂繁琐，极低的提取效率等。并且传统的提取方法会使得样品消耗过大，会造成大量浪费。而且有些溶剂能对实验操作者身体健康造成一定不良的影响，甚至会污染周围的环境。由于人们对天然活性物质的认识的进一步了解深入，因此对建立更加简单，有效的提取技术的渴求变得更加的强烈。近些年以来，现代提取技术的发展有非常明显加快的趋势，主要包括有超零界流体萃取技术，超声提取法，微波提取法，酶提取法等。现有技术如授权公告号为cn104127451b的中国发明专利，公开了一种从石榴花中同时提取多酚、类黄酮和三萜类的方法，是以石榴花为原料，石榴花先以含2%～3%浓盐酸的甲醇溶液提取，提取液浓缩后以水溶解，其中多酚和类黄酮进入水溶液，三萜类留在沉淀中，水溶液再用有机溶剂萃取，萃取后的水相经浓缩干燥即得多酚提取物，有机相经回收溶剂后干燥得到类黄酮提取物；而沉淀部分先经ph值8～9的碱性乙醇溶解，过滤，滤液调整ph值至5～6，回收乙醇,形成的沉淀部分经过干燥即得三萜类提取物。该方法能更有效利用石榴花资源，同时提取多酚、类黄酮和三萜类。该方法实现了从一批石榴花中提取三种活性成分的目的。所得产品的收率、纯度均较高，可满足现有市售要求，充分合理利用石榴花资源。该方法操作步骤复杂且会产生很多对环境有害的废弃物如甲醇和盐酸等，这些物质在产品中会有一定量的残留，对人体会造成伤害。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种提取率高，提取的物质活性高，抗氧化性强，绿色安全的食用睡莲乙醇提取物的制备。

1）预处理：将食用睡莲洗净，干燥，粉碎，过20~50目筛；

2）醇提：在预处理后的睡莲粉末中按料液体积比1:12~1:20加入70~80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入助溶剂：0.2~0.4份冰醋酸，1~5份二甲基亚砜溶液和0.003~0.007份对羟基苯甲酸甲酯，在超声环境下进行萃取，将萃取液均分，重复萃取3~5次，超声频率为200~300w，超声萃取时间为20~40min，萃取温度为55~65℃。超声波能使体系宏观流动加快并且颗粒固体之间的碰撞加快，使得传质的边界层部分变得极为细薄，传质速率得到了显而易见的增强。由于超声波的搅拌，粉碎的极为特殊作用，能够穿透食用睡莲细胞的细胞壁，能够让乙醇水溶液以最快的速度进入到植物细胞细胞质中，以便于溶解出其中的活性抗氧化物质。超声提取能够明显的缩短其提取的时间，并且提取的条件适中温和，使得提取产率有了明显提高。萃取液乙醇水溶液中加入助溶剂并重复萃取，能提高睡莲的活性抗氧化物质在其中的溶解度，提高提取产率；

3）制备乙醇提取物：合并步骤2得到的萃取液，减压过滤，浓缩后离心，离心速率为6000~10000r/min，取上清液，再次减压浓缩得到食用睡莲乙醇提取物。制备的食用睡莲乙醇提取物提取产率高，活性高，抗氧化性强。

用途：一种具有抗氧化作用的食用睡莲乙醇提取物用于制备抗氧化剂的用途，抗氧化剂能清楚人体中的自由基，抗衰老，增强机体免疫力和抗感染能力。

与现有技术相比，本发明的优点在于：使用70~80%乙醇水溶液重复萃取食用睡莲粉末，超声波辅助提取。超声波能够穿透食用睡莲细胞的细胞壁，让乙醇水溶液以最快的速度进入到植物细胞细胞质中，以便于溶解出其中的活性抗氧化物质；超声提取能够明显的缩短其提取的时间，并且提取的条件适中温和，使得提取产率有了明显提高；萃取液70~80%乙醇水溶液中加入助溶剂并重复萃取，能提高睡莲的活性抗氧化物质在其中的溶解度，提高提取产率；制备的食用睡莲乙醇提取物提取产率高，活性高，抗氧化性强；提取过程中不添加对人体有害的物质，绿色安全；操作步骤简单，原料便宜，能量消耗少，经济价值高。

附图说明

图1为提取物甲醇溶液（0.25mg/ml）uv光谱图；

图2为abts自由基清除能力测定图；

图3为还原亚铁离子能力测定图；

图4为dpph自由基清除能力测定图；

图5为超氧阴离子自由基清除能力测定图；

图6为羟自由基清除能力测定图。

附图标记说明：曲线1为抗坏血酸乙醇溶液，曲线2为样品乙醇。

具体实施例

下面通过附图和具体实施例对本发明方案作进一步说明：

实施例1：

一种具有抗氧化作用的食用睡莲乙醇提取物的制备，具体操作步骤为：

1）预处理：将食用睡莲洗净，干燥，粉碎，过20~50目筛；

2）醇提：在预处理后的睡莲粉末中按料液体积比1:12~1:20加入70~80%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入助溶剂：0.2~0.4份冰醋酸，1~5份二甲基亚砜溶液和0.003~0.007份对羟基苯甲酸甲酯，在超声环境下进行萃取，将萃取液均分，重复萃取3~5次，超声频率为200~300w，超声萃取时间为20~40min，萃取温度为55~65℃。超声波能使体系宏观流动加快并且颗粒固体之间的碰撞加快，使得传质的边界层部分变得极为细薄，传质速率得到了显而易见的增强。由于超声波的搅拌，粉碎的极为特殊作用，能够穿透食用睡莲细胞的细胞壁，能够让乙醇水溶液以最快的速度进入到植物细胞细胞质中，以便于溶解出其中的活性抗氧化物质。超声提取能够明显的缩短其提取的时间，并且提取的条件适中温和，使得提取产率有了明显提高。萃取液乙醇水溶液中加入含有二甲基亚砜、对羟基苯甲酸甲酯组合物的助溶剂并重复萃取，能提高睡莲的活性抗氧化物质在其中的溶解度并能使之不失活，提高提取产率；

3）制备乙醇提取物：合并步骤2得到的萃取液，减压过滤，浓缩后离心，离心速率为6000~10000r/min，取上清液，再次减压浓缩得到食用睡莲乙醇提取物。制备的食用睡莲乙醇提取物提取产率高，活性高，抗氧化性强。

用途：一种具有抗氧化作用的食用睡莲乙醇提取物用于制备抗氧化剂的用途，抗氧化剂能清楚人体中的自由基，抗衰老，增强机体免疫力和抗感染能力。

实施例2：

一种具有抗氧化作用的食用睡莲乙醇提取物的制备，最优选操作步骤为：

1）预处理：将食用睡莲洗净，干燥，粉碎，过40目筛；

2）醇提：在预处理后的睡莲粉末中按料液体积比1:16加入70%乙醇水溶液，乙醇水溶液中加入助溶剂：0.3份冰醋酸，4份二甲基亚砜溶液和0.005份对羟基苯甲酸甲酯，在超声环境下进行萃取，将萃取液均分，重复萃取3~5次，超声频率为250w，超声萃取时间为30min，萃取温度为60℃。超声波能使体系宏观流动加快并且颗粒固体之间的碰撞加快，使得传质的边界层部分变得极为细薄，传质速率得到了显而易见的增强。由于超声波的搅拌，粉碎的极为特殊作用，能够穿透食用睡莲细胞的细胞壁，能够让乙醇水溶液以最快的速度进入到植物细胞细胞质中，以便于溶解出其中的活性抗氧化物质。超声提取能够明显的缩短其提取的时间，并且提取的条件适中温和，使得提取产率有了明显提高。萃取液乙醇水溶液中加入助溶剂并重复萃取，能提高睡莲的活性抗氧化物质在其中的溶解度，提高提取产率；

3）制备乙醇提取物：合并步骤2得到的萃取液，减压过滤，浓缩后离心，离心速率为8000r/min，取上清液，再次减压浓缩得到食用睡莲乙醇提取物。制备的食用睡莲乙醇提取物提取产率高，活性高，抗氧化性强。

4）提取物在甲醇溶液中的uv光谱特征：由图1可知：睡莲乙醇提取物的甲醇溶液在200～400nm波长范围内有两个紫外吸收带，表示出黄酮类化合物的特征吸收，所以睡莲乙醇提取物中有类黄酮。

5）食用睡莲乙醇提取物的抗氧化活性测定：

a．abts自由基清除能力测定：根据图2可知：在实验浓度范围内，抗坏血酸abts自由基清除能力极强，均在97%以上，而低浓度的睡莲乙醇提取物abts自由基清除能力则不理想。但乙醇提取物abts自由基清除能力表现出较好的浓度依赖性抑制作用，当提取物浓度达到1.0mg/ml时，abts自由基清除率高达99.03%，超过了同浓度抗坏血酸清除abts自由基的能力。

b．还原能力测定：图3表明：在实验浓度范围内，抗坏血酸的还原能力很明显，且与其浓度的的大小成正性相关，即抗坏血酸的浓度越大，其亚铁离子还原能力越强；睡莲乙醇提取物的还原能力则相对较低，尤其在低浓度下，随着提取物浓度的增加，其还原能力相差甚微，只有在0.75mg/ml和1.0mg/ml组间的斜率达到1.2，但与抗坏血酸近2.0的增长速率还有一定差距。

c．从图4可以看出：在实验浓度范围内，抗坏血酸浓度为0.5mg/ml时，其dpph自由基清除能力则达到近饱和浓度，dpph自由基清除率亦有95.61%的理想值，相当于同浓度的睡莲乙醇提取物清除能力的1.86倍。随着乙醇提取物的浓度增加，dpph自由基清除也随之增加，当其浓度达到1.0mg/ml时，也表现出较强的dpph自由基清除能力，清除率为83.38%，接近于同浓度的抗坏血酸清除dpph自由基的能力。

d．由图5可知：在实验浓度范围内，抗坏血酸在0.1mg/ml即有较好的超氧阴离子自由基清除能力，清除率为61.38%，且随着浓度的增加，其超氧阴离子清除能力呈现平缓上升趋势；睡莲乙醇提取物则不然，其浓度为0.25mg/ml时，超氧阴离子清除率仅有25.36%，当浓度达到1.0mg/ml，超氧阴离子清除率则迅速增至86.74%，其平均增长速率约为抗坏血酸的1.8倍，且在0.75～1.0mg/ml两组浓度间的增长速率最为明显。

e．图6可知：在实验浓度范围内，睡莲乙醇提取物及抗坏血酸溶液对羟自由基的清除能力与dpph自由基清除能力截然相反。乙醇提取物在低浓度则有理想的羟自由基清除能力，且很快趋于平稳，在浓度为0.7mg/ml时与抗坏血酸溶液有着相同的羟自由基清除能力；抗坏血酸溶液羟自由基清除率则由初始浓度时的35.08%迅速增长至最大浓度时的97.12%。

食用睡莲结构表征显示其含有一定量的黄酮类化合物，在实验质量浓度范围内，睡莲乙醇提取物具有一定的还原能力和良好的自由基清除能力，且dpph自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力以及abts自由基清除能力均表现为浓度依赖性抑制作用，当浓度达到1.0mg/ml时，其自由基清除率分别为83.38%、86.74%和99.03%；与同浓度的抗坏血酸相比较，分别相当于抗坏血酸对应自由基清除率的0.86、0.89和1.01倍。此外，睡莲乙醇提取物在低浓度即有理想的羟自由基清除能力，且在其浓度仅为0.25mg/ml时，羟自由基清除能力即临近饱和浓度；尤其在浓度为0.1mg/ml时，相当于同浓度抗坏血酸溶液羟自由基清除能力的近2倍。然而，以上实验数据只是建立在食用睡莲乙醇粗提物抗氧化活性的基础研究上，具体抗氧化活性成分尚未明确，但足以证明睡莲乙醇提取物具有较好的抗氧化作用，可作为一种潜在的天然抗氧化剂或作为一种极具潜力的待开发食品。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。