本发明涉及生物发酵技术领域，具体涉及一种复合微生物饲料添加剂及其制备方法。
背景技术：
微生物饲料添加剂是采用农业部认可的有益微生物经发酵制成的生物制剂，是抗生素的最佳替代品。用于提高畜、禽的健康水平的人工培养菌群及其代谢产物，可调整畜、禽体内的微生态失调，保持微生态平衡。是激发动物自身有益菌种繁殖增长，同时抵制有害菌系生长的微生物制品。通过改善动物肠道菌群生态平衡而发挥有益作用，以提高动物健康水平、提高抗病能力、提高消化能力的一类产品。是有效解决，疾病泛滥、病菌耐药、免疫能力下降、成活率降低、养殖效益下降的有效手段。是畜牧业可持续发展的动力。
微生物饲料添加剂主要包括中药微生态制剂和益生素类制剂。中药微生态制剂也称为第四代益生素，性状为潮湿粉末或养殖场自行发酵的活菌发酵液，是乳酸菌发酵中药微生态活菌制剂。优点是活菌含量高，缺点是不耐高温。益生素类制剂是以枯草芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌等多菌种发酵的一类微生物制剂的总称。性状为干燥粉末，载体多为稻壳粉或钙粉，产品需要经过加工、烘干、包装等工艺，所含活菌数量很小，多为死的菌体或休眠状态的芽孢类菌体。优点是耐加工，可以供饲料厂使用，缺点是活菌数量少，需长期使用才有效。
技术实现要素：
本发明为了解决上述提供一种活菌数量多，耐高温，提高饲料吸收率，促生长发育的一种复合微生物饲料添加剂。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案 ：
所述饲料添加剂由以下成份及其重量组分组成：德氏乳杆菌40～60份、枯草芽孢杆菌10～20份、酿酒酵母菌10～20份、酪氨酸甜菜碱0.1～1份、6-羟基犬尿酸0.01～0.1份和寡糖5～10份。复合微生物饲料添加剂的方法，其包括以下步骤 ：采用固体发酵工艺制备德氏乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌 ，采用酶解法制备寡糖；德氏乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌以及酪氨酸甜菜碱、6-羟基犬尿酸和寡糖进行混合加工，得到成品。
优选地，各菌种活细胞计数为 ：德氏乳杆菌 (1～10)*10 8 cfu/g，枯草芽孢杆菌(1～10)*10 9 cfu/g，酿酒酵母菌 (5～10)*10 9 cfu/g，总菌数≥ 3*10 9 cfu/g。
优选地，德氏乳杆菌的制备方法具体包括以下步骤 ：制备一级菌种 ：
德氏乳杆菌试管菌平板划线或是稀释涂平板，30℃恒温培养 2～3d 得单菌落，挑取单菌落孢子接种到麸皮试管中，30℃恒温培养 2～3d 至德氏乳杆菌长到试管底部，得到试管菌 ；制备二级菌种 ：接种试管菌到盛有麸皮培养基的锥形瓶，30℃恒温培养 24h，翻瓶，将结块打散继续培养，培养至 48～60h 停止培养，得到锥形瓶菌种 ；扩大培养三级菌种 ：锥形瓶内菌种加入两倍的灭菌水，混匀备用，接种锥形菌种到盛有麸皮培养基的培养瓶中，30℃恒温培养 24h，扣瓶，将结块打散继续培养，培养至 48～60h 停止培养 ；发酵床固体发酵生产德氏乳杆菌制剂 ：投料、润料、蒸煮灭菌、降温、接种、厚层通风培养得到成品。
优选地，枯草芽孢杆菌的制备方法具体如下所述 ：制备一级种子：甘油管保存的菌种LB固体培养基平板划线，37℃恒温培养24h，得单菌落。挑单菌落到盛有 LB 液体培养基的锥形瓶中，37℃震荡培养 12h。制备二级种子：一级种子液按照 1％接种到盛有 300mL LB 液体培养基的 500mL锥形瓶中，37℃震荡培养 12h，备用。发酵床固体发酵生产枯草芽孢杆菌：投料→润料→蒸煮灭菌→降温→接种→厚层通风培养→成品，培养基主要成分为 ：麸皮，豆粕及辅料，培养基定量称重，严格配比，润料时添加的自来水体积在流量计下严格添加。所有设备用自来水严格清洗至无杂物。所有原料在蒸煮锅内混匀，装料后旋紧进出口盖，蒸煮锅以一定的转速转动，培养基得以翻动，通入蒸气，达到一定温度后保温灭菌，保证灭菌条件 ：121℃，30min 严格灭菌。所有的蒸汽灭菌的控制在电脑系统实时记录，相应的保证设施为压力传感器，温度传感器。灭菌完成后，物料传输到摊凉机上进行降温。降温后传输到混料机上进行接种，接种完毕运用输送机将物料输送到发酵床上。培养过程的管理 ：物料铺满发酵床后即进入培养环节，生长到一定阶段物料会结块，需通过翻曲机来进行翻料 ；在生长过程中，微生物的生长和繁殖需要氧气及水分，发酵温度需保持在 35～40℃左右，每个发酵床对应一个空调室来控制发酵室和物料的温度和湿度。培养过程的结束 ：物料进行培养 24～48h 后，培养过程完成，培养完成后运用在线烘干，通 60℃以下的热风将物料干燥至水分含量为 10％左右。干燥完成后进行粉碎，检测，包装。
酿酒酵母菌采取固体发酵制成，具体工艺如下 ：一级种制备：甘油管保存菌种 MRS 固体平板划线，37℃恒温培养 24h，得单菌落。挑取单菌落到盛有 MRS 液体培养基的 PA 瓶中，37℃静置培养 12h。二级种制备：一级种子液按照1％接种到盛有300mL MRS液体培养基的500mL锥形瓶中，37℃静置培养 12h，备用。浅盘发酵：按照 1～5％接种量将二级种子液均匀接种于酿酒酵母菌固体发酵培养基中，培养基装于不锈钢浅盘中，厚度 6-8cm。37℃静止发酵 36～48h，45-50℃烘干粉碎，100 目过筛得成品。优选地，所述固体发酵工艺采取的培养基包括麸皮培养基以及酿酒酵母菌固体发酵培养基。优选地，所述麸皮培养基包括麸皮、玉米芯、豆粕、酒糟、磷酸二氢钾以及水，其质量比为 16 ∶ 2 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 0.1 ∶ 25。优选地，所述酿酒酵母菌固体发酵培养基包括麸皮、玉米粉、豆粕、无机盐、磷酸盐以及水，其质量比为 60 ∶ 20 ∶ 20 ∶ 1 ∶ 0.5 ∶ 500。优选地，所述复合微生物饲料添加剂应用于畜禽养殖业。
本发明的一种复合微生物饲料添加剂，其包括德氏乳杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌以及寡糖，能够抑制有害菌的繁殖，使肠内菌群保持平衡；产生消化酶，能够合成维生素可以产生淀粉酶和蛋白酶等消化酶以及维生素B群；能够增强免疫作用，通过刺激肠道内免疫系细胞，增加局部抗体的形成，从而增加巨噬细胞活性。微生物饲料添加剂可使肝脏内大量蓄集有增强免疫作用的维生素A；还能优化生态环境。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1：
一种复合微生物饲料添加剂，由以下质量分数的原料组成 ：德氏乳杆菌 60 份，枯草芽孢杆菌 20 份，酿酒酵母菌 15 份，寡糖 5 份。
复合微生物饲料添加剂中各菌种活细胞计数为 ：德氏乳所述饲料添加剂由以下成份及其重量组分组成：德氏乳杆菌40～60份、枯草芽孢杆菌10～20份、酿酒酵母菌10～20份、酪氨酸甜菜碱0.1～1份、6-羟基犬尿酸0.01～0.1份和寡糖5～10份。复合微生物饲料添加剂的方法，其包括以下步骤 ：采用固体发酵工艺制备德氏乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌 ，采用酶解法制备寡糖；德氏乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌以及酪氨酸甜菜碱、6-羟基犬尿酸和寡糖进行混合加工，得到成品，酪氨酸甜菜碱、6-羟基犬尿酸通过寡糖具有保活菌种的作用，明显提高活菌数量，从而提高饲料的利用率，在一定程度上提高了饲料效果，其中寡糖具有增强动物免疫力防传染病的作用。 优选地，各菌种活细胞计数为 ：德氏乳杆菌 (1～10)*10 8 cfu/g，枯草芽孢杆菌(1～10)*10 9 cfu/g，酿酒酵母菌 (5～10)*10 9 cfu/g，总菌数≥ 3*10 9 cfu/g。
优选地，德氏乳杆菌的制备方法具体包括以下步骤 ：制备一级菌种 ：
德氏乳杆菌试管菌平板划线或是稀释涂平板，30℃恒温培养 2～3d 得单菌落，挑取单菌落孢子接种到麸皮试管中，30℃恒温培养 2～3d 至德氏乳杆菌长到试管底部，得到试管菌 ；制备二级菌种 ：接种试管菌到盛有麸皮培养基的锥形瓶，30℃恒温培养 24h，翻瓶，将结块打散继续培养，培养至 48～60h 停止培养，得到锥形瓶菌种 ；扩大培养三级菌种 ：锥形瓶内菌种加入两倍的灭菌水，混匀备用，接种锥形菌种到盛有麸皮培养基的培养瓶中，30℃恒温培养 24h，扣瓶，将结块打散继续培养，培养至 48～60h 停止培养 ；发酵床固体发酵生产德氏乳杆菌制剂 ：投料、润料、蒸煮灭菌、降温、接种、厚层通风培养得到成品。
优选地，枯草芽孢杆菌的制备方法具体如下所述 ：制备一级种子：甘油管保存的菌种LB固体培养基平板划线，37℃恒温培养24h，得单菌落。挑单菌落到盛有 LB 液体培养基的锥形瓶中，37℃震荡培养 12h。制备二级种子：一级种子液按照 1％接种到盛有 300mL LB 液体培养基的 500mL锥形瓶中，37℃震荡培养 12h，备用。发酵床固体发酵生产枯草芽孢杆菌：投料→润料→蒸煮灭菌→降温→接种→厚层通风培养→成品，培养基主要成分为 ：麸皮，豆粕及辅料，培养基定量称重，严格配比，润料时添加的自来水体积在流量计下严格添加。所有设备用自来水严格清洗至无杂物。所有原料在蒸煮锅内混匀，装料后旋紧进出口盖，蒸煮锅以一定的转速转动，培养基得以翻动，通入蒸气，达到一定温度后保温灭菌，保证灭菌条件 ：121℃，30min 严格灭菌。所有的蒸汽灭菌的控制在电脑系统实时记录，相应的保证设施为压力传感器，温度传感器。灭菌完成后，物料传输到摊凉机上进行降温。降温后传输到混料机上进行接种，接种完毕运用输送机将物料输送到发酵床上。培养过程的管理 ：物料铺满发酵床后即进入培养环节，生长到一定阶段物料会结块，需通过翻曲机来进行翻料 ；在生长过程中，微生物的生长和繁殖需要氧气及水分，发酵温度需保持在 35～40℃左右，每个发酵床对应一个空调室来控制发酵室和物料的温度和湿度。培养过程的结束 ：物料进行培养 24～48h 后，培养过程完成，培养完成后运用在线烘干，通 60℃以下的热风将物料干燥至水分含量为 10％左右。干燥完成后进行粉碎，检测，包装。
酿酒酵母菌采取固体发酵制成，具体工艺如下 ：一级种制备：甘油管保存菌种 MRS 固体平板划线，37℃恒温培养 24h，得单菌落。挑取单菌落到盛有 MRS 液体培养基的 PA 瓶中，37℃静置培养 12h。二级种制备：一级种子液按照1％接种到盛有300mL MRS液体培养基的500mL锥形瓶中，37℃静置培养 12h，备用。浅盘发酵：按照 1～5％接种量将二级种子液均匀接种于酿酒酵母菌固体发酵培养基中，培养基装于不锈钢浅盘中，厚度 6-8cm。37℃静止发酵 36～48h，45-50℃烘干粉碎，100 目过筛得成品。优选地，所述固体发酵工艺采取的培养基包括麸皮培养基以及酿酒酵母菌固体发酵培养基。优选地，所述麸皮培养基包括麸皮、玉米芯、豆粕、酒糟、磷酸二氢钾以及水，其质量比为 16 ∶ 2 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 0.1 ∶ 25。优选地，所述酿酒酵母菌固体发酵培养基包括麸皮、玉米粉、豆粕、无机盐、磷酸盐以及水，其质量比为 60 ∶ 20 ∶ 20 ∶ 1 ∶ 0.5 ∶ 500。优选地，所述复合微生物饲料添加剂应用于畜禽养殖业。
实施例2
一种复合微生物饲料添加剂，由以下质量分数的原料组成 ：德氏乳杆菌 50 份，枯草芽孢杆菌 20 份，酿酒酵母菌 20 份，寡糖 10 份。
复合微生物饲料添加剂中各菌种活细胞计数为 ：德氏乳杆菌 4*10 8 cfu/g，枯草芽孢杆菌 10*10 9 cfu/g，酿酒酵母菌 5*10 9 cfu/g，总菌数 3*10 9 cfu/
实施例 3
一种复合微生物饲料添加剂，由以下质量分数的原料组成 ：德氏乳杆菌 55份，枯草芽孢杆菌 15份，酿酒酵母菌 20份，寡糖 10份。
复合微生物饲料添加剂中各菌种活细胞计数为 ：德氏乳杆菌 5*10 8 cfu/g，枯草芽孢杆菌 9*10 9 cfu/g，酿酒酵母菌 10*10 9 cfu/g。
对上述实施例 1-3 所得复合微生物饲料添加剂分别进行效果测试，投料对象是 22
日龄健康断奶的仔猪，共 100 头，随机分为 4 组，每组 25 头。对照组喂全价配合饲料 ；实验组 1 喂添加实施例 1 复合微生物饲料添加剂的配合饲料 ；实验组 2 喂添加实施例 2 复合微生物饲料添加剂的配合饲料 ；实验组3喂添加实施例3复合微生物饲料添加剂的配合饲料。全都不进行抗生素等药物的防控，日粮及其他饲养管理方法完全相同，饲喂 30d，结果如表1所示。由表可知，饲喂本发明公布的复合微生物饲料添加剂能显著提高猪的免疫力及抗病力，同时对猪的日增重效果明显，这大大节约了养猪业的生产成本。
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注 ：腹泻率＝ { 总腹泻次数 /( 试验猪头数 * 试验天数 )}*100％
最后，尚需注意的是，以上列举的仅是本发明的几个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。