本发明属于酵素技术领域，具体涉及一种提高水果酵素中sod的制备方法。
背景技术：
酵素存在于所有活的动植物体内，是维持机体正常功能，消化食物，修复组织等生命活动的一种必需物质。随着年龄的增长和饮食安全、生活环境等问题，人体内的酵素含量在逐年的下降，身体会由于酵素的流失使身体代谢速率下降，容易产生亚健康和慢性病等问题，逐年呈现老化的趋势。若没有酵素，生化反应将无法进行，五大营养素都将变得对机体毫无用处，生命现象将会停止。补充酵素，可以让人体内所有生命活动会有条不紊的进行，让我们的身体时刻保持活力。
超氧化物歧化酶orgotein(superoxidedismutase,sod)，简称sod。sod是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充sod具有抗衰老的特殊效果。超氧化物歧化酶是1938年首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对sod的研究己有七十多年的历史。1969年mccord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。
酵素生产过程中所使用的酵母菌含有丰富的sod，但sod属于胞内酶，需要细胞破裂后方可释放出来，因此，如何有效高效的释放酵母菌含有的sod提高产品的特性物质含量成为一个迫切的技术突破点。目前实验室阶段酵母破壁方式有甲苯破壁法，氯仿-乙醇法，酶裂解法，细胞自溶法，但是还未有适用与酵素行业的方法。
技术实现要素：
本发明提出一种提高水果酵素中sod的制备方法，该方法提高了酵素中酵母菌释放sod的效率，增加了产品中sod的浓度。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种提高水果酵素中sod的制备方法，包括以下步骤：
1)原料处理：以柑橘、苹果、葡萄、草莓、菠萝、香蕉、桃、梨、杏、香瓜、西瓜、椰子与蓝莓中的一种或者多种为原料，将各原料洗净后分别打碎处理，混合得到水果浆；
2)水果浆处理：将步骤1)打碎得到的水果浆迅速降温至18～20℃，再进行均质化处理，调节ph至3.0～3.5；
3)酵母发酵：将酿酒酵母与马克斯克鲁维酵母的混合菌加入步骤2)均质化处理的水果浆中进行发酵，发酵18～20℃，直至发酵液中的糖度低至4g/l时，停止发酵；。
4)醋酸醋杆菌发酵：向步骤3)的发酵液中添加醋酸醋杆菌进行发酵，发酵温度29～31℃，直至发酵液ph达到4.8～5.2时终止发酵；
5)盐化保温：立即向步骤4)终止发酵的发酵液中加入饱和氯化钠溶液，温度保持40～50℃，同时低速搅拌，保温22～26小时；
6)过滤浓缩：将步骤5)盐化保温结束后的发酵液使用硅藻土过滤机和纸板过滤机进行低温过滤，然后再真空低温浓缩即可。
优选地，所述步骤5)中饱和氯化钠溶液的添加量为步骤3)的发酵液重量的4～6wt％或者8～12wt％，低速搅拌的搅拌速度15～20r/min。
优选地，所述步骤2)均质化处理时，调整果浆糖度100g/l。
优选地，步骤3)中的酿酒酵母与马克斯克鲁维酵母的混合菌接种量为原料总重量的2～4wt％。
优选地，马克斯克鲁维酵母与酿酒酵母的质量比为1:1.9～2.1。
优选地，步骤4)中的醋酸醋杆菌的接种量为原料总重量的5～8wt％。
优选地，所述步骤6)中的低温的温度为10～15℃。
优选地，所述步骤6)的浓缩倍数为5倍。
本发明的有益效果：
本发明的制备方法通过酵母发酵、醋酸醋杆菌发酵及盐化保温等步骤充分破壁释放酵母中的sod，区别于其他的使用有机溶剂的方法，安全可靠。本发明制备方法获得酵素中sod含量较常规方法样品中sod含量高2.5倍。
具体实施方式
实施例1
一种提高水果酵素中sod的制备方法，包括以下步骤：
1)原料处理：以柑橘、苹果、葡萄、草莓、菠萝、香蕉、桃、梨、杏、香瓜、西瓜、椰子与蓝莓为原料，将各原料洗净后分别打碎处理，混合得到水果浆；
2)水果浆处理：将步骤1)打碎得到的水果浆迅速降温至18℃，再进行均质化处理，调节ph至3.5；
3)酵母发酵：将酿酒酵母与马克斯克鲁维酵母的混合菌(混合菌接种量为原料总重量的2wt％，马克斯克鲁维酵母与酿酒酵母的质量比为1:2)加入步骤2)均质化处理的水果浆中进行发酵，发酵18℃，直至发酵液中的糖度低至4g/l时，停止发酵；。
4)醋酸醋杆菌发酵：向步骤3)的发酵液中添加醋酸醋杆菌(醋酸醋杆菌的接种量为原料总重量的5wt％)进行发酵，发酵温度30℃，直至发酵液ph达到5.0时终止发酵；
5)盐化保温：立即向步骤4)终止发酵的发酵液中加入占发酵液重量4wt％的饱和氯化钠溶液，温度保持40℃，同时低速搅拌，保温26小时；
6)过滤浓缩：将步骤5)盐化保温结束后的发酵液使用硅藻土过滤机和纸板过滤机进行15℃低温过滤，然后再真空低温浓缩即可，浓缩倍数为5倍。
实施例2
一种提高水果酵素中sod的制备方法，包括以下步骤：
1)原料处理：以柑橘、苹果、葡萄与草莓为原料，将各原料洗净后分别打碎处理，混合得到水果浆；
2)水果浆处理：将步骤1)打碎得到的水果浆迅速降温至20℃，再进行均质化处理，调节ph至3.0；
3)酵母发酵：将酿酒酵母与马克斯克鲁维酵母的混合菌(混合菌接种量为原料总重量的3wt％，马克斯克鲁维酵母与酿酒酵母的质量比为1:1.9)加入步骤2)均质化处理的水果浆中进行发酵，发酵20℃，直至发酵液中的糖度低至4g/l时，停止发酵；。
4)醋酸醋杆菌发酵：向步骤3)的发酵液中添加醋酸醋杆菌(醋酸醋杆菌的接种量为原料总重量的6wt％)进行发酵，发酵温度29℃，直至发酵液ph达到5.2时终止发酵；
5)盐化保温：立即向步骤4)终止发酵的发酵液中加入占发酵液重量6wt％的饱和氯化钠溶液，温度保持45℃，同时低速搅拌，保温24小时；
6)过滤浓缩：将步骤5)盐化保温结束后的发酵液使用硅藻土过滤机和纸板过滤机进行10℃低温过滤，然后再真空低温浓缩即可，浓缩倍数为5倍。
实施例3
一种提高水果酵素中sod的制备方法，包括以下步骤：
1)原料处理：以葡萄、草莓、菠萝与香蕉为原料，将各原料洗净后分别打碎处理，混合得到水果浆；
2)水果浆处理：将步骤1)打碎得到的水果浆迅速降温至20℃，再进行均质化处理，调节ph至3.0；
3)酵母发酵：将酿酒酵母与马克斯克鲁维酵母的混合菌(混合菌接种量为原料总重量的4wt％，马克斯克鲁维酵母与酿酒酵母的质量比为1:2.1)加入步骤2)均质化处理的水果浆中进行发酵，发酵20℃，直至发酵液中的糖度低至4g/l时，停止发酵；。
4)醋酸醋杆菌发酵：向步骤3)的发酵液中添加醋酸醋杆菌(醋酸醋杆菌的接种量为原料总重量的7wt％)进行发酵，发酵温度31℃，直至发酵液ph达到4.8时终止发酵；
5)盐化保温：立即向步骤4)终止发酵的发酵液中加入占发酵液重量8wt％的饱和氯化钠溶液，温度保持50℃，同时低速搅拌，保温22小时；
6)过滤浓缩：将步骤5)盐化保温结束后的发酵液使用硅藻土过滤机和纸板过滤机进行12℃低温过滤，然后再真空低温浓缩即可，浓缩倍数为5倍。
实施例4
一种提高水果酵素中sod的制备方法，包括以下步骤：
1)原料处理：以香蕉、桃、梨、杏、香瓜、西瓜、椰子与蓝莓为原料，将各原料洗净后分别打碎处理，混合得到水果浆；
2)水果浆处理：将步骤1)打碎得到的水果浆迅速降温至18℃，再进行均质化处理，调节ph至3.0；
3)酵母发酵：将酿酒酵母与马克斯克鲁维酵母的混合菌(混合菌接种量为原料总重量的4wt％，马克斯克鲁维酵母与酿酒酵母的质量比为1:2.1)加入步骤2)均质化处理的水果浆中进行发酵，发酵18℃，直至发酵液中的糖度低至4g/l时，停止发酵；。
4)醋酸醋杆菌发酵：向步骤3)的发酵液中添加醋酸醋杆菌(醋酸醋杆菌的接种量为原料总重量的8wt％)进行发酵，发酵温度30℃，直至发酵液ph达到5.0时终止发酵；
5)盐化保温：立即向步骤4)终止发酵的发酵液中加入占发酵液重量12wt％的饱和氯化钠溶液，温度保持48℃，同时低速搅拌，保温23小时；
6)过滤浓缩：将步骤5)盐化保温结束后的发酵液使用硅藻土过滤机和纸板过滤机进行10℃低温过滤，然后再真空低温浓缩即可，浓缩倍数为5倍。
试验例
本发明制备的酵素中的sod的含量为10000～12000u/ml，市售同类产品的sod的含量为1500～2500u/ml。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。