大肠杆菌素或能表现大肠杆菌的微生物用于制备增肉剂的用途的制作方法

本发明有关于大肠杆菌素的用途，特别指大肠杆菌素或能表现大肠杆菌的微生物用于制备增肉剂的用途。

背景技术：

由于离乳会使仔猪面临与母猪分离、与其他猪混养、更换饲养环境及食物等变动因子，使得仔猪的食欲下降，导致体重无法持续维持增加，因此，养猪业者在饲养仔猪的过程中，不断寻求仔猪离乳后能够维持增重率的方法，以提升市场上经济效益。

目前饲养实务上的作法不外乎选择高适口性的饲料或是将之搭配药物来使用。不过，即便选用高适口性的饲料仍无法确保所有仔猪皆能主动摄食，并且，也无法确保该饲料对于仔猪的增重效果。再者，根据研究指出，使用添加药物的饲料虽然能够使日增重效果增加，但是基于食品安全的考量，饲养过程中使用药物会使消费者产生健康上的疑虑，不仅使得市场经济价值无法提升，更会造成消费者的不安，因此，大多数国家皆倾向以较为严格的法规限制养殖业使用药物，以致于目前急需一种兼顾食品安全及畜类动物生长的方法。

技术实现要素：

本发明的主要目的即在于提供大肠杆菌素ib的用途，其能用于作为增肉剂，达到增加畜类动物生长效能的功效。

本发明的另一目的在于提供大肠杆菌素ib或能表现大肠杆菌素ib的微生物的用途，其通过具功效的小分子蛋白取代药物类生长辅助品，不仅能够有效地增加换肉率，并且，使肉品符合食品安全的规范，增加市场经济价值。

为能达成上述目的，本发明的一实施例揭露一种将大肠杆菌素ib或能表现大肠杆菌素ib的微生物用于制备增肉剂的用途，其中，大肠杆菌素ib的核酸序列为编码为seqidno.2的序列或其进行一个或多个核苷酸的取代、删除、添加所衍生的同源性核酸序列。

其中，大肠杆菌素ib的核酸序列为与编码为seqidno.2的序列具有高于90％的相似度，举例来说，大肠杆菌素ib的核酸序列为编码为seqidno.2。

本发明的另一实施例揭露将大肠杆菌素ib或能表现大肠杆菌素ib的微生物用于制备促动物生长的组合物的用途，其中，大肠杆菌素ib的核酸序列为编码为seqidno.2的序列或其进行一个或多个核苷酸的取代、删除、添加所衍生的同源性核酸序列。

本发明的另一实施例揭露将大肠杆菌素ib或能表现大肠杆菌素ib的微生物用于制备改善肠道菌相的组合物的用途，其中，大肠杆菌素ib的核酸序列为编码为seqidno.2的序列或其进行一个或多个核苷酸的取代、删除、添加所衍生的同源性核酸序列。

较佳地，该改善肠道菌相的组合物能用于增加肠道内至少一细菌的数量，而该细菌选自由lactobacillusultunensis、lachnospiraceaeblautia、blautiawexlerae、lachnospiraceaecoprococcus、lachnospiraceaeruminococcus、coprobacillaceaecatenibacterium、erysipelotrichaceaebulleidia或mesoplasmaentomophilum。

较佳地，该改善肠道菌相的组合物能用于减少肠道内至少一细菌的数量，而该细菌选自由alkaliphiluscrotonatoxidans、clostridiumalkalicellulosi、faecalibacteriumprausnitzii、clostridiumcadaveris、oscillospiraeae、eubacteriumbiforme、ruminococcaceaeoscillospira、eubacteriumcylindroides、spirochaetaceaetreponema、treponemabryantii或pelagicoccaceaepelagicoccus。

而在上述实施例所揭组合物中的大肠杆菌素ib的核酸序列为与编码为seqidno.2的序列具有高于90％的相似度，举例来说，大肠杆菌素ib的核酸序列为编码为seqidno.2。

又，上述组合物更包含有至少一载剂，并且，该载剂与大肠杆菌素ib的比例为5x10⁴∶2。举例来说，该载剂为淀粉、油脂、维生素、矿物质、胺基酸、蛋白质或上述至少二成份的组合。

此外，本发明的另一实施例揭露一种改善动物肠道内菌相的方法，包含有投予一有效量的大肠杆菌素ib或能表现大肠杆菌素ib的微生物至一动物，使该动物肠道内的至少一第一细菌数量增加及/或一第二细菌数量减少，其中：

大肠杆菌素ib的核酸序列为编码为seqidno.2的序列或其进行一个或多个核苷酸的取代、删除、添加所衍生的同源性核酸序列；

该第一细菌为lactobacillusultunensis、lachnospiraceaeblautia、blautiawexlerae、；lachnospiraceaecoprococcus、lachnospiraceaeruminococcus、coprobacillaceaecatenibacterium、erysipelotrichaceaebulleidia及mesoplasmaentomophilum；

该第二细菌为alkaliphiluscrotonatoxidans、clostridiumalkalicellulosi、faecalibacteriumprausnitzii、clostridiumcadaveris、oscillospiraeae、eubacteriumbiforme、ruminococcaceaeoscillospira、eubacteriumcylindroides、spirochaetaceaetreponema、treponemabryantii或pelagicoccaceaepelagicoccus。

而该能表现大肠杆菌素ib的微生物为通过基因工程所构筑的重组微生物，包含一载体，具有如seqidno.2所示的序列，因此，该微生物可在一预定生长条件下产制出大肠杆菌素ib。

附图说明

图1为sds-page电泳图。

图2为显示各组饲养不同天数的日增重的直条图。

图3为显示各组饲养不同天数的日采食量的直条图。

图4为显示各组饲养不同天数的换肉率的直条图。

图5为显示各组饲养不同天数后的血液中il-2含量的直条图。

图6为显示各组饲养不同天数后的血液中igg含量的直条图。

图7为显示各组饲养不同天数后的血液中iga含量的直条图。

图8为显示各组饲养不同天数后的血液中ifn-γ含量的直条图。

图9a为分析经不同条件饲养的仔猪肠道菌相变化，饲养前后差异值大于1的编号1～28的菌种。

图9b为分析经不同条件饲养的仔猪肠道菌相变化，饲养前后差异值大于1的编号29～53的菌种。

图10为分析经不同条件饲养的仔猪肠道菌相变化，饲养前后差异值大于4的13株菌种。

图11分析图9a及b的结果。

图12分析图10的结果。

具体实施方式

本发明所揭大肠杆菌素ib或其同源性蛋白质能够以萃取法、人工合成方法、重组生物平台等技术所获得。

以下，兹举若干实例进一步说明本发明的效果如后。

实例一：制备大肠杆菌素ib-his的蛋白质粉末

在本实例中，以下列步骤进行制备大肠杆菌素ib-his的蛋白质粉末：

1.构筑出pt-colib-c-his-ok/bw251132菌，其中，质体pt-colib-c-his-ok的序列如seqidno.1所示，大肠杆菌素ib的dna序列如seqidno.2所示。

2.将pt-colib-c-his-ok/bw251132菌的新鲜菌落，接种至5毫升含ap50的lb培养基，隔夜培养。

3.以百分之一接种100毫升含ap50的lb培养基，隔夜培养。

4.加入0.5mg/ml的丝裂霉素(mitomycinc)，使终浓度为0.2μg/ml，培养6小时。

5.离心收取菌体，在-20℃放置至少隔夜。

6.取出菌体，以超音波破菌后，离心过滤后，用以纯化出大肠杆菌素ib-his蛋白。

7.将所得到的区分物(fractions)，进行10％sds-page电泳及以anti-his抗体进行西方杂配，结果如图1所示。

8.取有大肠杆菌素ib-his蛋白讯号的区分物，以20mmtris(ph8.0)缓冲液透析。

9.测定各透析液的大肠杆菌素ib-his蛋白浓度及体积，计算出大肠杆菌素ib-his的蛋白量。

10.将透析液冷冻干燥成粉末，储存于4℃。

实例二：动物试验(一)

选取18头离乳仔猪，分为三组，每组6栏，每栏1头，而各组的饲养条件如下：

第一组为空白组，使用正常饲料。

第二组给予正常饲料及抗生素泰妙灵(tiamulin)。

第三组给予正常饲料及实例一中所制备的大肠杆菌素，剂量为20毫克大肠杆菌素/每公斤饲料。

其中，所使用的正常饲料为本发明所属技术领域技术人员的一般常识，故在此不加以对饲料成份说明。

各该组仔猪以上述条件喂养4天后，检测及分析各该组仔猪的体重、日摄食量、日增重量及换肉率，结果如下表1所示。

表1：各该组仔猪的生长性能

由表1的内容显示，本发明所揭大肠杆菌素不会影响仔猪的食欲，除能提高仔猪的摄食量以外，并且，能够将所摄取的食物转换为肉，有效地增加猪只的生长率及体重。

实例三：动物实验(二)

选取18头离乳仔猪，分为三组，每组6栏，每栏1头，而各组的饲养条件如下：

第一组为空白组，使用正常饲料。

第二组给予正常饲料及抗生素泰妙灵(tiamulin)。

第三组给予正常饲料及实例一中所制备的大肠杆菌素，剂量为20毫克大肠杆菌素/每公斤饲料。

其中，所使用的正常饲料为本发明所属技术领域技术人员的一般常识，故在此不加以对饲料成份说明。

各组仔猪依据上述饲养条件分别被喂食5天，之后，再分别投予肠毒素型大肠杆菌(enterotoxigenice.coli，etec)，而后再分别以上述饲养条件饲养10天，其中，每日测量各组仔猪的日摄食量，并在试验第4天、第8天、第11天及第14天秤重及检测各组仔猪血中的免疫蛋白，结果如第二至八图所示。

由图2至图4的结果可知，在饲养14天后，第1组的日增重约为0.427公斤、饲料使用率约为1.649％，而第3组的日增重为0.563公斤、饲料使用率为1.473公斤。换言之，相较于第1组，第3组仔猪的日增重提高约32％，饲料使用率约下降11％。由此显示，喂食本发明所揭大肠杆菌素后，可在不增加饲料使用量与采食量的环境下使仔猪稳定地提高日增重，达到类似喂食抗生素的效果，但是日采食量明显低于抗生素组，并且，由图4可知各组在不同饲养天数的增肉率(日采食率/日增重)，显示长时间喂食本发明所揭大肠杆菌素不会影响到猪只食欲，并且能够提升仔猪的增肉率。

再者，由图5至图8的结果可知，投予本发明所揭大肠杆菌素能减少血液中的免疫蛋白igg、iga、与il-2，显示本发明所揭大肠杆菌素能不会引起猪只的过敏反应。

实例四：菌相分析

将离乳猪分为两组，在饲养开始时先收集各组仔猪的粪便，并分别以无添加的正常饲料及添加本发明所揭大肠杆菌素的正常饲料饲养4天，再收集各组仔猪的粪便，其中，大肠杆菌素的添加剂量为剂量为20毫克大肠杆菌素/每公斤饲料。

将在试验第0天及第4天所收集的各组仔猪的粪便进行菌相分析。分别将空白组第4天所分析出的各菌种的比例减去空白组第0天所分析出的各菌种的比例，及分别将大肠杆菌素组第4天所分析出的各菌种的比例减去大肠杆菌素组第0天所分析出的各菌种的比例后，仅保留实验前后菌种比例差异值大于1及大于4者，结果图9及图10，并将图9及图10的结果以直条图表现，结果如图11及图12所示。

由图9至图12的结果可知，喂食本发明所揭大肠杆菌素的仔猪肠道菌相不同于未喂食本发明所揭大肠杆菌素者。更进一步来说，通过图8至图11的结果可清楚得知，喂食大肠杆菌素能够大幅增加仔猪肠道中如lactobacillusultunensis、lachnospiraceaeblautia、blautiawexlerae、；lachnospiraceaecoprococcus、lachnospiraceaeruminococcus、coprobacillaceaecatenibacterium、erysipelotrichaceaebulleidia、mesoplasmaentomophilum等细菌的数量，并减少如alkaliphiluscrotonatoxidans、clostridiumalkalicellulosi、faecalibacteriumprausnitzii、clostridiumcadaveris、oscillospiraeae、eubacteriumbiforme、ruminococcaceaeoscillospira、eubacteriumcylindroides、spirochaetaceaetreponema、treponemabryantii、pelagicoccaceaepelagicoccus等细菌。又，lactobacillusultunensis的增加数量为最。

而结合实施例二至四的结果，能推知lactobacillusultunensis、lachnospiraceaeblautia、blautiawexlerae、lachnospiraceaecoprococcus、lachnospiraceaeruminococcus、coprobacillaceaecatenibacterium、erysipelotrichaceaebulleidia、mesoplasmaentomophilum等细菌数量增加，以及如alkaliphiluscrotonatoxidans、clostridiumalkalicellulosi、faecalibacteriumprausnitzii、clostridiumcadaveris、oscillospiraeae、eubacteriumbiforme、ruminococcaceaeoscillospira、eubacteriumcylindroides、spirochaetaceaetreponema、treponemabryantii、pelagicoccaceaepelagicoccus等细菌的数量减少与增加仔猪换肉率相关。换言之，lactobacillusultunensis、lachnospiraceaeblautia、blautiawexlerae、lachnospiraceaecoprococcus、lachnospiraceaeruminococcus、coprobacillaceaecatenibacterium、erysipelotrichaceaebulleidia、mesoplasmaentomophilum为有益于增加仔猪换肉率的细菌，而alkaliphiluscrotonatoxidans、clostridiumalkalicellulosi、faecalibacteriumprausnitzii、clostridiumcadaveris、oscillospiraeae、eubacteriumbiforme、ruminococcaceaeoscillospira、eubacteriumcylindroides、spirochaetaceaetreponema、treponemabryantii、pelagicoccaceaepelagicoccus为有害于增加仔猪换肉率的细菌。

综上所述，本发明所揭大肠杆菌素投予至猪只时，通过改变肠道菌相，使肠道内有益于生肉的细菌生长，使在维持猪只摄食量的基础下，使所摄入的食物及能量高效率地转化为肉，以达到增加猪只生长效能的功效，并且，减少或避免猪只因生长环境改变而发生体重减轻的情形。据此可知，本发明所揭大肠杆菌素或能够表现大肠杆菌素ib的微生物能够取代抗生素。

以上仅是通过各该实例详细说明本发明，熟知该技术领域者在不脱离本发明精神下，而对于说明书中的实施例所做的任何简单修改或是变化，均应为本案权利要求所涵摄。

sequencelist

<110>薛富盛

<120>大肠杆菌素或能表现大肠杆菌之微生物用于制备增肉剂的用途

<130>none

<160>2

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>4898

<212>dna

<213>artificialsequence

<220>

<223>重组质体

<400>1

tcgcgcgtttcggtgatgacggtgaaaacctctgacacatgcagctcccggagacggtca60

cagcttgtctgtaagcggatgccgggagcagacaagcccgtcagggcgcgtcagcgggtg120

ttggcgggtgtcggggctggcttaactatgcggcatcagagcagattgtactgagagtgc180

accatatgcggtgtgaaataccgcacagatgcgtaaggagaaaataccgcatcaggcgcc240

attcgccattcaggctgcgcaactgttgggaagggcgatcggtgcgggcctcttcgctat300

tacgccagctggcgaaagggggatgtgctgcaaggcgattaagttgggtaacgccagggt360

tttcccagtcacgacgttgtaaaacgacggccagtgaattgtaatacgactcactatagg420

gcgagctcggtacccgggcgaattccaagcttcaccagagaatacccagactgtgatgct480

gccacagtgtcagcaggctttctgaacggtataacaccacttcatgttaatgataattac540

tatcattaaatcttgacatgccattttctccttaataaattagtactgtatatgtatcca600

tatacgtaagcagttaattcatttgttttcctcagaggatgaaggagataccgaatgtct660

gaccctgtacgtattacaaatcccggtgcagaatcgctgggatatgattcagatggccat720

gaaattatggccgttgatatttatgtaaaccctccacgtgtcgatgtctttcatggtacc780

ccgcctgcatggagttccttcgggaacaaaaccatctggggtggaaacgagtgggtcgat840

gattccccaacccgaagtgatatcgaaaaaagggacaaggaaatcacagcgtacaaaaac900

acgctcagcgcgcagcagaaagagaatgagaataagcgtactgaagctggaaaacgcctt960

tctgcggcaattgctgcaagggaaaaagatgaaaacacactgaaaacactccgtgccgga1020

aacgcagatgccgctgatattacacgacaggagttcagactcctgcaggcagagctgaga1080

gaatacggattccgtactgaaatcgccggatatgatgccctccggctgcatacagagagc1140

cggatgctgtttgctgatgctgattctcttcgtatatctccccgcgaggccaggtcgtta1200

atcgaacaggctgaaaaacggcagaaggatgcgcagaacgcagacaagaaggccgctgat1260

atgcttgctgaatacgagcgcagaaaaggtattctggacacgcggttgtcagagctggaa1320

aaaaatggcggggcagcccttgccgttcttgatgcacaacaggcccgtctgctcgggcag1380

cagacacggaatgacagggccatttcagaggcccggaataaactcagttcggtgacggaa1440

tcgcttaagacggcccgtaatgcattaaccagagctgaacaacagctgacgcaacagaaa1500

aacacgcctgacggcaaaacgatagtttcccctgaaaaattcccggggcgttcatcaaca1560

aatcattctattgttgtgagtggtgatccgaggtttgccggtacgataaaaatcacaacc1620

agcgcggtcatcgataaccgtgcaaacctgaattatcttctgacccattccggtctggac1680

tataaacgcaatattctgaatgaccggaatccggtggtgacagaggatgtggaaggtgac1740

aagaaaatttataatgctgaagttgctgaatgggataagttacggcaacgattgcttgat1800

gccagaaataaaatcacctctgctgaatctgcgataaattcggcgagaaataacgtcagt1860

gccagaacaaatgaacaaaagcatgcaaatgacgctcttaatgccctgttgaaggaaaaa1920

gagaatatccgtagccagcttgctgacatcaatcagaaaatagctgaagagaaaagaaaa1980

agggatgaaataaatatggtaaaggatgccataaaactcacctctgatttctacagaacg2040

atatatgatgagttcggtaaacaagcatccgaacttgctaaggagctggcttctgtatct2100

caagggaaacagattaagagtgtggatgatgcactgaacgcttttgataaattccgtaat2160

aatctgaacaagaaatataacatacaagatcgcatggccatttctaaagccctggaagct2220

attaatcaggtccatatggcggagaattttaagctgttcagtaaggcatttggttttacc2280

ggaaaagttattgatcgttatgatgttgctgtggagttacaaaaggctgtaaaaacggac2340

aactggcgtccattttttgtaaaacttgaatcactggcagcaggaagagctgcttcagca2400

gttacagcatgggcgttttccgtcatgctgggaacccctgtaggtattctgggttttgca2460

attattatggcggctgtgagtgcgcttgttaatgataagtttattgagcaggtcaataaa2520

cttattggtatcggatccagatctcatcaccatcaccatcactaagcttaattagctgag2580

cttggactcctgttgatagatccagtaatgacctcagaacagatctggatcccctctaga2640

gtcgacctgcaggcatgcaagcttggcgtaatcatggtcatagctgtttcctgtgtgaaa2700

ttgttatccgctcacaattccacacaacatacgagccggaagcataaagtgtaaagcctg2760

gggtgcctaatgagtgagctaactcacattaattgcgttgcgctcactgcccgctttcca2820

gtcgggaaacctgtcgtgccagctgcattaatgaatcggccaacgcgcggggagaggcgg2880

tttgcgtattgggcgctcttccgcttcctcgctcactgactcgctgcgctcggtcgttcg2940

gctgcggcgagcggtatcagctcactcaaaggcggtaatacggttatccacagaatcagg3000

ggataacgcaggaaagaacatgtgagcaaaaggccagcaaaaggccaggaaccgtaaaaa3060

ggccgcgttgctggcgtttttccataggctccgcccccctgacgagcatcacaaaaatcg3120

acgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacaggactataaagataccaggcgtttccccc3180

tggaagctccctcgtgcgctctcctgttccgaccctgccgcttaccggatacctgtccgc3240

ctttctcccttcgggaagcgtggcgctttctcatagctcacgctgtaggtatctcagttc3300

ggtgtaggtcgttcgctccaagctgggctgtgtgcacgaaccccccgttcagcccgaccg3360

ctgcgccttatccggtaactatcgtcttgagtccaacccggtaagacacgacttatcgcc3420

actggcagcagccactggtaacaggattagcagagcgaggtatgtaggcggtgctacaga3480

gttcttgaagtggtggcctaactacggctacactagaaggacagtatttggtatctgcgc3540

tctgctgaagccagttaccttcggaaaaagagttggtagctcttgatccggcaaacaaac3600

caccgctggtagcggtggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcgcagaaaaaaagg3660

atctcaagaagatcctttgatcttttctacggggtctgacgctcagtggaacgaaaactc3720

acgttaagggattttggtcatgagattatcaaaaaggatcttcacctagatccttttaaa3780

ttaaaaatgaagttttaaatcaatctaaagtatatatgagtaaacttggtctgacagtta3840

ccaatgcttaatcagtgaggcacctatctcagcgatctgtctatttcgttcatccatagt3900

tgcctgactccccgtcgtgtagataactacgatacgggagggcttaccatctggccccag3960

tgctgcaatgataccgcgagacccacgctcaccggctccagatttatcagcaataaacca4020

gccagccggaagggccgagcgcagaagtggtcctgcaactttatccgcctccatccagtc4080

tattaattgttgccgggaagctagagtaagtagttcgccagttaatagtttgcgcaacgt4140

tgttgccattgctacaggcatcgtggtgtcacgctcgtcgtttggtatggcttcattcag4200

ctccggttcccaacgatcaaggcgagttacatgatcccccatgttgtgcaaaaaagcggt4260

tagctccttcggtcctccgatcgttgtcagaagtaagttggccgcagtgttatcactcat4320

ggttatggcagcactgcataattctcttactgtcatgccatccgtaagatgcttttctgt4380

gactggtgagtactcaaccaagtcattctgagaatagtgtatgcggcgaccgagttgctc4440

ttgcccggcgtcaatacgggataataccgcgccacatagcagaactttaaaagtgctcat4500

cattggaaaacgttcttcggggcgaaaactctcaaggatcttaccgctgttgagatccag4560

ttcgatgtaacccactcgtgcacccaactgatcttcagcatcttttactttcaccagcgt4620

ttctgggtgagcaaaaacaggaaggcaaaatgccgcaaaaaagggaataagggcgacacg4680

gaaatgttgaatactcatactcttcctttttcaatattattgaagcatttatcagggtta4740

ttgtctcatgagcggatacatatttgaatgtatttagaaaaataaacaaataggggttcc4800

gcgcacatttccccgaaaagtgccacctgacgtctaagaaaccattattatcatgacatt4860

aacctataaaaataggcgtatcacgaggccctttcgtc4898

<210>2

<211>1890

<212>dna

<213>escherichiacoli

<400>2

atgtctgaccctgtacgtattacaaatcccggtgcagaatcgctgggatatgattcagat60

ggccatgaaattatggccgttgatatttatgtaaaccctccacgtgtcgatgtctttcat120

ggtaccccgcctgcatggagttccttcgggaacaaaaccatctggggtggaaacgagtgg180

gtcgatgattccccaacccgaagtgatatcgaaaaaagggacaaggaaatcacagcgtac240

aaaaacacgctcagcgcgcagcagaaagagaatgagaataagcgtactgaagctggaaaa300

cgcctttctgcggcaattgctgcaagggaaaaagatgaaaacacactgaaaacactccgt360

gccggaaacgcagatgccgctgatattacacgacaggagttcagactcctgcaggcagag420

ctgagagaatacggattccgtactgaaatcgccggatatgatgccctccggctgcataca480

gagagccggatgctgtttgctgatgctgattctcttcgtatatctccccgcgaggccagg540

tcgttaatcgaacaggctgaaaaacggcagaaggatgcgcagaacgcagacaagaaggcc600

gctgatatgcttgctgaatacgagcgcagaaaaggtattctggacacgcggttgtcagag660

ctggaaaaaaatggcggggcagcccttgccgttcttgatgcacaacaggcccgtctgctc720

gggcagcagacacggaatgacagggccatttcagaggcccggaataaactcagttcggtg780

acggaatcgcttaagacggcccgtaatgcattaaccagagctgaacaacagctgacgcaa840

cagaaaaacacgcctgacggcaaaacgatagtttcccctgaaaaattcccggggcgttca900

tcaacaaatcattctattgttgtgagtggtgatccgaggtttgccggtacgataaaaatc960

acaaccagcgcggtcatcgataaccgtgcaaacctgaattatcttctgacccattccggt1020

ctggactataaacgcaatattctgaatgaccggaatccggtggtgacagaggatgtggaa1080

ggtgacaagaaaatttataatgctgaagttgctgaatgggataagttacggcaacgattg1140

cttgatgccagaaataaaatcacctctgctgaatctgcgataaattcggcgagaaataac1200

gtcagtgccagaacaaatgaacaaaagcatgcaaatgacgctcttaatgccctgttgaag1260

gaaaaagagaatatccgtagccagcttgctgacatcaatcagaaaatagctgaagagaaa1320

agaaaaagggatgaaataaatatggtaaaggatgccataaaactcacctctgatttctac1380

agaacgatatatgatgagttcggtaaacaagcatccgaacttgctaaggagctggcttct1440

gtatctcaagggaaacagattaagagtgtggatgatgcactgaacgcttttgataaattc1500

cgtaataatctgaacaagaaatataacatacaagatcgcatggccatttctaaagccctg1560

gaagctattaatcaggtccatatggcggagaattttaagctgttcagtaaggcatttggt1620

tttaccggaaaagttattgatcgttatgatgttgctgtggagttacaaaaggctgtaaaa1680

acggacaactggcgtccattttttgtaaaacttgaatcactggcagcaggaagagctgct1740

tcagcagttacagcatgggcgttttccgtcatgctgggaacccctgtaggtattctgggt1800

tttgcaattattatggcggctgtgagtgcgcttgttaatgataagtttattgagcaggtc1860

aataaacttattggtatcggatccagatct1890