本发明涉及微生态发酵
技术领域：
，具体而言，涉及一种去苦味发酵豆粕及其制备方法。
背景技术：
：豆粕以其良好的营养特性被誉为植物性蛋白质饲料“之王”，成为蛋白质资源的首选。然而由于豆粕中含有多种抗营养因子，近几年来，利用益生菌进行发酵处理是一条经济有效的途径。益生菌发酵可将豆粕中大分子蛋白质降解为多肽、小肽及游离氨基酸，除去多种抗营养因子，平衡豆粕氨基酸，提高其消化利用率。经发酵处理的豆粕还富含益生菌体、有机酸和多功能小肽等活性物质，能缓解仔猪断奶应激、降低仔猪腹泻率、改善畜禽胴体品质、提高动物生产性能和免疫能力。目前发酵豆粕工艺成熟，发酵豆粕的品质也越来越高，一般工艺中会用到芽孢杆菌进行发酵，产内切酶的能力较强，能够有效地将多肽切成小段，但是其产端肽酶的能力较差，会产生一些苦味肽，影响动物适口性，因此为了提高发酵豆粕品质，对其进行脱苦，提高产品风味和适口性十分必要。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种去苦味发酵豆粕的制备方法，其能有效去除豆粕发酵过程中产生的苦味，使得豆粕的发酵品更加适口。本发明的另一目的在于提供一种去苦味发酵豆粕，其品质高，基本无苦味，适口性更佳。本发明的实施例是这样实现的：一种去苦味发酵豆粕的制备方法，其包括：将发酵混合液接种至豆粕发酵底物中，发酵后得到发酵中间品，对发酵中间品进行烘干和粉碎，即得去苦味发酵豆粕；发酵混合液为发酵剂以及pr氨肽酶溶于水中进行活化后制成。一种去苦味发酵豆粕，其通过上述去苦味发酵豆粕的制备方法制备而成。本发明实施例的有益效果例如包括：本发明实施例提供的去苦味发酵豆粕的制备方法通过发酵剂与pr氨肽酶复配形成发酵混合液，利用该发酵混合液接种至豆粕发酵底物中进行发酵，在发酵过程中，加入pr氨肽酶相比不加pr氨肽酶的发酵混合液能够使小肽含量提高2-3.3％，苦味值从3-4降到0-1。对提高发酵豆粕品质、去除苦味效果显著。按本发明方法所生产的去苦味发酵豆粕，其品质高，基本无苦味，适口性更佳。具体实施方式下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂、仪器或设备未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本发明实施例的去苦味发酵豆粕及其制备方法。进行具体说明。一种去苦味发酵豆粕的制备方法，其包括：将发酵混合液接种至豆粕发酵底物中，发酵后得到发酵中间品，对发酵中间品进行烘干和粉碎，即得去苦味发酵豆粕。具体地，去苦味发酵豆粕的制备方法包括以下步骤：s1：制备豆粕发酵底物。豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品。又称“大豆粕”。按照提取的方法不同，可以分为一浸豆粕和二浸豆粕。其中以浸提法提取豆油后的副产品为一浸豆粕，而先以压榨取油，再经过浸提取油后所得的副产品称为二浸豆粕。本实施例中，优选豆粕为一浸豆粕，其蛋白质含量更高。本实施例中，将豆粕粗略粉碎至20-60目，形成豆粕干粉，利用该豆粕干粉作为豆粕发酵底物。豆粕内含的多种氨基酸适合于家禽和猪对营养的需求。经发明人研究发现，在不需额外加入动物性蛋白的情况下，仅豆粕中所含有的氨基酸就足以平衡家禽和猪的营养，从而促进牲畜的营养吸收。s2：制备发酵混合液。将发酵剂以及pr氨肽酶溶于水中进行活化后制成。具体地，发酵剂和pr氨肽酶的用量的质量比为1:0.25-1。例如，质量比可以为1：0.25、1：0.3、1：0.4、1：0.5、1：0.55、1：0.6、1：0.7、1：0.8、1：0.9、1：1中的任一者或者任意两者之间的范围值。发酵剂以及pr氨肽酶溶于水中进行活化的时间为2-4h，例如2、2.2、2.4、2.6、2.8、3.0、3.5、3.7、3.9、4.0h中的任一者或者任意两者之间的范围值。其中，pr氨肽酶的酶活力≥1万u/g。酶活定义：50℃下每分钟分解l-亮氨酸-对硝基苯胺产生1μmol的对硝基苯胺所需酶量即为一个酶活单位。pr氨肽酶酶活检测方法如下：取6.075gtris溶于900ml蒸馏水，用浓hcl调至ph8.5，然后定容至1l。以l-亮氨酸对硝基苯胺(l-leu-pna)作为底物，取0.1g底物溶于1ml酒精，然后用tris-hcl缓冲液定容到100ml，取0.1gpr氨肽酶粉用tris-hcl缓冲液定容到100ml作为待测酶液。加入2ml的tris-hcl缓冲液和1ml底物l-leu-pna，一个加入1ml酶液，另一个加入1mltris-hcl缓冲液作为对照，在50℃水浴反应10min后405nm下比色测定酶活。所述的pr氨肽酶酶活计算公式：酶活＝a×105.7×4×n/10，其中a为待测酶液的吸光度；n为待测酶液的稀释倍数。利用上述检测方法，检测并获取pr氨肽酶的酶活力≥1万u/g的pr氨肽酶作为本实施例中的所用pr氨肽酶。发酵剂可以为市售产品，也可以依据饲料的需求进行自主制备。本实施例中，优选发酵剂为自主制备而得，具体地，发酵剂是由中性蛋白酶、瑞士乳杆菌、干酪乳杆菌及屎肠球菌按照质量比为2:0.2-0.4:0.2-0.4:0.2-0.4复配制成。中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。瑞士乳杆菌是革兰氏阳性细菌中的一种，为益生菌，兼性厌氧。瑞士乳杆菌具有较强的蛋白水解活性，其发酵乳制品中多肽含量较高，因此具有潜在产生生物活性肽的能力，它具有缓解高血压,维持肠道菌群平衡，促进钙吸收等功能。干酪乳杆菌作为益生菌的一种，具有良好的耐酸及胆汁抗性，可降低血浆胆固醇，增强宿主对微生物病原体的非特异性抵抗力，加快清除肠道内病原体，治疗肠道菌群紊乱和增强肠道透性，从而防止食物过敏和急性腹泻。所以干酪乳杆菌进入动物体后可以在肠道内大量存活，起到调节肠内菌群平衡、促进动物消化吸收等作用。屎肠球菌是一种益生菌，对维持动物肠道菌群生态平衡起到重要作用，特别是在幼龄动物的肠道保健和疾病的防疫和治疗上有突出的表现。本实施例中，选择中性蛋白酶能有效分解大分子蛋白，形成可以被动物吸收的小肽，瑞士乳杆菌、干酪乳杆菌以及屎肠球菌作为本实施例中的菌剂，可以产生多种有益的有机酸和益生元，增加发酵豆粕的适口性，提高动物的免疫力，减少饲料中酸化剂的添加量，并且产生的有机酸可以部分掩盖苦味，使发酵豆粕口感比较柔和。发酵剂中还添加有硫酸亚铁和富硒酵母，硫酸亚铁、富硒酵母与中性蛋白酶的添加量的质量比为1:0.01-0.1:2。本实施例中，发酵剂中添加硫酸亚铁以及富硒酵母等营养成分，能够在发酵过程中可以慢慢形成小肽铁和乳酸铁，小肽铁的补铁效果极佳。此外，富硒酵母的加入能够与发酵剂配合，同时能够增强终产物的硒含量，营养价值更高。尤其适用于乳猪饲料以及断奶仔猪饲料。s3：接种发酵。将上述制备的发酵混合液接种至豆粕发酵底物中，于27-37℃下进行发酵，发酵时间为72-96h，发酵后得到发酵中间品。发酵温度例如可以为：27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37℃中的任一者。发酵时间例如可以为72、73、74、75、76、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96h中的任意一者或者任意两者之间的范围值。s4：烘干和粉碎。对发酵中间品进行烘干和粉碎，即得去苦味发酵豆粕。烘干发酵中间品包括将发酵中间品经传送带传送至流化床烘干，使发酵中间品的含水量降至10-12％，再经过粉碎机粉碎至40-60目。此外，本发明还提供了一种苦味的评定方法：感官评定小组由五人组成，将发酵豆粕灭菌，加饮用水按1：3的固液比进行混合，过滤，评定员用蒸馏水漱口之后，取待评定滤液2-3ml置于口中，10秒钟后吐出，漱口后取与之味道相近之标准液品尝，如确认两味道相近，即可将待评定液的苦味值定为该标准液的苦味值，否则需取其它标准液再尝，直至确定苦味值。取五人评定的平均值。所述的标准液按l.mogensen和j.adler-nissen的方法配置，以奎宁为基准物质，经评定a(a＝3×10-6mol/l)为下限，刚好没有苦味；32a为上限，再增加浓度，苦味基本上不增加；中间溶液浓度成倍增加，苦味值也相应增加。因此设定评分标准如下表1。表1.苦味值的评分标准奎宁溶液浓度32a16a8a4a2aa苦味描述很苦苦较苦中度苦微苦不苦苦味分值543210注：a＝3×10-6mol/l以上“有点苦”、“较苦”等关于苦味的描述是统一所有评定员的意见后得到的，可能与个别评定员对相对应浓度溶液的感觉有出入，但以多数人的感觉为基础来硬性规定，就尽量避免了个人的主观因素对评定的影响。以下结合实施例对本发明的去苦味发酵豆粕及其制备方法进一步进行阐述。实施例1取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至20目，将市售2kg发酵剂、2.5kgpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在37℃下发酵96h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。对比例1取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至20目，将市售2kg发酵剂溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在37℃下发酵96h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。发酵后小肽与苦味值如下：示例氨肽酶使用情况小肽％苦味值实施例1使用氨肽酶20.900对比例1不使用氨肽酶17.603.5实施例2取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至20目，将市售2kg发酵剂、500gpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在27℃下发酵72h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。对比例2取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至20目，将市售2kg发酵剂溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在27℃下发酵72h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。发酵后小肽与苦味值如下：示例氨肽酶使用情况小肽％苦味值实施例2使用氨肽酶17.431对比例2不使用氨肽酶15.303实施例3取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至20目，将市售2kg发酵剂、2.5kgpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在27℃下发酵72h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。对比例3取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至20目，将市售2kg发酵剂溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在27℃下发酵72h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。发酵后小肽与苦味值如下：实施例4取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至20目，将市售2kg发酵剂、500gpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在37℃下发酵96h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。对比例4取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至20目，将市售2kg发酵剂溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在37℃下发酵96h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。发酵后小肽与苦味值如下：示例氨肽酶使用情况小肽％苦味值实施例4使用氨肽酶19.101对比例4不使用氨肽酶17.003实施例5取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至40目，将中性蛋白酶2kg、富硒酵母1kg、瑞士乳杆菌0.3kg、干酪乳杆菌0.3kg、屎肠球菌0.4kg以及硫酸亚铁0.3kg复配形成的发酵剂、2kgpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在30℃下发酵72h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。对比例5取500kg43％的粗蛋白豆粕，粗粉碎至40目，将市售发酵剂2kg、2kgpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在30℃下发酵96h，然后烘干，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。发酵后小肽与苦味值如下：示例发酵剂的选择小肽％苦味值发酵时间实施例5自主制备19.800.572h对比例5市售10.050.596h实施例6取500kg43％粗蛋白豆粕，粗粉碎至40目，将中性蛋白酶2kg、富硒酵母1kg、瑞士乳杆菌0.2kg、干酪乳杆菌0.4kg、屎肠球菌0.4kg以及硫酸亚铁0.6kg复配形成的发酵剂、2kgpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在37℃下发酵96h，然后烘干至水量为10％，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。对比例6取500kg43％粗蛋白豆粕，粗粉碎至40目，将中性蛋白酶2kg、瑞士乳杆菌0.2kg、干酪乳杆菌0.4kg、屎肠球菌0.4kg复配形成的发酵剂、2kgpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在37℃下发酵96h，然后烘干至水量为10％，粉碎，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。发酵后小肽与苦味值如下：示例硫酸亚铁、富硒酵母小肽％苦味值营养成分实施例6添加21.100.5高对比例6未添加17.000.5低实施例7取500kg43％粗蛋白豆粕，粗粉碎至40目，将中性蛋白酶2kg、富硒酵母1kg、瑞士乳杆菌0.2kg、干酪乳杆菌0.4kg、屎肠球菌0.4kg以及硫酸亚铁0.6kg复配形成的发酵剂、2kgpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在37℃下发酵92h，然后烘干至水量为25％，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。对比例7取500kg43％粗蛋白豆粕，粗粉碎至40目，将中性蛋白酶2kg、瑞士乳杆菌0.2kg、干酪乳杆菌0.4kg以及屎肠球菌0.4kg复配形成的发酵剂、2kgpr氨肽酶溶于400kg水中，活化3h后，接种到豆粕发酵底物中，使用混料机混合均匀，在37℃下发酵92h，然后烘干至水量为25％，得到饲用发酵豆粕，检测小肽含量并按照苦味评定方法进行评定。发酵后小肽与苦味值如下：从上述实施例1-4以及对比例1-4可以明显看出，使用pr氨肽酶，能够有效提高小肽含量，同时降低苦味值。从实施例5和对比例5可以明显看出，通过选择自主制备的发酵剂，能够显著降低发酵时间。从实施例6和对比例6可以明显看出，在添加了硫酸亚铁、富硒酵母后，饲用发酵豆粕的营养成分明显增加，更有利于动物的食用。从实施例7和对比例7可以看出，生产中烘干成本较高，本实施例烘干至水分25％进行储存试验，节约了大量能耗，并且添加硫酸亚铁和富硒酵母，能够延长储存时间，且有利于保持豆粕的营养成分，营养价值高。本发明实施例提供的方法对提高发酵豆粕品质、去除苦味效果显著，按本发明方法所生产的发酵豆粕有益效果主要在于：加入pr氨肽酶，小肽提高了2-3.3％，苦味值从3-4降到0-1。以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12