本发明涉及功能性保健食品及药品技术领域，尤其涉及一种补充维生素kd钙的软胶囊以及该补充维生素kd钙的软胶囊的制备方法。
背景技术
维生素k又叫凝血维生素，是维生素的一种，天然的维生素k已经发现有两种：一种是在苜蓿中提出的油状物，称为维生素k1；另一种是在腐败鱼肉中获得结晶体，称为维生素k2。维生素k1为黄色油状物，熔点-20℃。维生素k2为黄色晶体，熔点53.5～54℃，不溶于水，能溶于醚等有机溶剂。维生素k具有防止新生婴儿出血疾病、预防内出血及痔疮、减少生理期大量出血、促进血液正常凝固的作用。维生素k参与合成bgp(维生素k依赖蛋白质)，bgp能调节骨骼中磷酸钙的合成。特别对老年人来说，他们的骨密度和维生素k呈正相关。经常摄入含大量维生素k的绿色蔬菜的妇女能有效降低骨折的危险性。
胆钙化醇(又称为维生素d3或胆钙化固醇)是维生素d的一种，胆固醇脱氢后生成的7-脱氢胆固醇经紫外线照射即可形成胆钙化醇，因此也就是说胆钙化醇的维生素d原是7-脱氢胆固醇。胆钙化醇在肝脏中经羟化酶系作用形成25-羟胆钙化醇，再在肾脏中被羟化为1,25-二羟胆钙化醇，这种物质的活性较胆钙化醇高50％，被证明是维生素d在体内的真正活性形式。维生素d缺乏会导致少儿佝偻病和成年人软骨病。
现代生活中，随着人们日常饮食日益精细化，许多食品的加工过程都脱除了大部分的维生素组分，例如大米、小麦等的精加工过程，进一步加剧了维生素缺乏症。现有技术中的部分维生素kd钙补剂使用大豆油作为基质，其营养成分较少，无法满足现代生活对于维生素的需求。
技术实现要素：
为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种补充维生素kd钙的软胶囊，以解决现代生活中因饮食精细化导致的维生素k、维生素d以及钙缺乏引起的各种疾病，防止钙吸收不足以及钙流失的症状出现。
本发明的目的之二在于提供一种补充维生素kd钙的软胶囊的制备方法，通过该方法制备的补充维生素kd钙的软胶囊同时具备补充维生素a、维生素d以及钙的作用，吸收效率高。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
一种补充维生素kd钙的软胶囊，包括内容物和胶囊壳，按重量份计，所述内容物包括维生素k21～10份、维生素d3油0.01～0.5份、碳酸钙300～500份、蜂蜡10～50份、大豆油500～700份、麦芽浆10～50份以及鸡蛋黄10～20份；
所述胶囊壳包括明胶160～320份、纯化水160～320份、甘油50～150份以及二氧化钛10～30份。
进一步地，所述维生素k2为3～8份，所述维生素d3油为0.03～0.1份，所述碳酸钙为350～450份，所述蜂蜡为15～25份，所述大豆油为550～650份，所述麦芽浆为20～40份，所述鸡蛋黄为12～16份；
所述明胶为200～280份、纯化水200～280份、甘油80～120份以及二氧化钛16～22份。
进一步地，所述维生素k2为7份，所述维生素d3油为0.07份，所述碳酸钙为400份，所述蜂蜡为20份，所述大豆油为572.93份，所述麦芽浆为25份，所述鸡蛋黄为14份；
所述明胶为240份、纯化水240份、甘油96份以及二氧化钛18.72份。
本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
上述任一项补充维生素kd钙的软胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
制备内容物料液：将1/3(重量份)的大豆油、鸡蛋黄与维生素d3油混匀后加入维生素k2，搅拌混匀制得第一内容物料液；将剩余的大豆油与蜂蜡混合并升温至60～80℃，加入麦芽浆及碳酸钙，搅拌混合均匀后，过胶体磨2～3次、抽真空、过80～120目筛，制得第二内容物料液；混合第一内容物料液与第二内容物料液，制得内容物料液；
制备胶囊壳料液：预先混合甘油和纯化水并升温至70～90℃，再向其中加入明胶及二氧化钛，70～90℃下搅拌混匀、抽真空、过80～120目筛，制得胶囊壳料液；
压制成型：取胶囊壳料液和内容物料液压制成型，制得补充维生素kd钙的软胶囊。
进一步地，还包括益生菌发酵步骤，向制得的内容物料液中添加纯化水稀释，将稀释的内容物料液转移至105～121℃下熟化、灭菌5～15min，自然冷却至室温，接种益生菌剂1～5份，35～40℃条件下无氧发酵5～10天，无氧发酵结束后，浓缩发酵液待用；
其中，内容物料液与纯化水的重量之比为1:1～5，无氧发酵过程中每间隔6～12h搅拌内容物料液一次；以及，
所述益生菌剂为鼠李糖乳杆菌、干酪乳酸菌和植物乳杆菌中的至少一种与保加利亚杆菌及长双歧杆菌组成的混合菌剂。
进一步地，所述益生菌剂为鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚杆菌和长双歧杆菌组成的混合菌剂，所述益生菌剂为2～3份；
其中，鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚杆菌以及长双歧杆菌的数量之比为1:1～5:1:1～5。
进一步地，所述内容物料液与纯化水的重量之比为1:2，所述益生菌剂为3份，38℃条件下无氧发酵7天；
所述发酵液浓缩至含水量低于25％。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
(1)本发明一种补充维生素kd钙的软胶囊，具有吸收率高、生物利用率高等特点，具体表现为：使用时方便，机体服用后，具有钙质吸收率高、生物利用率高等特点，具体表现为：促进机体身长的生长，同时，促进机体体重增加，使用本发明制备的补充维生素kd钙的软胶囊能够显著提升股骨重量、骨钙含量、中点骨密度和远端骨密度，改善青少年缺钙情况以及防止中老年人钙流失，促进钙吸收及游离钙转化为组成钙。本发明补充维生素kd钙的软胶囊还具有显著改善钙流失患者的睡眠质量、易疲劳状况等优点。
(2)本发明一种补充维生素kd钙的软胶囊的制备方法具有制备过程简单、成本低，方便大规模生产，通过该方法制备的补充维生素kd钙的软胶囊能够显著促进身体生长、促进钙吸收，改善睡眠质量以及易疲劳状况。
具体实施方式
下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
以下，通过实施例1～12来说明本发明补充维生素kd钙的软胶囊的制备过程。
实施例1-6为6种不同的补充维生素kd钙的软胶囊，该6种不同的补充维生素kd钙的软胶囊的制备过程均包括制备内容物料液步骤、制备胶囊壳料液步骤和压制成型步骤。该6种不同的补充维生素kd钙的软胶囊的制备过程的差异仅在于原料配比及工艺参数的不同。
制备内容物料液：将占总重量1/3的大豆油、鸡蛋黄与维生素d3油混匀后加入维生素k2，搅拌5～10min制得第一内容物料液。将剩余的大豆油与蜂蜡加入乳化锅中混合并升温，蜂蜡融化并与大豆油混合，再向乳化锅中加入麦芽浆及碳酸钙，搅拌混合均匀后，过胶体磨2～3次、抽真空、过80～120目筛，制得第二内容物料液。混合第一内容物料液与第二内容物料液，制得内容物料液。维生素k2、维生素d3油、碳酸钙、蜂蜡、大豆油、乳化锅温度、麦芽浆及鸡蛋黄的用量参见表1。
表1
制备胶囊壳料液：预先将甘油和纯化水加入至乳化锅中，混合并升温至70～90℃，恒温条件下继续再向乳化锅中加入明胶及二氧化钛，搅拌混匀、抽真空、过80～120目筛，制得胶囊壳料液。甘油、纯化水、明胶及二氧化钛的用量以及乳化锅温度参见表2。
表2
压制成型步骤：将上述制备的胶囊壳料液和内容物料液上机，调试机器参数并通过压制法压制成型，制得补充维生素kd钙的软胶囊，补充维生素kd钙的软胶囊的重量大致为1.0g/粒。
实施例7-12为另外6种不同的补充维生素kd钙的软胶囊，该6种不同的补充维生素kd钙的软胶囊的制备过程均包括制备内容物料液步骤、益生菌发酵步骤、制备胶囊壳料液步骤和压制成型步骤。实施例7与实施例1的区别仅在于益生菌发酵步骤；实施例8与实施例2的区别仅在于益生菌发酵步骤；实施例9与实施例3的区别仅在于益生菌发酵步骤；实施例10与实施例4的区别仅在于益生菌发酵步骤；实施例11与实施例5的区别仅在于益生菌发酵步骤；实施例12与实施例6的区别仅在于益生菌发酵步骤。
益生菌发酵步骤：向制得的内容物料液中添加纯化水进行稀释，搅拌均匀，将稀释的内容物料液转移至高温灭菌锅中进行熟化、灭菌，灭菌完成后，将内容物料液转移至无菌条件下自然冷却至室温。冷却的内容物料液接种益生菌剂并进行无氧发酵，无氧发酵过程中每间隔一定时间搅拌内容物料液一次。无氧发酵结束后，通过旋转蒸发仪浓缩发酵液至含水量低于25％，制得发酵的内容物料液。其中，内容物料液与纯化水的重量比(料水比)、高温灭菌锅的灭菌温度、灭菌时间、益生菌剂的接种量、无氧发酵的温度、无氧发酵的时间、搅拌间隔时间以及旋转蒸发仪的水浴温度参见表3。
表3
上述表3中，混合菌剂为鼠李糖乳杆菌剂、干酪乳酸菌剂和植物乳杆菌剂中的至少一种与保加利亚杆菌剂及长双歧杆菌剂组成的复合益生菌剂。其中，鼠李糖乳杆菌剂中鼠李糖乳杆菌的数量、干酪乳酸菌剂中干酪乳酸菌的数量、植物乳杆菌剂中植物乳杆菌的数量、保加利亚杆菌剂中保加利亚杆菌的数量、长双歧杆菌剂中长双歧杆菌的数量均为4×106个/g。
补充维生素kd钙的软胶囊的效果评估
材料与方法
受试物：实施例1-12制备的补充维生素kd钙的软胶囊，摄食量按180mg补充维生素kd钙的软胶囊(每60kg成人体重计)，可折算为30mg/kgbw，样品(掺杂到饲料中)以灌胃方式给予。
试验动物：清洁级sd种健康大鼠130只，体重75～85g，由南方医科大学实验动物中心提供。
给药方法：大鼠适应性喂养3d后，随机分为13组，每组10只，分别为对照组(灌胃普通饲料)、实验组a(灌胃掺杂有实施例1制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组b(灌胃掺杂有实施例2制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组c(灌胃掺杂有实施例3制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组d(灌胃掺杂有实施例4制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组e(灌胃掺杂有实施例5制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组f(灌胃掺杂有实施例6制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组g(灌胃掺杂有实施例7制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组h(灌胃掺杂有实施例8制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组i(灌胃掺杂有实施例9制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组j(灌胃掺杂有实施例10制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组k(灌胃掺杂有实施例11制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)、实验组l(灌胃掺杂有实施例12制备的补充维生素kd钙的软胶囊的普通饲料)。各实验组大鼠每日灌胃量为每kg体重给予30mg补充维生素kd钙的软胶囊，继续喂养至13周，实验结束时检测各组大鼠的股骨重量、股骨密度及骨钙含量(包括中点骨密度和远端骨密度)。
股骨密度测定：股骨样品采用单光子骨密度仪(sd-1000)测定中点及远心端的骨密度。骨钙含量测定：取烘干至恒重的右侧股骨称重、经混合酸(硝酸：高氯酸＝4:1)湿消化后，以0.5％的氧化镧溶液定容，采用原子吸收分光光度计测定其含钙量。
表4补充维生素kd钙的软胶囊对大鼠股骨重量、骨钙含量及骨密度的影响(n＝10，x±s)
注：*表示各实验组与对照组比较，差异显著(p<0.05)；**表示各实验组与对照组比较，差异极显著(p<0.01)；#表示除实验组c外的其它实验组与实验组c比较，差异显著(p<0.05)；##表示除实验组c外的其它实验组与实验组c比较，差异极显著(p<0.01)。
由表4结果可知，实验组a-l相比于对照组，股骨重量均表现为显著增加，表明实施例1-12制备的补充维生素kd钙的软胶囊能显著提升大鼠的股骨重量、促进大鼠增长，其中实施例9-12制备的补充维生素kd钙的软胶囊能极显著提升大鼠的股骨重量。另外，实验组h-j相比于实验组c，均表现为差异显著，其中，实验组i对应的平均股骨重量最大，大鼠的生长率最高，具有最好的促进大鼠生长的效果，大鼠吸收率更高。
由表4结果可知，实验组c、实验组g-l相比于对照组，骨钙含量均表现为极显著增加，实验组a、b、d及e相比于对照组，骨钙含量均表现为显著增加。结果表明实施例1-6制备的补充维生素kd钙的软胶囊相比于不含有本发明补充维生素kd钙的软胶囊的对照组具有较好的促进钙吸收效果，其中，实施例3制备的补充维生素kd钙的软胶囊对大鼠的促进钙吸收作用最优。实施例7-12制备的补充维生素kd钙的软胶囊相比于不含有本发明补充维生素kd钙的软胶囊的对照组具有极显著的促进钙吸收效果，骨钙含量出现极显著的提升。实施例7-12制备的补充维生素kd钙的软胶囊相比于实施例1-6制备的补充维生素kd钙的软胶囊，具有更优的促进钙吸收及转化为骨质钙(即组成钙)的作用。与实验组c相比，实验组i、j中的骨钙含量表现为显著的上升，具有更好地促进钙吸收及转化为骨质钙(即组成钙)的作用。由此可知，实施例7-12制备的补充维生素kd钙的软胶囊相比于实施例1-6制备的补充维生素kd钙的软胶囊具有更好的生物利用度。
同理，由表4结果可知，实验组a-l相比于对照组，中点骨密度均表现为极显著增加，表明实施例1-12制备的补充维生素kd钙的软胶囊能极显著提升大鼠的股骨重量，促进大鼠生长。实验组i、实验组j相比于实验组c，中点骨密度差异显著(升高显著)。表明相比于实施例3制备的补充维生素kd钙的软胶囊，实施例9及实施例10制备的补充维生素kd钙的软胶囊均能显著提升中点骨密度，促进大鼠身体生长。
由表4结果可知，相比于对照组，实验组a-l的远端骨密度均表现为极显著增加，表明实施例1-12制备的补充维生素kd钙的软胶囊相比于不含有本发明补充维生素kd钙的软胶囊的对照组能极显著提升大鼠的远端骨密度，促进大鼠机体生长，促进钙质吸收。其中，实验组i、j相比于实验组c，远端骨密度差异极显著，表现为远端骨密度的极显著升高；实验组h相比于实验组c，远端骨密度差异显著，表现为远端骨密度的显著升高。上述结果表明：实施例7-12制备的补充维生素kd钙的软胶囊相比于实施例3制备的补充维生素kd钙的软胶囊具有更好的促进钙吸收效率以及促进促进身体生长的效果，其中，实施例9制备的补充维生素kd钙的软胶囊的促生长、促钙吸收效果最佳。
改善疲劳及睡眠状况的评估
随机收纳150诊断为老年性缺钙的钙流失老年患者，随机分成三组：对照组、未发酵胶囊组和发酵胶囊组。统计150例钙流失老年患者在接受治疗前后的易疲劳程度、睡眠状况。治疗方法：未发酵胶囊组的患者每日早晚各一次口服实施例3制备的补充维生素kd钙的软胶囊一粒、发酵胶囊组的患者每日早晚各一次口服实施例9制备的补充维生素kd钙的软胶囊一粒、对照组的患者照常饮食，持续两个月。具体易疲劳程度评估方法为：150例患者接受治疗前后均被要求连续阅读小说1h，阅读完之后征询患者的疲劳状况。疲劳程度包括：非常疲劳、疲劳感显著、略微疲劳、精力充沛四个等级。统计结果见表5。具体睡眠状况评估方法为：夜间醒来5次以上(即间歇性睡眠)或者难以入眠者计为睡眠差、夜间醒来3-4次计为睡眠较差、夜间醒来1-2次计为睡眠一般、夜间不间断睡眠计为睡眠优，共四个等级。统计结果见表6。
表5
如表5所示，相比于碳酸钙对照组，实施例3制备的补充维生素kd钙的软胶囊和实施例9制备的补充维生素kd钙的软胶囊均能显著改善钙流失老年患者的易疲劳状况，其中，经过益生菌发酵之后的补充维生素kd钙的软胶囊具有更好的改善易疲劳状况的效果。
表6
如表6所示，相比于对照组，实施例3制备的补充维生素kd钙的软胶囊和实施例9制备的补充维生素kd钙的软胶囊均能显著改善钙流失老年患者的睡眠状况，其中，经过益生菌发酵之后的补充维生素kd钙的软胶囊具有更好的改善睡眠状况的效果。
综上所述，包含有益生菌发酵步骤制备的补充维生素kd钙的软胶囊在生物利用度、改善睡眠、改善易疲劳状况等方面均表现出更优的效果，这可能与益生菌发酵过程产生了多种有益代谢物有关，例如多种维生素(包括维生素d、维生素k)、大分子多糖、氨基酸、不饱和脂肪酸等，辅助维生素a、维生素d3的吸收。这些有益代谢物以及益生菌群一方面能够改善大鼠的肠道内生态微环境，提升机体免疫水平、改善睡眠和改善易疲劳状况；另一方面，这些有益代谢物也能提升机体消化吸收能力，提升钙的生物利用度、促进机体对营养物质的吸收，进而促进身体生长。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。