一种具有抗衰老功效的燕窝组合物及其制备方法和应用与流程

本申请属于保健品领域，涉及一种具有抗衰老功效的燕窝组合物及其制备方法和应用。

背景技术：

人的衰老与体内自由基的关系极为密切。自由基代谢及其清除系统平衡失调，修复遗传物质损伤的功能减退；负责清除自由基的超氧化物歧化酶的活性降低，生物新陈代谢过程中产生的超氧阴离子自由基、羟自由基等不能被有效地清除，可能使生物膜的不饱和脂肪酸发生氧化而影响结构，攻击蛋白质使之发生交联而改变了它的功能，进而损伤引起突变，加速衰老。因此清除自由基的抗氧化作用和修复作用一直是抗衰老的重要关注方向。

燕窝一直是传统滋补佳品，它的益气补中、增强免疫力、养阴润燥、延缓衰老等功效，主要源于中医相关记载和理论。目前的燕窝制品主要是炖煮的冰糖燕窝，成分只有燕窝和冰糖，单一配方并不能将燕窝的功能性发挥到最好，基于此，燕窝的营养价值和价格在市场上也出现了很大争议。

近年来虽然有一些新型燕窝制品出现，如专利cn104886589公开的冲泡即食燕窝制品，专利cn102273639公开的燕窝香体制品，专利cn102102119公开的燕窝寡胎组合物制品，但真正经过功效验证的好吃、便利、高性价比的燕窝配方抗衰老功能产品却少之又少。

技术实现要素：

本申请的主要目的在于提供一种具有抗衰老功效的燕窝组合物及其制备方法和应用，以解决现有燕窝制品抗衰老功能较差的问题。

为了实现上述目的，本申请提供了以下技术方案：

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：

进一步地，所述燕窝组合物包括以下质量份的组分：

作为一种优选，包括以下质量份的组分：燕窝制品5份、低聚糖300份、抗氧化成分50份、弹性蛋白肽5份、软骨胶原蛋白肽或鱼皮胶原蛋白肽500份。

进一步地，所述燕窝制品为燕窝水提取物、燕窝寡肽中的一种或任意比例组合。

进一步地，所述低聚糖为水苏糖、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖中的一种或任意比例组合物。

进一步地，所述抗氧化成分为维生素c或富含维生素c的植物提取物、维生素e、维生素b、谷胱甘肽、虾青素、红石榴提取物中的一种或任意比例组合。

进一步地，所述燕窝水提取物中唾液酸含量≥100mg/g，燕窝寡肽主要分子量≤1000d的高斯分布峰面积百分比超过80％，且唾液含量≥100m/g。

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物的制备方法，将上述重量份的燕窝制品，低聚糖，抗氧化成分，弹性蛋白肽，以及软骨胶原蛋白肽或鱼皮胶原蛋白肽在40℃以下混合搅拌均匀，即得燕窝组合物。

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物在食品上的应用，将上述燕窝组合制成如下食品：压片糖果、固体饮料、液态饮料、烘焙食品、谷物棒、坚果棒、罐头食品。

进一步地，所述食品按重量百分比计，包括30-90％的燕窝组合物。

本发明的有益效果在于：

1、本发明所提供的具有抗衰老功效的燕窝组合物通过多功能组分的搭配，突破了传统技术燕窝只和冰糖搭配的单一模式；有利于改善现有膳食结构和工业食品中添加糖过多而对健康造成的诸多不利影响；组合物中低聚糖带来的淡甜味甜而不腻，使添加了本发明燕窝组合物的食品更加好吃；组合物性质稳定，应用范围广泛，使燕窝产品增添了更多选择，从而使产品更易商业化；燕窝组合物降低了燕窝原料的使用量，但提高了产品的功效作用，使得燕窝产品具有更高性价比，从而吸引更广的消费人群，产生更大推广价值。

2、本发明所提供的具有抗衰老功效的燕窝组合物，经过细胞学试验验证：相比于同等浓度的普通燕窝，本发明燕窝组合物能显著降低活性氧(ros)含量(p＜0.05)，有效改善氧化应激；本发明燕窝组合物能显著降低丙二醛(mda)含量(p＜0.05)，减轻细胞的氧化应激损伤；本发明燕窝组合物能显著增加超氧化物歧化酶(sod)和谷胱甘肽过氧化酶(gsh-px)活力(p＜0.05)，使细胞清除ros、减轻氧化应激的能力增强；本发明燕窝组合物能显著刺激hacat细胞增殖，培养24小时后细胞密度大于同等浓度普通燕窝。因此与同等浓度普通燕窝相比，本发明燕窝组合物可以通过显著的抗氧化作用和刺激细胞生长修复作用更好的发挥抗衰老功效。

附图说明

构成本申请的一部分的附图用来提供对本申请的进一步理解，使得本申请的其它特征、目的和优点变得更明显。本申请的示意性实施例附图及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：

图1为燕窝提取物预处理2h对细胞ros的影响对比图(注：与对照组相比，#p＜0.05，与模型组相比，*p＜0.05)。

图2为燕窝提取物预处理2h对细胞mda含量的影响对比图(注：与对照组相比，#p＜0.05，与模型组相比，*p＜0.05)。

图3为燕窝提取物预处理2h对细胞sod活力的影响对比图(注：与对照组相比，#p＜0.05，与模型组相比，*p＜0.05)。

图4为燕窝提取物预处理2h对细胞gsh-px活力的影响对比图(注：与对照组相比，#p＜0.05，与模型组相比，*p＜0.05)。

图5为燕窝提取物(200μmol/ml)处理24h对细胞增殖的影响对比图((a)对照组，(b)普通燕窝提取物组，(c)燕窝组合物提取物组)。

图6为抗衰老燕窝压片糖果受试人体验效果图(左侧为受试人原始皮肤状态，右侧为服用抗衰老燕窝压片糖果两月后皮肤状态)。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本申请方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。

下面将参考附图并结合实施例来详细说明本申请。

实施例1

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：燕窝寡肽5份，水苏糖100份，低聚果糖300份，弹性蛋白肽3份，抗氧化成分100份，鱼皮胶原蛋白肽800份。具体的制备方法如下：

将上述质量份数的原料在40℃以下混合搅拌均匀，即的燕窝组合物。

将燕窝组合物溶解于水中，混匀杀菌得燕窝制品罐头；其中，按重量百分比计，燕窝组合物占40％。

实施例1抗衰老功效测试：抗氧化活性及修复活性细胞学实验。

1.材料与试剂

人胚肺成纤维细胞株(mrc-5)，人皮肤表皮角质形成细胞(hacat)，中国医学科学院基础医学研究所提供；mem(modifiedeaglemedium)培养基、mem(含neaa)培养基磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline，pbs)、平衡盐缓冲液(hank’sbalancedsaltsolution，hbss)、胎牛牛血清，美国gibco；燕窝组合物、普通燕窝、cck-8试剂盒(cellcountingkit-8)、dcfh-da、二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，dmso)，胰蛋白酶，ripa裂解液、sod试剂盒、mda试剂盒、gsh-px试剂盒，碧云天生物技术研究所。

2.仪器与设备

倒置生物显微镜，日本olympus公司；生物安全柜，中国济南鑫贝西生物技术有限公司；37℃co2培养箱，日本松下公司；spectramaxi3酶标仪，美国md公司；分析天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；超声波清洗仪，昆山超声仪器有限公司kq-250de；gl-20g-ⅱ型高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；冷冻干燥机，北京松源华兴科技发展有限公司。

3.试验方法

3.1样品提取

分别取75g燕窝组合物和普通燕窝加入适量的水混匀后剪切10min，于高速冷冻离心机7500r/min，4℃条件下离心10min，取上清于50ml离心管中，放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，直至所有液体升华，回收样品进行下一步实验。

3.2细胞的体外培养与冻存

3.2.1人胚肺成纤维细胞株mrc-5的体外培养与冻存

人胚肺成纤维细胞株mrc-5细胞培养于含有10％胎牛血清、青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml的mem培养基中(下文简称mem10)，于37℃、含5％co2以及90％相对湿度的培养箱中常规培养。当细胞生长至80％～90％融合时，移除旧培养液，用pbs溶液润洗细胞层，用3ml0.05％胰蛋白酶消化细胞10min，待细胞消化至漂浮状态后，加入3mlmem10终止胰蛋白酶消化反应。将细胞用移液枪吹打形成细胞悬液，可进行细胞传代，放置培养箱中常规培养。

人胚肺成纤维细胞株mrc-5细胞需冻存时，移除旧培养液，用pbs溶液润洗细胞层，用3ml0.05％胰蛋白酶消化细胞10min，待细胞漂浮后，加入3mlmem10终止胰蛋白酶消化反应。将细胞用移液枪打散形成细胞悬液，收集并离心，弃培养基，向细胞中加入冻存液(基础培养基+20％fbs+8％dmso)，移入冻存管，并标记。将装有细胞的冻存管放入4℃冰箱，约30min，接着置于-20℃冰箱，约30-60min，置于-80℃超低温冰箱中放置过夜，置于液氮罐中长期保存。

3.2.2人皮肤表皮角质形成细胞株hacat的体外培养与冻存

人皮肤表皮角质形成细胞株hacat细胞培养于含有10％胎牛血清、青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml的mem(ness)培养基中(下文简称mem(n)10)，于37℃、含5％co2以及90％相对湿度的培养箱中常规培养。当细胞生长至80％～90％融合时，移除旧培养液，用pbs溶液润洗细胞层，用1ml0.25％胰蛋白酶消化细胞10min，待细胞分散后，加入3mlmem(n)10终止胰蛋白酶消化反应。将细胞用移液枪吹打形成细胞悬液，可进行细胞传代，放置培养箱中常规培养。

人皮肤表皮角质形成细胞株hacat细胞需冻存时，移除旧培养液，用pbs溶液润洗细胞层，用1ml0.25％胰蛋白酶消化细胞10min，待细胞分散后，加入3mlmem(n)10终止胰蛋白酶消化反应。将细胞用移液枪打散形成细胞悬液，收集并离心，弃培养基，向细胞中加入冻存液(基础培养基+20％fbs+8％dmso)，移入冻存管，并标记。将装有细胞的冻存管放入4℃冰箱，约30min，接着置于-20℃冰箱，约30-60min，置于-80℃超低温冰箱中放置过夜，置于液氮罐中长期保存。

3.3mrc-5氧化应激细胞模型的构建

3.3.1h2o2的cck-8细胞毒理学实验

取96孔培养板，每孔加100μl细胞悬液，细胞浓度为1×10⁵个/ml，37℃培养24h后弃去培养液，用pbs清洗一次，每孔加入50，100，150，200，250，300，400，500μmol/l等8个不同浓度h2o2100μl，以无h2o2的相同培养基孵育细胞为对照，培养24h后每孔加入10μlcck-8溶液于37℃避光孵育2h。用酶标仪在450nm处测定吸光度值。以对照组细胞的细胞存活率为100％计算其余组别细胞存活率。

3.3.2氧化应激细胞模型的构建

选取对细胞生长影响不大的h2o2浓度诱导氧化应激细胞模型，并测定sod、ros等指标进一步确定模型建立是否成功。

3.3.2.1蛋白浓度(bca)测定

各组细胞加样处理24h后，小心弃去培养液，用pbs洗1次，用ripa裂解液裂解30min，用bca试剂盒测定蛋白浓度。

3.3.2.2sod的测定

sod的测定：各组细胞加样处理24h后，小心弃去培养液，用pbs洗1次，用ripa裂解液裂解30min，用sod试剂盒测定sod的活力。结果除以蛋白含量为最终表示结果。

3.3.1.3ros的测定

各组细胞加样处理24h后，小心弃去培养液，pbs洗1次，加入25μm的dcfh-da作用30min，吸出dcfh用pbs洗2次，每孔加入300μl胰酶消化5min后，用700μl完全培养基终止消化，吹打均匀后用流式细胞仪测定荧光强度。结果以模型组ros含量的百分比表示(％)。

3.3.1.4mda的测定

各组细胞加样处理24h后，弃去培养液，用细胞刮将细胞刮下，用mda试剂盒测定mda含量，结果除以蛋白含量为最终表示结果。

3.3.1.5gsh-px的测定

各组细胞加样处理24h后，小心弃去培养液，用pbs洗1次，用ripa裂解液裂解30min，用gsh-px试剂盒测定gsh-px的活力。

3.4燕窝组合物及普通燕窝对mrc-5细胞氧化应激损伤的预保护作用

3.4.1燕窝组合物及普通燕窝的cck-8细胞毒理学实验

分别选择200,400,500,600,800,1000μg/ml等5个不同浓度的燕窝组合物及普通燕窝测定三种样品对mrc-5细胞增殖的影响，实验方法同3.3.1。

3.4.2实验分组

在建立的氧化应激细胞模型的基础上观察燕窝提取物对氧化应激损伤的细胞产生的影响。

将细胞以3.5×10⁶个/ml浓度接种于96孔板，待细胞贴壁并长满时，用pbs润洗细胞一次，加入不同的处理液。细胞分组为对照组：纯培养基、模型组：300μm/lh2o2组以及模型组中提前加入各燕窝提取物孵育2h的实验组(终浓度200-400μg/ml)。细胞上样前用pbs缓冲液洗一次，上样后37℃孵育24h,测定各组的sod、ros、mda、gsh-px，测定方法同3.3.2。

3.5燕窝组合物及普通燕窝对hacat细胞增殖的影响

分别选取10，25，50，100，200，300，400，500μg/ml等8个不同浓度的燕窝组合物及普通燕窝测定三种样品对hacat细胞增殖的影响，实验方法同3.3.1。

4.结果与分析

4.1mrc-5氧化应激细胞模型的构建

4.1.1h2o2对mrc-5细胞增殖的影响

细胞毒理学实验是用来评价化合物对细胞增殖影响的一种方法，通过该实验可以得出化合物可以作用于细胞的安全浓度。本实验得出，不同浓度h2o2处理细胞24h后，h2o2从250μmol/l显著抑制细胞生长(p<0.05)。由于氧化应激对细胞具有一定的损伤作用，h2o2达到400μmol/l时，对细胞的抑制率大于50％严重影响细胞的生长繁殖。因此后续诱导氧化应激模型实验中选择上样浓度为100，150，200，250，300μmol/l。

4.1.2氧化应激细胞模型的构建

ros是氧化应激的主要标志物之一，产生氧化应激损伤的主要原因是体内生成的ros超出了机体生理范围量。ros持续高浓度存在，会导致肺纤维化、动脉粥样硬化等疾病的发生。本实验得出，h2o2处理24h后，ros活力呈现先降低后增加的趋势，这说明当细胞出现轻度的氧化应激时，能够通过自身的调节能力降低ros含量，减轻氧化应激对细胞带来的损伤，但是随着h2o2浓度不断升高氧化应激程度加重，ros含量就会超出自身调节的范围就会并对细胞造成伤害。

sod是机体抗氧化的主要酶类之一，sod活力也是判定化合物抗氧化能力的指标之一。本实验得出，h2o2处理24h后，sod活力呈现先增加后降低的趋势，这种趋势与ros的结果相一致，细胞出现轻度的氧化应激时，能够增加sod的酶活力来降低氧化应激，从而减低对细胞带来的损伤，但是当氧化应激超出自身调节的范围是就会抑制sod的酶活力，此时ros的量增多并对细胞造成损伤。

本实验得出，当h2o2达到300μmol/l时，ros含量显著增加(p<0.05)，sod含量降低证明产生的氧化应激已经超过细胞自身的抗氧化能力，因此选择300μmol/l为造模浓度。

4.2燕窝提取物及燕窝肽对mrc-5细胞氧化应激损伤的预保护作用

4.2.1燕窝组合物及普通燕窝对mrc-5细胞增殖的影响

通过细胞毒理学实验，得出燕窝组合物及普通燕窝作用于细胞的安全浓度进行后续的预保护实验。低浓度的燕窝组合物及普通燕窝促进细胞生长，高浓度抑制细胞生长，200-400μg/ml不影响mrc-5细胞活力，因此选择此浓度范围进行后续的预保护实验。

4.2.2燕窝组合物及普通燕窝对mrc-5细胞氧化应激损伤的预保护作用

由图1可知，与对照组相比模型组ros含量显著增加(p<0.05)，表明氧化应激模型建立成功。与模型组和同浓度普通燕窝相比，燕窝组合物在200-400μmol/l预处理2h能显著降低ros含量(p<0.05)，传统燕窝在200μmol/l对ros含量无显著影响，因此表明燕窝组合物清除ros的能力增强，能够有效改善氧化应激。

mda是细胞膜脂质过氧化最重要的产物之一，它的生成表明细胞出现氧化应激损伤。由图2可知，与对照组相比模型组mda含量显著增加(p<0.05)，表明模型组出现氧化应激。与模型组和同浓度普通燕窝相比，燕窝组合物在400μmol/l预处理2小时显著降低mda含量(p<0.05)，普通燕窝提取物不能显著减低mda含量。因此，表明本发明燕窝组合物能有效清除细胞产生的mda，减轻细胞的氧化应激损伤。

由图3可知，与对照组相比模型组sod活力显著降低(p<0.05)，说明模型组出现氧化应激。与模型组和同浓度普通燕窝相比，燕窝组合物预处理2小时能显著增加sod酶活力(p<0.05)。细胞内sod酶活力增加，表明细胞清除ros、减轻氧化应激的能力增强。因此本发明燕窝组合物能通过增加sod酶活力改善氧化应激。

gsh-px是除ros以外的另一类抗氧化酶，其活力能间接反应机体的氧化应激水平同时也可以判断化合物的抗氧化能力。由图4可知，与对照组相比模型组gsh-px活力显著降低(p<0.05)，燕窝组合物在400μmol/l预处理2小时，与模型组和同浓度普通燕窝相比能显著增加gsh-px活力(p<0.05)，因此，说明燕窝组合物能有效减轻细胞的氧化应激损伤。普通燕窝能不增强gsh-px活力但是与模型组相比无显著性。

上述实验结果表明，与对照组相比，模型组的ros、mda含量显著增多(p<0.05)，sod、gsh-px的活力显著降低(p<0.05)，表明模型建立成功。相比于同等浓度的普通燕窝，本发明燕窝组合物能显著降低活性氧(ros)含量(p<0.05)，有效改善氧化应激；本发明燕窝组合物能显著降低丙二醛(mda)含量(p<0.05)，减轻细胞的氧化应激损伤；本发明燕窝组合物能显著增加超氧化物歧化酶(sod)和谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)活力(p<0.05)，使细胞清除ros、减轻氧化应激的能力增强，从而更好的发挥抗衰老功效。

4.3燕窝提取物及燕窝肽对hacat细胞增殖的影响

皮肤创伤修复的基本方式是由伤后增生的细胞和细胞间质，通过填充、连接或代替损伤的组织，因此细胞增生是创伤修复的重要过程。皮肤老化是由于表皮角质形成细胞生长和更新速度减慢，胶原和弹性纤维合成能力下降，表皮和真皮变薄导致皮肤拉伸后弹性恢复力减弱。因此，在皮肤松弛在皮肤损伤修复、抗老化过程中，表皮角质形成细胞的生长、分化至关重要。

如图5所示，200μmol/ml的燕窝组合物显著刺激hacat细胞增殖，培养24小时后，细胞密度大于普通燕窝组。因此，燕窝组合物在200μmol/ml时显著刺激hacat的生长分化，发挥抗衰老效功效。

实施例2

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：燕窝寡肽10份、水苏糖200份、低聚半乳糖300份、针叶樱桃提取物30份、红石榴提取物50份、弹性蛋白肽6份、鱼皮胶原蛋白肽800份。具体的制备方法如下：

将上述质量份数的原料在40℃以下混合搅拌均匀，即的燕窝组合物。

向燕窝组合物中加入硬脂酸镁、糖醇类物质进行压片，得抗衰老燕窝压片糖果；其中，按重量百分比计，燕窝组合物占80％。

实施例2抗衰老功效测试：

受试人情况：33岁，女，皮肤痘印及色素沉着。

抗衰老压片糖果食用方式：每天服用2片(3g/片)，共服用2个月。

服用效果：如图6所示，受试人痘印及色素沉着得到明显改善，皮肤色泽及光泽度显著提亮。

实施例3

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：燕窝水提取物5份，低聚果糖300份，维生素e50份，弹性蛋白肽5份、软骨胶原蛋白肽500份。制备方法与实施例1相同。

实施例4

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：燕窝水提取物3份、低聚半乳糖100份、低聚木糖100份、虾青素10份、维生素b20份、弹性蛋白肽3份、软骨胶原蛋白肽400份。制备方法与实施例1相同。

实施例5

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：燕窝水提取物8份、水苏糖200份、低聚木糖100份、维生素e20份、谷胱甘肽40份、弹性蛋白肽8份、软骨胶原蛋白肽600份。制备方法与实施例1相同。

实施例6

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：燕窝寡肽9份、水苏糖150份、低聚半乳糖250份、维生素c30份、虾青素60份、弹性蛋白肽6份、鱼皮胶原蛋白肽600份。制备方法与实施例2相同。

实施例7

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：燕窝寡肽2份、低聚半乳糖100份、维生素c10份、弹性蛋白肽7份、鱼皮胶原蛋白肽600份。制备方法与实施例2相同。

实施例8

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：燕窝寡肽10份、低聚果糖500份、弹性蛋白肽10份、鱼皮胶原蛋白肽800份。制备方法与实施例2相同。

实施例9

一种具有抗衰老功效的燕窝组合物，包括以下质量份的组分：燕窝寡肽1份、水苏糖100份、弹性蛋白肽1份、鱼皮胶原蛋白肽200份。制备方法与实施例2相同。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。