一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法与流程

本发明属于食品加工技术领域，涉及一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法。

背景技术：

“初闻有异味，深嗅奇香，肉质白嫩如蒜瓣，入口润滑，生津吐香。”描述的就是徽州地区的传统自然发酵食品-徽州臭鳜鱼，其具有悠久的历史传承、独特的地域风味。

臭鳜鱼是以新鲜鳜鱼为原料，配以一定量的香辛料，经低盐、低温、短期腌制发酵而成。经过微生物发酵作用，鳜鱼体内的蛋白质、脂肪及核酸等分子被降解成氨基酸、多肽、脂肪酸、核苷酸及醛、醇、酮等风味物质，营养价值得到提高，风味品质发生变化，并赋予了发酵后鳜鱼似臭非臭、鲜香透骨、鱼肉酥烂的特点。臭鳜鱼独特的风味来自于微生物发酵后得到的醛、醇、酮类等化合物，不同发酵微生物及不同发酵时间导致臭鳜鱼的口感、风味差异较大。传统臭鳜鱼的制作方法，在鳜鱼腌制发酵后，直接进行冷藏或采用热杀菌方法。臭鳜鱼的直接冷藏并没有杀灭臭鳜鱼体内的微生物，当环境回到适宜温度，微生物仍会继续发酵，导致臭鳜鱼出现不愉快的臭味、肉质变烂等问题。强烈的热处理虽能有效杀灭发酵后臭鳜鱼中的微生物、延长臭鳜鱼保质期，但对臭鳜鱼色泽、感官品质、风味物质等产生不良影响，也降低了其营养及食用价值。

随着人们生活水平的提高，越来越多的人喜欢上臭鳜鱼食品，据统计2018年单品销售额高达40亿。目前黄山市场大多是冰鲜臭鳜鱼(冷藏)，春夏季较高温度条件下游客难以带走，臭鳜鱼保质时间短、不宜流通，严重制约了给臭鳜鱼产业的发展。由此可见，采用传统加工、保藏的方法已不能完全满足广大消费者对臭鳜鱼感官、风味、营养的需求。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法，包括下列步骤：

步骤1：将5-30重量份的香薷、10-50重量份的松针和3-20重量份的马齿苋放入不锈钢球磨机中，在氮气保护下研磨至细度60-200目，得到第一混合细粉，备用；

步骤2：将第一混合细粉与质量浓度为30-85％的乙醇按照体积比例1:15-45，然后在负压为-0.02mpa～-0.08mpa的密闭环境中，超声功率为100w-350w、温度为30-55℃条件下，提取0.5-1.0h；提取完成后，采用0.22μm孔径滤纸过滤得到提取液，然后用非极性或弱极性的大孔树脂进行富集纯化，采用质量浓度为30-85％乙醇溶液作为洗脱溶剂、洗脱速度1.2～3.5bv/h进行动态洗脱，得到洗脱液；

步骤3：将洗脱液浓缩至原体积的1/5-1/4；然后喷雾干燥得到粉状物料，即得混合提取物；

步骤4：将0.5-15重量份的茶树花、0.5-20重量份的柳叶蜡梅叶、0.3-10重量份的迷迭香、0.5-20重量份的橘子皮混合，放入不锈钢球磨机中，在氮气保护下研磨至细度40-120目，得到第二混合细粉，备用；

步骤5：将第二混合细粉与蒸馏水按质量比1:15-50混合，然后放入提取罐中，在罐内环境压力100-400mpa、温度45～65℃条件下，蒸馏提取15-40min，将蒸馏产生的气体进行冷凝处理，得到馏出液；将馏出液采用转速2000-3000rpm的离心处理5-8min，收集离心管的上层物质，即为混合精油；

步骤6：将1.8-10重量份的混合提取物、0.18-6.5重量份的混合精油、0.5-2.5重量份的碳酸钠、0.1-1.0重量份的羧甲基壳聚糖、0.5-15重量份的无水乙醇、0.02-26重量份的tween80溶液，余量为去离子水，共计100重量份，混合后以25-35mpa的压力均质，循环处理2-4次后得到植物抑菌组合液；

步骤7：将发酵后的臭鳜鱼沥去表面液体，然后浸没在植物抑菌组合液中，然后超声处理5-30min；

步骤8：将植物抑菌组合液浸泡处理后的臭鳜鱼取出，沥去表面液体，逐条装入食品级塑料袋中，抽真空并封口；

步骤9：将包装后的臭鳜鱼放入超高压舱中，设定加压压力数值为100-500mpa，保压时间为5-25min，升压速率为8～35mpa/s，超高压设备所采用的温度为室温，传压介质为水；达到设定的保压时间后，在0.5～3s内，以卸压速率为100～250mpa/s掉压力。

优选的技术方案为：所述香薷、松针和马齿苋均为含水量5-10％的干制品；所述松针为黄山地区树龄25年以上的，2-10月份收集的松针。

优选的技术方案为：喷雾干燥的进风温度为160-180℃、入料流量为50-80ml/min、喷头转速为20000-25000r/min。

优选的技术方案为：所述茶树花、柳叶蜡梅叶、迷迭香、橘子皮均为含水量5-10％的干制品。

优选的技术方案为：所述tween80溶液的质量浓度为0.5-2％。

优选的技术方案为：步骤7中，超声处理时的超声波频率为25-35khz、功率密度为0.3-0.5w/cm²。

优选的技术方案为：所述食品级塑料袋为食品级高阻隔复合塑料袋或铝箔复合塑料袋。

优选的技术方案为：所述非极性大孔树脂为pipo-00大孔树脂、pipo-01大孔树脂、hpd-100大孔树脂、hpd-300大孔树脂或d101大孔树脂。弱极性大孔树脂为ab-8(ds-401)大孔树脂、cad-40(cad-45)大孔树脂、bs-30大孔树脂、dm30型大孔树脂或d860021大孔树脂。

优选的技术方案为：设定加压压力数值为280-350mpa、保压时间18-20min。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：

1、本发明的植物抑菌组合液的制备工艺采用了微乳化技术，更好地保留了植物活性成分，使抑菌作用效果更为持久，产品性能更为稳定。

2、本发明的功效成分均来源于天然植物，安全可靠，且通过各功效组分间的系统配伍，解决了单一抑菌剂不能同时兼顾抑菌和抗氧化的缺点，具有协同促进的抑菌和抗氧化作用。

3、本发明提供一种臭鳜鱼的非热杀菌方法，该方法相比于单一的超高压处理，通过植物抑菌组合液联合超高压技术能显著增强杀菌效果，还可以有效降低臭鳜鱼保藏过程中硫代巴比妥酸反应物的生成，具有抑菌防腐和抗氧化双重作用，而且避免了对臭鳜鱼色泽、感官品质、风味物质等产生不良影响，提高了臭鳜鱼品质和安全质量。

附图说明

图1为植物抑菌组合液对4种菌的抑菌圈直径。

图2为box-behnken实验设计与因素水平表。

图3为不同处理方式对臭鳜鱼杀菌率的影响。

图4为响应面实验结果。

图5为回归模型方差分析。

图6为不同杀菌方式对臭鳜鱼硬度和皱缩比的影响。

图7为不同杀菌方式对臭鳜鱼色泽和持水性的影响。

图8为不同杀菌方式对臭鳜鱼微观组织结构的影响(a～d分别为新鲜臭鳜鱼组、发酵后臭鳜鱼组、超高压处理组(300mpa)、植物组合液协同超高压处理组)。

图9为不同杀菌方式在30℃、不同保藏时间内菌落总数的变化(lgcfu/g)。

图10为不同杀菌方式在30℃、不同保藏时间内硫代巴比妥酸值的变化(mg/kg)。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。

请参阅图1-10。须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中间”及“一”等的用语，亦仅为便于叙述的明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可实施的范畴。

实施例1：一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法

一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法，其特征在于，包括以下技术步骤。

(1)制备香薷、松针、马齿苋混合提取物

原料混合与粉碎。将20重量份的份香薷、30重量份的松针、10重量份的马齿苋混合，放入不锈钢球磨设备中，抽去空气，充入氮气，然后充分研磨至细度100目，得到混合细粉，备用。所述的香薷、松针、马齿苋均为含水量7％的干制品，无虫害和霉变。优选的，松针为黄山地区树龄25年以上的，2-10月份收集的松针。

提取与纯化。将混合细粉与质量浓度50％的乙醇混合，料液体为1:30，然后在负压强度为-0.05mpa的密闭环境中，超声功率为200w、温度为45℃条件下，提取0.8h。提取完成后，采用0.22μm孔径滤纸过滤得到提取液，然后用非极性或弱极性大孔树脂进行富集纯化，按照洗脱溶剂50％乙醇溶液、洗脱速度2.5bv/h进行动态洗脱，得到洗脱液。本实施例具体选择hpd-300大孔树脂。

浓缩与干燥。将洗脱液在真空表压-0.095mpa、温度50℃条件下，浓缩至原体积的1/5。将浓缩液采用进风温度170℃、入料流量65ml/min、喷头转速22500r/min的喷雾干燥，得到粉状物料，即为香薷、松针、马齿苋混合提取物，简称混合提取物。

(2)制备茶树花、柳叶蜡梅叶、迷迭香、橘子皮混合精油

原料混合与粉碎。将10重量份的茶树花、10重量份的柳叶蜡梅叶、5重量份的迷迭香、10重量份的橘子皮混合，放入不锈钢球磨设备中，抽去空气，充入氮气，然后充分研磨至细度80目，得到混合细粉，备用。所述的茶树花、柳叶蜡梅叶、迷迭香、橘子皮均为含水量7％的干制品，无虫害和霉变。

加压蒸馏。将混合细粉与蒸馏水按质量比1:35混合，然后放入提取罐中，在罐内环境压力250mpa、温度55℃下，蒸馏提取30min，将蒸馏产生的气体进行冷凝处理，得到馏出液。

离心分离。将馏出液采用转速2500rpm的离心处理6min，收集离心管的上层物质，即为茶树花、柳叶蜡梅叶、迷迭香、橘子皮混合精油，简称混合精油。

(3)制备植物抑菌组合液

将5重量份的混合提取物、4重量份的混合精油、1.5重量份的碳酸钠、0.5重量份的羧甲基壳聚糖、10重量份的无水乙醇、15重量份的tween80溶液，余量为去离子水，共计100重量份混合，将混合溶液经过压力30mpa的高压均质循环处理3次，得到微乳化的混合溶液，即为植物抑菌组合液。所述的碳酸钠、羧甲基壳聚糖、无水乙醇、tween80溶液，均为食品级。所述的tween80溶液，其质量浓度为0.1％。

植物抑菌组合液的抑菌效果研究。

(1)菌种活化及菌悬液制备

将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌接种到试管培养基斜面进行活化，于37℃恒温培养箱中培养24h。长出菌落后，在无菌操作台内各挑取已活化好的菌种接种到无菌生理盐水中，配置各菌悬液浓度约为10⁶～10⁷cfu/ml。

(2)抑菌圈法测定抑菌活性

在无菌操作台中将熔化并灭菌的培养基倒入已灭菌的培养皿中，冷却凝固后，加入菌悬液100μl，用涂布棒涂布均匀。用移液枪于无菌直径6mm的滤纸片中央加入10μl不同浓度的本发明制备的植物抑菌组合液(将植物抑菌组合液稀释成100％、50％、25％)，以灭菌蒸馏水为空白对照(control)，以对羟基苯甲酸丙酯(propylparaben，pp)为阳性对照，37℃倒置培养24h后测量抑菌圈直径，结果重复3次，取平均值。

(3)抑菌作用分析

图1为植物抑菌组合液的抑菌作用结果。本发明制备的植物组合液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌均有显著的抑制效果，且植物抑菌组合液在一定质量浓度范围内对4种菌的抑制效果呈浓度依赖性增大。当植物抑菌组合液为原液100％时，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的最大抑菌圈直径分别为(13.75±0.15)，(12.50±0.25)，(14.00±0.25)，(14.25±0.25)mm。

研究结果揭示了本发明制得的植物抑菌组合液对4种食品常见致病菌具有显著的抑制作用，且对4种供试的革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌抑菌作用优于防腐剂(对羟基苯甲酸丙酯)，为植物抑菌组合液在食品中的开发与应用奠定了科学依据。

(4)植物抑菌组合液浸泡处理

将发酵后的臭鳜鱼沥去表面液体，然后浸没在植物抑菌组合液中，然后采用超声波频率30khz、功率密度0.4w/cm²，处理时间20min。

(5)包装与超高压处理

真空包装。将植物抑菌组合液浸泡处理后的臭鳜鱼取出，沥去表面液体，逐条装入食品级塑料袋中，在真空表压-0.09～-0.10mpa环境中热封口。所述的食品级塑料袋，为食品级高阻隔复合塑料袋或铝箔复合塑料袋。

超高压处理。将包装后的臭鳜鱼放入超高压加压舱，设定加压压力数值为100-500mpa，保压时间为5-25min，升压速率为8～35mpa/s，超高压设备所采用的的温度为室温(即20～25℃)，传压介质为水(超高压设备的水)。达到设定的保压时间后，在0.5～3s内(即卸压速率为100～250mpa/s)，快速卸掉压力。

优选的，超高压压力为280-350mpa、保压时间18-20min。

采用所述超高压处理后的臭鳜鱼采用常温贮藏，保质期为30天。

植物抑菌组合液协同超高压杀菌参数优化。

(1)菌落总数测定：分别植物组合液协同超高压处理前后臭鳜鱼的菌落总数。参考gb4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验—菌落总数测定》操作。采用平板计数法测定菌落总数值，在(36±1)℃生化培养箱培养(48±2)h后计数得菌落总数。每组样品选取的相应稀释度做3个平行测定。杀菌率按下式进行计算：

(2)单因素实验：各因素的实验梯度分别为：超高压压力分别为0、100、200、300、400、500mpa；保压时间分别为5、10、15、20、25min；植物抑菌组合液浓度分别为12.5％、25％、50％、75％、100％。在进行单因素实验时，除自身因素变化外，其他因素水平不变，每个实验重复3次，测定不同处理条件的菌落总数。将未经过任何处理的发酵后臭鳜鱼作为对照组，检测其菌落总数的数量，作为本实验的初始值。

(3)响应面实验设计：采用box-behnken设计原理，根据单因素实验的结果设计响应面实验，以菌落总数为响应值，以超高压压力(a)、保压时间(b)、植物抑菌组合液浓度(c)为实验因子，建立响应面优化方案，进行二次多项回归方程拟合及其优化分析，进一步优化提取条件。实验设计与因素水平见图2。

(4)单因素实验结果。如图3所示，注：不同字母表示在统计学上具有显著差异(p＜0.05)。超高压压力、保压时间、植物抑菌组合液的处理均能有效的杀灭发酵后臭鳜鱼体内的微生物，且随着超高压压力的增大、保压时间的延长、植物抑菌组合液浓度的增高，杀菌效果逐渐增强。

(5)响应面结果。以超高压压力、保压时间、植物抑菌组合液浓度为试验因子，臭鳜鱼的杀菌率为响应值，设计三因素三水平box-behnken试验，试验结果见图4。由图4的数据用design-expertv8.0.6分析可得回归方程为：

y＝94.01+9.54a+4.66b+3.13c-2.68ab-1.61ac+0.67bc-7.36a²-3.00b²-0.71c²。

(6)响应面试验的方差分析。图5注：*表示差异显著(p<0.05)；**表示差异极显著(p<0.01)。由图5可知，此模型的p＜0.0001，响应面回归模型十分显著，失拟项(p＝0.5288＞0.05)不显著，说明非试验因素对试验结果的影响不大。因此该模型方程在试验范围内，能够适用于预测臭鳜鱼杀菌率的分析预测。从图5还可以看出，一次项a、b、c和二次项a²、b²以及交互项ab对提取率影响极显著；交互项ac对提取率影响显著；其他因素的影响不显著。

(7)验证实验。利用design-expertv8.0.6软件对杀菌工艺参数进行优化，得到臭鳜鱼杀菌最佳条件为：超高压压力340mpa、保压时间19min、植物组合液浓度100％；在此工艺条件下，臭鳜鱼杀菌率的预测值为99.93％。采用上述条件，进行验证试验(n＝3)，得到臭鳜鱼杀菌率实测值为(98.45±0.21)％，与预测值99.93％的相对误差为1.48％，进一步说明此模型对试验的拟合度较好，得到的回归方程在本试验中有实际意义。

植物抑菌组合液协同超高压处理对臭鳜鱼品质的影响。

(1)实验分组：设置超高压300mpa处理组、植物抑菌组合液协同超高压处理组(为响应面优化后的最优杀菌参数)，另外选用发酵后臭鳜鱼作为对照组(即未经杀菌处理)。

(2)硬度的测定：采用gy-4型数显式硬度计测定，探头直径为7.9mm，分别在处理前后臭鳜鱼表面随机选取10个点测量，并记录数据，计算其平均值，单位为kg/cm²。

(3)皱缩比的测定：取相同质量的各因素处理的臭鳜鱼样品各3g，投入量筒中测量体积，每种样品重复3次，再取平均值，计算其皱缩比。计算公式：t＝v/c(t表示体积皱缩比；v表示处理组臭鳜鱼的体积；c表示对照组臭鳜鱼的体积)

(4)持水性的测定：将处理前后臭鳜鱼切成5mm厚的片状，称量并保证质量相同，置于双层滤纸之间，向其施加5kg重的砝码，并保持2min，再次称量样品重量，持水性以压出的水分进行计算。每组参数重复测量3次。

(5)色泽的测定：利用cr-10plus型色差仪，在处理前后臭鳜鱼表面随机选取10个点测量，并记录l*值，计算其平均值。

(6)微观组织结构观察：利用s3400n型扫描电镜，将处理前后臭鳜鱼鱼肉冻干后，固定在样品托上，采用离子溅射仪在样品的横断面上喷金，扫描电子显微镜(500倍)观察并拍照。

(7)硫代巴比妥酸值的测定：取10g处理前后臭鳜鱼鱼肉，捣碎，加5ml7.5％三氯乙酸(含0.1％edta)搅拌均匀，研磨均匀后在4℃条件下在离心沉淀器中3000r/min离心10min。取5ml上清液于试管中，加入5ml0.02mol/l2-硫代巴比妥酸(tba)溶液，在100℃条件下油浴1h后放在流动水冷却40min，加入5ml氯仿震荡，静置分层。最后取上清液分别在532和600nm处比色，记下吸光值。

(8)不同杀菌方式对臭鳜鱼硬度和皱缩比的影响。由图6可知，超高压300mpa处理和植物组合液协同超高压处理对臭鳜鱼硬度和皱缩比均有显著影响(p<0.05)。相比于对照组，超高压处理后臭鳜鱼的硬度和皱缩比显著性增加(p<0.05)，说明在高压的作用下，鱼肉的质构变得紧实，鱼肉组织产生脱水皱缩，影响了臭鳜鱼的质构特性。而植物组合液协同超高压处理在一定程度上能改善臭鳜鱼的硬度和皱缩比，提高了臭鳜鱼经超高压处理后的品质。

(9)不同杀菌方式对臭鳜鱼色泽和持水性的影响。由图7可知，相比于超高压300mpa处理组，植物组合液协同超高压处理后的臭鳜鱼颜色更为鲜亮白皙，给人以更好的视觉感受。相比于对照组，超高压处理后臭鳜鱼的持水性显著性降低(p<0.05)，而植物组合液协同超高压处理改善了超高压处理后的臭鳜鱼持水性降低弊端，使处理后的臭鳜鱼较好的保留自身水分，提高了臭鳜鱼经超高压处理后的品质。

(10)不同杀菌方式对臭鳜鱼微观组织结构的影响。如图8所示，相比于对照组，超高压处理后的臭鳜鱼组织结构发生了显著改变，外表面干燥，脱水严重，组织结构出现严重皱缩，卷曲现象更明显，而植物组合液协同超高压处理在一定程度上能改善臭鳜鱼的质构特性。

(11)不同杀菌方式对臭鳜鱼保藏性能的影响。如图9所示，在30℃保藏条件下，相比于超高压300mpa，植物组合液协同超高压处理具有更为显著的杀菌持久效果，较好解决了发酵后臭鳜鱼保藏时间短的难题。由图10可知，植物抑菌组合液协同超高压技术不仅能显著增强杀菌效果，避免了对臭鳜鱼色泽、感官品质、风味物质等产生不良影响，还可以有效降低臭鳜鱼保藏过程中硫代巴比妥酸反应物的生成，具有抑菌防腐和抗氧化双重作用，提高了臭鳜鱼保藏过程中的安全质量。

实施例2：一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法

一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法，包括下列步骤：

步骤1：将5重量份的香薷、10重量份的松针和3重量份的马齿苋放入不锈钢球磨机中，在氮气保护下研磨至细度60目，得到第一混合细粉，备用；

步骤2：将第一混合细粉与质量浓度为30％的乙醇按照体积比例1:15，然后在负压为-0.02mpampa的密闭环境中，超声功率为100w、温度为30℃条件下，提取0.5h；提取完成后，采用0.22μm孔径滤纸过滤得到提取液，然后用非极性或弱极性的大孔树脂进行富集纯化，采用质量浓度为30％乙醇溶液作为洗脱溶剂、洗脱速度1.2bv/h进行动态洗脱，得到洗脱液；

步骤3：将洗脱液浓缩至原体积的1/5；然后喷雾干燥得到粉状物料，即得混合提取物；

步骤4：将0.5重量份的茶树花、0.5重量份的柳叶蜡梅叶、0.3重量份的迷迭香、0.5重量份的橘子皮混合，放入不锈钢球磨机中，在氮气保护下研磨至细度40目，得到第二混合细粉，备用；

步骤5：将第二混合细粉与蒸馏水按质量比1:15混合，然后放入提取罐中，在罐内环境压力100mpa、温度45℃条件下，蒸馏提取15min，将蒸馏产生的气体进行冷凝处理，得到馏出液；将馏出液采用转速2000rpm的离心处理5min，收集离心管的上层物质，即为混合精油；

步骤6：将1.8重量份的混合提取物、0.18重量份的混合精油、0.5重量份的碳酸钠、0.1重量份的羧甲基壳聚糖、0.5重量份的无水乙醇、0.02重量份的tween80溶液，余量为去离子水，共计100重量份，混合后以25mpa的压力均质，循环处理2次后得到植物抑菌组合液；

步骤7：将发酵后的臭鳜鱼沥去表面液体，然后浸没在植物抑菌组合液中，然后超声处理5min；

步骤8：将植物抑菌组合液浸泡处理后的臭鳜鱼取出，沥去表面液体，逐条装入食品级塑料袋中，抽真空并封口；

步骤9：将包装后的臭鳜鱼放入超高压舱中，设定加压压力数值为100mpa，保压时间为5min，升压速率为8mpa/s，超高压设备所采用的温度为室温，传压介质为水；达到设定的保压时间后，在0.5s内，以卸压速率为100mpa/s掉压力。

优选的实施方式为：所述香薷、松针和马齿苋均为含水量5％的干制品；所述松针为黄山地区树龄25年以上的，2-10月份收集的松针。

优选的实施方式为：喷雾干燥的进风温度为160℃、入料流量为50ml/min、喷头转速为20000r/min。

优选的实施方式为：所述茶树花、柳叶蜡梅叶、迷迭香、橘子皮均为含水量5％的干制品。

优选的实施方式为：所述tween80溶液的质量浓度为0.5％。

优选的实施方式为：步骤7中，超声处理时的超声波频率为25khz、功率密度为0.3w/cm²。

优选的实施方式为：所述食品级塑料袋为食品级高阻隔复合塑料袋或铝箔复合塑料袋。

优选的实施方式为：所述非极性大孔树脂为pipo-00大孔树脂。

实施例3：一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法

一种植物抑菌组合液协同超高压处理的臭鳜鱼杀菌方法，包括下列步骤：

步骤1：将30重量份的香薷、50重量份的松针和20重量份的马齿苋放入不锈钢球磨机中，在氮气保护下研磨至细度200目，得到第一混合细粉，备用；

步骤2：将第一混合细粉与质量浓度为85％的乙醇按照体积比例1:45，然后在负压为-0.08mpa的密闭环境中，超声功率为350w、温度为55℃条件下，提取1.0h；提取完成后，采用0.22μm孔径滤纸过滤得到提取液，然后用非极性或弱极性的大孔树脂进行富集纯化，采用质量浓度为85％乙醇溶液作为洗脱溶剂、洗脱速度3.5bv/h进行动态洗脱，得到洗脱液；

步骤3：将洗脱液浓缩至原体积的1/4；然后喷雾干燥得到粉状物料，即得混合提取物；

步骤4：将15重量份的茶树花、20重量份的柳叶蜡梅叶、10重量份的迷迭香、20重量份的橘子皮混合，放入不锈钢球磨机中，在氮气保护下研磨至细度120目，得到第二混合细粉，备用；

步骤5：将第二混合细粉与蒸馏水按质量比1:50混合，然后放入提取罐中，在罐内环境压力400mpa、温度65℃条件下，蒸馏提取40min，将蒸馏产生的气体进行冷凝处理，得到馏出液；将馏出液采用转速3000rpm的离心处理8min，收集离心管的上层物质，即为混合精油；

步骤6：将10重量份的混合提取物、6.5重量份的混合精油、2.5重量份的碳酸钠、1.0重量份的羧甲基壳聚糖、15重量份的无水乙醇、26重量份的tween80溶液，余量为去离子水，共计100重量份，混合后以35mpa的压力均质，循环处理2-4次后得到植物抑菌组合液；

步骤7：将发酵后的臭鳜鱼沥去表面液体，然后浸没在植物抑菌组合液中，然后超声处理30min；

步骤8：将植物抑菌组合液浸泡处理后的臭鳜鱼取出，沥去表面液体，逐条装入食品级塑料袋中，抽真空并封口；

步骤9：将包装后的臭鳜鱼放入超高压舱中，设定加压压力数值为500mpa，保压时间为25min，升压速率为35mpa/s，超高压设备所采用的温度为室温，传压介质为水；达到设定的保压时间后，在3s内，以卸压速率为250mpa/s掉压力。

优选的实施方式为：所述香薷、松针和马齿苋均为含水量10％的干制品；所述松针为黄山地区树龄25年以上的，2-10月份收集的松针。

优选的实施方式为：喷雾干燥的进风温度为180℃、入料流量为80ml/min、喷头转速为25000r/min。

优选的实施方式为：所述茶树花、柳叶蜡梅叶、迷迭香、橘子皮均为含水量10％的干制品。

优选的实施方式为：所述tween80溶液的质量浓度为2％。

优选的实施方式为：步骤7中，超声处理时的超声波频率为35khz、功率密度为0.5w/cm²。

优选的实施方式为：所述食品级塑料袋为食品级高阻隔复合塑料袋或铝箔复合塑料袋。

优选的实施方式为：所述非极性大孔树脂为ab-8(ds-401)大孔树脂。

以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例，并非企图具以对本发明做任何形式上之限制，是以，凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更，皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。