一种热稳定性好的复合酶制剂及其制备方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于酶制剂技术领域，具体涉及一种热稳定性好的复合酶及其制备方法。
【背景技术】：
[0002] 在畜牧业中，乳猪饲养是所有阶段猪中最复杂的。营养供给不合理的后果是猪生 长缓慢，腹泻率高，死亡率高，进而使中大猪阶段生长缓慢，延长出栏时间。
[0003] 但是，为了切断母源疾病的垂直传播途径，同时缩短母猪繁殖周期，延长种用年 限，人们将早期断奶技术广泛的应用于猪的大规模养殖工业中。然而由于新生仔猪缺乏先 天免疫、消化系统发育尚不完善，消化酶分泌能力弱，直接供给以玉米等为主的饲料很容易 引起猪仔对饲料的消化率低、采食量低、生长速度缓慢、腹泻率高等问题。
[0004] 为了克服乳猪在断奶后所出现的种种问题，多数企业从断奶前补饲、诱食、日粮酸 化、使用适口性好且易消化吸收的饲料原料、添加外源酶、降低日粮的抗原性、降低日粮的 粗蛋白含量以及使用促进剂等多个方面进行了改善和优化，但实际效果参差不齐。
[0005] 考虑到仔猪在断奶时，其自身的蛋白酶、淀粉酶等酶活应激而大幅下降到断奶时 的三分之一，而这些酶类对于仔猪获取营养和能量起着至关重要的作用。同时，饲料用酶在 畜禽生产中具有不俗的效果，比如前苏联科学家在早期断奶仔猪日粮中添加淀粉糊精酶， 使得日增重提高14. 6%，碳水化合物消化率提高77. 2%。据美国有关资料报道，Collier在 早期断奶仔猪日粮中补充酶制剂（含蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶），结果实验组比对照组日 增重提高了 25%，饲料转化率提高了 15. 5%。
[0006] 添加酶制剂能补充蛋白酶和淀粉酶，是辅助分解日粮中的蛋白和淀粉，降解日粮 中的抗营养因子，并能有效分解玉米/豆柏型日粮中的植物细胞壁，使细胞内的营养物质 如淀粉、蛋白质等释放出来。同时分解可溶性纤维，降低植物纤维物质的吸水能力和肠道内 容物的粘度。
[0007] 此外，在动物饲料领域中，多以硫酸铜等无机铜作为铜元素的来源，但是无机铜存 在吸收率低，与其他营养物质存在拮抗作用等问题，而螯合铜则可以很好的解决上述问题， 它能够减轻与其他营养物质的拮抗，促进铜和其他矿物质元素的利用，促进动物的生长发 育，提尚伺料利用率，改善脳体品质，提尚繁殖性能，同时还具有抗生物氧化和免疫以及良 好的稳定性等一系列功能，能够带来较佳的经济效益。
[0008] 类胡萝卜素是一类呈黄色、橙色或红色的多烯类化合物，它是自然界中最普遍存 在也是最稳定的天然色素，广泛存在于许多动植物中。类胡萝卜素作为一种优良的添加剂 和改善营养的营养增补剂，它的优良品质和效果，很久以来就被世界各国所公认，被誉为最 有希望的抗氧化剂。目前，类胡萝卜素被广泛应用于饲料添加剂行业中，由于其良好的应用 前景及卓越的功能，长久以来倍受人们青睐。如何有效开发以天然植物以及真菌获得绿色 饲料添加剂产品对饲料添加剂行业发展具有重要意义。
[0009] 因此，我们经过多次饲喂实验，研制出了 一种复合酶，其能有效地提高饲料的稳定 性、利用率、降低腹泻率、促进动物生长，针对性强，效果好，经济效益显著。
【发明内容】
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[0010] 本发明的目的在于提供一种稳定性好、利用率高的复合酶及其制备方法。
[0011] 本发明的目的通过以下技术方案来实现：
[0012] -种复合酶制剂，由以下重量份数的组分组成：木聚糖酶80-120份，纤维素酶 30-40份，β -葡聚糖酶40-100份，蛋白酶100-150份，中温α -淀粉酶20-30份，复合维生 素3-8份，复合微量元素10-20份，抗菌肽10-20份，红酵母培养物20-30份；
[0013] 本发明所使用的红酵母，为一株高产类胡萝卜素的富铜海洋红酵母WYN1， 所述菌株已于2014年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心（地址：中国.武 汉.武汉大学，邮编430072)，保藏编号为：CCTCC No :Μ 2014592,分类命名：海洋红酵母 WYNl(Rhodotorula sp. WYNl)。
[0014] 所述木聚糖酶、纤维素酶、β -葡聚糖酶、蛋白酶、中温α -淀粉酶和抗菌肽均为市 售广品；
[0015] 所述复合微量元素每公斤包含碘lOOOmg，钾180mg，铁1800mg，硒80mg,钴200mg， 镁145mg，猛1400mg，络20mg,锌llOOmg，铜800mg ;其余量为载体，所述载体为木肩；
[0016] 所述木肩的制备方法包括如下步骤：将无发霉、无病虫锯木末或废木肩除去杂物， 置于超声波清洗机中于200W、30KHz清洗10min，冲洗、沥干，放入蒸汽釜中于0. 3-0. 4MPa 蒸煮20-30min，然后置微波干燥机于2000W、120°C进行间歇式干燥3min，使之水分达到 8-10%，最后2. 0筛片粉碎、密封包装即得木肩；
[0017] 所述超声波清洗机中清洗液为质量百分比浓度0. 5%的碳酸氢钠溶液；
[0018] 所述间歇式干燥工艺为：微波辐射10s，停留20s，如此重复，循环干燥。
[0019] 所述复合维生素每公斤包含维生素 A 2800mg，维生素 BI 3000mg，维生素 C2000mg，核黄素 1600mg，泛酸 1900mg，维生素 B6 1800mg，维生素 B12 1200mg，肌醇 5000mg， 维生素 E 600mg，维生素 D3 5500mg，维生素 K3 4000mg;其余量为载体，所述载体为上述制 备的木肩。
[0020] 所述红酵母培养物制备方法如下：
[0021 ] 种子培养按酵母常规培养方法进行培养；
[0022] 发酵培养：初始pH为8,将种子培养液按接种量3-8%接种于发酵培养基，摇床转 速为50-80r/min，24-28°C培养10-15小时后调整温度为16-20°C进行低温静止培养，停止 搅拌，pH调整为3-5,保持2-4小时；之后阶梯形升温到24-30°C，pH调整为4. 6-5. 5,按照 2. 5%的添加量添加蛋白胨，按照2%的量添加酵母粉；摇床转速为50-100r/min，继续发酵 10-15h〇
[0023] 发酵结束后，发酵液经孔径10-1000 μ m粗滤，然后与10-20°C循环超滤浓缩去除 水分得固形物含量20-40 %浓缩液，浓缩液经真空冷冻干燥、超微粉碎得红酵母培养物。
[0024] 发酵培养基质量体积比组成为：葡萄糖1 %，酶解玉米粉1-3%，蛋白胨2. 5%，硫 酸镁0. 02 %，磷酸二氢钾0. 15 %，铜含量150-200mg/L，氯化钠20 %，其余为水；
[0025] 所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉置于配料罐中，以V:m为2:1加入纯净 水，调节pH值3-7,加入中温淀粉酶，酶活为30u/g玉米粉，与酶活为30u/g玉米粉的蛋白 酶，边搅拌边升温至45-55°C保温15-30min，然后缓慢升温至60-65°C保温15-30min，冷冻 干燥备用。
[0026] 所述复合酶适用于饲料加工厂和养殖场自配饲料，使用时应与饲料中的其它原料 混合均匀，可事先将本发明与少量饲料混合均匀，再混合到大批饲料中，直接饲喂。建议每 吨全价料添加量为80_120g。
[0027] 有益效果：
[0028] 1、本发明利用从海洋环境中分离获得一株高产胡萝卜素的富铜海洋红酵母WYN1， 通过静止培养方法有效的提高了酵母中胡萝卜素和铜产量。采用上述方法发酵培养海洋 红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别为27g/L以上、35-40mg/L和 7240-8000 yg/g干菌。研发中，发明人意外发现低温静止培养可以有效提高胡萝卜和铜含 量，是本发明的重要成果。
[0029] 2、由于本发明所使用的红酵母能够高产胡萝卜素，并且将培养基中的无机铜转化 为螯合铜进行富集，更好的促进了动物的生长发育，提高饲料利用率，断奶仔猪日增重提高 48. 91%，料肉比提高14. 1%，腹泻率减少10%，死淘率降低3. 7%。
[0030] 3、由于螯合铜具有良好的热稳定性，红酵母的添加使得本发明所提供的复合酶具 有较好的保存活性和热稳定性，保存活性提高25-30%，热稳定性提高35%以上。
[0031] 4、本发明根据猪消化生理特点，并经过动物实验筛选复合配方，设置复合酶酶谱， 有效补充消化道蛋白酶、淀粉酶等内源酶的不足，有效提高对饲料的消化利用率，防止营养 性腹泻的产生。
【具体实施方式】：
[0032] 实施例1 :海洋红酵母菌WYNl的获得及耐铜能力驯化
[0033] (1)将从黄海海边采集新鲜的海虾、海星、海藻等生物样本，置于无菌的YEro培养 基中，挑取红