-二甲氨基吡啶溶解于二甲基亚砜中，反应活化60min，得反应液；将反应液 加入普鲁兰多糖溶液中进行反应后，滴入无水乙醇中，析出白色沉淀状的改性隔水普鲁兰 多糖，经冲洗干燥后备用。
[0029]B、制备胶囊芯材：将健康动物肠道中分离的乳酸菌接入MRS液体培养基，在恒温 生化培养箱中37°C厌氧培养至液体变混浊，活菌数达到约为109cfu/ml以上，将培养所得 的处于稳定期前期的乳酸菌经离心分离后，弃上清，将收集到的菌体制成菌悬液，加入菌悬 液总重3. 5~9%的低聚糖，静置一段时间，并在5份乳酸菌浓液中加入2份蜡样芽孢杆菌， 1份朽1檬酸制得胶囊芯材。
[0030] C、制备壁材：取结冷胶500g溶解于25L纯化水中，搅拌至完全溶解后依次加入 l〇〇g海藻酸钠和500g改性淀粉，继续搅拌2-3min，混合均匀，得到壁材溶液。
[0031] D、制备胶囊：将壁材溶液和胶囊芯材按4 :1的质量比同时栗送通过同心多元喷 嘴，将其滴入15°C的石蜡油中，通过结冷胶的低温凝胶特性，形成乳酸菌微胶囊半成品；胶 囊滴制后收集，用石油醚清洗石蜡油，将胶囊半成品浸入l〇g/l的氯化钙溶液中，海藻酸钠 与钙离子结合形成海藻酸钙，完成胶囊的二次凝胶，与结冷胶共同构成胶囊壁壳，保证胶囊 成品的弹性和韧性。
[0032]E、包衣：将上述制好备用的改性隔水普鲁兰多糖与改性淀粉混合研磨后加水制成 包衣液，按照常规工艺对乳酸菌微胶囊半成品进行包衣，改性隔水普鲁兰多糖与改性淀粉 的用量为乳酸菌微胶囊重量的2-4%。
[0033]F、将上述完成包衣的乳酸菌微胶囊放入转笼中进行定型和预干燥。
[0034]G、通过定型的乳酸菌微胶囊放入湿度为20_40%RH的干燥间，静置干燥24小时，收 集后选除次品，得到乳酸菌微胶囊成品。
[0035]对上述方法制备的微胶囊进行特性分析，结果如下： 1、微胶囊在人工胃液和人工肠液中溶出结果 称取1g微胶囊2份，分别置于100ml人工胃液和100ml人工肠液中，于摇床中37°C、175r/min处理。分别于0,15, 30,45,60, 75,90,105和120min时取样，以人工胃液和人 工肠液为空白对照组，测其〇D6。。值，根据0D_值变化情况来分析人工胃液和人工肠液中微 胶囊的溶出情况。溶出情况见图1，由图1可知，微胶囊在人工胃液处理的前45min，0D_值 有上升现象，处理45min后基本稳定。在人工肠液中，处理75min后，其0D6。。值基本稳定。
[0036] 2、微胶囊对人工胃液、人工胆汁耐受性和人工肠液的崩解性实验结果 称取18微胶囊，溶解于9 1111的人工胃液中，于摇床中37°(：、175以1^11处理。211后取 样，将微胶囊过滤，用生理盐水洗涤至中性，干燥。将干燥好的微胶囊用解囊液处理后，采用 梯度稀释法进行活菌计数。由表2可知，乳酸菌微胶囊在人工胃液2h后，活菌数达10scfu/ g，菌体存活率达45 %，而未包埋的菌液组活菌数下降两个数量级，菌体存活率为1. 95 %， 说明该乳酸菌微胶囊具有良好的耐酸性。
[0037] 表2微胶囊在人工胃液中的活菌数变化。
[0038] 称取1g微胶囊，溶解于9ml的人工胆汁中，于摇床中37°C、175r/min处理。 2h后取样，将微胶囊过滤，用生理盐水洗涤至中性，干燥。将干燥好的微胶囊用解囊液处理 后，采用梯度稀释法进行活菌计数。由表3可知，乳酸菌微胶囊在人工胆汁2h后，活菌数达 10scfu/g，菌体存活率达42. 27%，而未包埋的菌液组活菌数下降两个数量级，菌体存活率 为1. 94%，说明该乳酸菌微胶囊具有良好的耐胆盐性。
[0039] 表3微胶囊在人工胆汁中的活菌数变化。
[0040] 称取1g微胶囊，溶解于9ml的人工肠液中，于摇床中37°C、175r/min处理。 75min后取样，采用梯度稀释法进行活菌计数。由表4可知，该乳酸菌微胶囊在人工肠液 75min后基本溶解，活菌数达109cfu/g，菌体存活率达86. 36%，说明该乳酸菌微胶囊具有 肠溶性。
[0041] 表4微胶囊在人工肠液中的活菌数变化。
[0042] 3、微胶囊的高温耐受性实验结果 分别称取1g微胶囊加入到9ml解囊液和9mlMRS液体培养基中，待解囊液组完全 溶解，MRS液体培养基组不做处理。两组试管同时放入80°C(-般的制粒温度）水浴锅中， 分别在0、1、2、3、4、5、6、7!1^11取样。采用梯度稀释法进行活菌计数。由图2可知，乳酸菌 微胶囊组比未包埋的菌液组耐受高温的时间长，说明该乳酸菌微胶囊具有耐80°C高温性。
[0043] 4、微胶囊的稳定性实验结果 称取10g微胶囊，于37°C恒温培养箱条件下中放置3个月（相当于常温下一年)，每个 月取出1份（1g)微胶囊，采用梯度稀释法进行活菌计数。由表5可知，在37°C恒温培养 条件下放置3个月后，敏捷乳酸菌微胶囊组菌体存活率达10. 9%，而未包埋的菌液组基本死 亡，说明该乳酸菌微胶囊具有储存稳定性。
[0044] 上述试验重复3次，取平均值。
[0045] 表5微胶囊的稳定性检测结果。
[0046] 以上可以看出：微胶囊包埋的乳酸菌与未包埋的乳酸菌相比，其耐酸性、耐胆盐 性、耐高温性和储存性都有较好提高。乳酸菌微胶囊在人工胃液条件下处理2h后，活菌数 仅下降一个数量级，活菌数达l〇scfu/g，而未包埋的乳酸菌在pHl. 5的条件下处理2h后， 活菌数下降两个数量级，活菌数达l〇7cfu/g。乳酸菌微胶囊在1%胆盐条件下，活菌数下 降一个数量级，活菌数达l〇scfu/g，而未包埋的乳酸菌在〇. 3%胆盐条件下处理2h后，活菌 数下降两个数量级，活菌数达107cfu/g。微胶囊在人工肠液中处理75min后，几乎全部崩 解，活菌数达109cfu/g。
[0047] 微胶囊包埋乳酸菌在恒温37°C条件下保存3个月活菌数降1个数量级，活菌数达 10scfu/g，未包埋的乳酸菌活菌数下降4个数量级，活菌数达104cfu/g。微胶囊包埋乳 酸菌在80°C高温下处理6min后，活菌数达107cfu/g;而未包埋乳酸菌耐全部死亡。
【主权项】
1. 一种饲用乳酸菌微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： A、 普鲁兰多糖改性：首先取普鲁兰多糖按照1:20-40的比例溶解于二甲基亚砜中，得 普鲁兰多糖溶液，备用；然后将重量份4~5份的胆固醇和4~5份的琥珀酸酐溶解于3~4 份的吡啶中，并加入冰盐酸，得到白色絮状沉淀，冷藏过滤后收集；将该白色絮状沉淀用蒸 馏水洗至pH>5,并置于乙酸乙酯/乙醇中重结晶，之后75~85°C干燥，得白色针状琥珀 酰胆固醇；取琥珀酰胆固醇、4-二甲氨基吡啶溶解于二甲基亚砜中，反应活化50~60min， 得反应液；将反应液加入普鲁兰多糖溶液中进行反应后，滴入无水乙醇中，析出白色沉淀 状的改性隔水普鲁兰多糖，经冲洗干燥后备用； B、 制备胶囊芯材：将健康动物肠道中分离的乳酸菌接入MRS液体培养基，在恒温生化 培养箱中37°C厌氧培养至液体变混浊，活菌数达到约为109cfu/ml以上，将培养所得的 处于稳定期前期的乳酸菌经离心分离后，弃上清，将收集到的菌体制成菌悬液，加入菌悬液 总重3. 5~9%的菌种保护剂，静置一段时间，即为乳酸菌浓液胶囊芯材； C、 制备壁材：按比例分别称取壁材原料，包括结冷胶、20g/l海藻酸钠、改性淀粉，按重 量份数计算，结冷胶、海藻酸钠、改性淀粉三者占壁材总干重的3%-30%，且结冷胶：海藻酸 钠：改性淀粉=(1%_1〇%): (1%_1〇%): (1%_1〇%)，取结冷胶溶解于相应比例的纯化水中， 搅拌至完全溶解后依次加入相应比例的海藻酸钠和改性淀粉，继续搅拌混合均匀，得到壁 材溶液； D、 制备胶囊：将壁材溶液和胶囊芯材按4 :1~3的质量比同时栗送通过同心多元喷 嘴，将其滴入0-15Γ的石蜡油中，通过结冷胶的低温凝胶特性，形成乳酸菌微胶囊半成品； 胶囊滴制后收集，用石油醚清洗石蜡油，将胶囊半成品浸入l〇g/l的氯化钙溶液中，海藻酸 钠与钙离子结合形成海藻酸钙，完成胶囊的二次凝胶，与结冷胶共同构成胶囊壁壳，保证胶 囊成品的弹性和韧性； E、 包衣：将上述制好备用的改性隔水普鲁兰多糖与改性淀粉混合研磨后加水制成包衣 液，按照常规工艺对乳酸菌微胶囊半成品进行包衣，改性隔水普鲁兰多糖与改性淀粉的用 量为乳酸菌微胶囊重量的2-4% ; F、 将上述完成包衣的乳酸菌微胶囊放入转笼中进行定型和预干燥； G、 通过定型的乳酸菌微胶囊放入湿度为20-40%RH的干燥间，静置干燥24小时，收集后 选除次品，得到乳酸菌微胶囊成品。2. 根据权利要求1所述的一种饲用乳酸菌微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤B中所 述的菌种保护剂是脱脂乳、海藻糖、低聚糖、抗性淀粉或麦芽糊精。3. 根据权利要求1或2所述的一种饲用乳酸菌微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤 B制得的5份乳酸菌浓液中加入1~2份蜡样芽孢杆菌，1~3份柠檬酸制得胶囊芯材。4. 根据权利要求1或2所述的一种饲用乳酸菌微胶囊的制备方法，其特征在于，步骤C 中按重量份数计算，结冷胶、海藻酸钠、改性淀粉三者占壁材总干重的1〇%_25%，且结冷胶： 海藻酸钠：改性淀粉=(4%-8%) : (4%-8%): (4%-8%)。
【专利摘要】本发明公开了一种饲用乳酸菌微胶囊的制备方法，现有技术制得的乳酸菌胶囊中乳酸菌活性低，在肠道内不能迅速释放，不能耐受饲料制粒过程中的高温，储存过程中容易吸湿变质，而且成本较高。本发明包括以下步骤：A、普鲁兰多糖改性；B、制备胶囊芯材；C、制备壁材；D、制备胶囊；E、对乳酸菌微胶囊半成品进行包衣；F、定型和预干燥；G、得到乳酸菌微胶囊成品。本发明将改性隔水普鲁兰多糖作为包衣材料的主要成分，进行包衣后在乳酸菌微胶囊表面形成隔水层，储存过程中不容易吸湿变质；本发明方法所制得的乳酸菌微胶囊与未包埋的乳酸菌相比，耐酸性、耐胆盐性、耐高温性和储存性都有了明显提高，并能在肠道中迅速崩解释放乳酸菌。
【IPC分类】A23K10/18, A23K40/30
【公开号】CN105360600
【申请号】CN201510850817
【发明人】邓绍贤, 张以芳, 周玉照, 邓绍纲, 柴俊, 郑锦玲, 张云娟, 杨洁
【申请人】曲靖市千村农牧科技有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年11月30日