本发明涉及医药技术领域，具体地说，是积雪草酸在制备防治肝炎病毒药物中的应用。
背景技术：
积雪草酸(asiatic acid，AA)是一种乌苏烷型五环三萜酸，存在于多种植物中，如伞形科植物积雪草。积雪草酸结构如下：
积雪草为《中国药典》收载的常用中药，是伞形科Umbelliferae积雪草属Centella植物积雪草的干燥全草，1977年始载入中华人民共和国药典。全世界约有积雪草属CentellaL.植物20种，主要分布在热带、亚热带地区。积雪草酸是积雪草三萜提取物的主要成分，也可以通过积雪草苷水解得到，还可以从许多其他天然产物中提取得到，因此资源十分丰富。积雪草酸具有广泛的药理作用，例如抗炎护肤、保肝护肺、抗抑郁、降血糖、降血脂、神经保护、抗肿瘤等(参见华中科技大学，博士学位论文，冷水七、中华猕猴桃根的物质基础研究，144页)作用。中国专利文献CN200610118041.6公开了积雪草酸在抗肺纤维化方面的应用。中国专利文献CN20061012256.4公开了积雪草酸在制备药物方面的新应用，特别是在制备抗肝纤维化药物方面的用途。但是关于积雪草酸抗丙型肝炎病毒的作用，目前还未见报道。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供积雪草酸在制备防治肝炎病毒药物中的应用。
本发明的再一的目的是，提供积雪草酸在制备保肝的食品和保健品中的应用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
积雪草酸在制备防治肝炎病毒药物中的应用，所述积雪草酸化学结构式如下：
所述的积雪草酸在制备抗丙型肝炎病毒药物中的应用。
所述的积雪草酸在制备抑制HCV入侵靶细胞的药物中的应用。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
积雪草酸在制备保肝的食品和保健品中的应用。
本发明优点在于：
本发明为五环三萜酸积雪草酸提供一种制备抗丙型肝炎病毒(HCV)药物的用途，通过体外建立的细胞培养来源的丙型肝炎病毒(HCVcc)，利用HCV易感染细胞人肝癌Huh7细胞系，对五环三萜酸积雪草酸的抗HCV活性进行了体外实验。结果发现，积雪草酸具有显著的抗HCV活性，尤其能抑制HCV入侵靶细胞，可用于制备抗丙型病毒的药物。本发明不仅为五环三萜酸提供了新用途，也为寻找抗丙型肝炎病毒药物提供了新的来源。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1 积雪草酸抗丙型肝病毒实验
一、实验药物、试剂及材料
1.化合物：积雪草酸。
2.细胞系Huh7，人肝癌细胞株(详见：Yimin Tong,Yongzhe Zhu,Xueshan Xia,Yuan Liu,et al.Tupaia CD81,SR-BI,Claudin-1,and Occludin Support Hepatitis C Virus Infection,JOURNAL OF VIROLOGY,2011；85(6):2793–2802；Jin Zhong,Pablo Gastaminza,Guofeng Cheng,et al.Robust hepatitis C virus infection in vitro，PNAS,2005；102(26):9294-9299)。
3.细胞系293T，人胚肾细胞系(详见：Yimin Tong,Yongzhe Zhu,Xueshan Xia,Yuan Liu,et al.Tupaia CD81,SR-BI,Claudin-1,and Occludin Support Hepatitis C Virus Infection,JOURNAL OF VIROLOGY.2011；85(6):2793–2802；Graham,F.L.,Smiley,J.,Russell,W.C.&Nairn,R.J.Gen.Virol 1977；36:59–74)。
4.细胞培养液，配制，其含10％胎牛血清、0.03％谷氨酰胺、非必需氨基酸、氨苄青霉素和链霉素100U/ml，调pH至7.4。
5.细胞消化液，配制，其含0.25％胰蛋白酶，用磷酸缓冲液配制。
6.HCVcc：细胞培养的感染性丙型肝炎病毒(详见：Yimin Tong,Yongzhe Zhu,Xueshan Xia,Yuan Liu,et al.Tupaia CD81,SR-BI,Claudin-1,and Occludin Support Hepatitis C Virus Infection,JOURNAL OF VIROLOGY,Mar.2011；85(6):2793–2802；Jin Zhong,Pablo Gastaminza,Guofeng Cheng,et al.Robust hepatitis C virus infection in vitro，PNAS,2005；102(26):9294-9299)。
二、实验方法：
(一)HCVcc的制备
1.病毒扩增
J6、JFH-1嵌合HCVcc(105ffu/ml)，取50μl感染接种于24孔板的Huh 7.5细胞，次日换液，随后根据细胞生长密度传代培养，观察细胞生长状态，待病毒快速增殖导致的细胞病变效应(CPE)出现后，收集第7～20天的培养上清，取适量用于病毒滴度测定，其余8,000rpm离心5min弃细胞碎片后分装保存于-70℃备用。
2.病毒滴定
以空白Huh 7.5(1×104cells/孔)，12h后，弃培养上清，每孔加入100μl经10倍梯度稀释的HCVcc上清液，共孵育5h，换新鲜DMEM全培养液继续培养72h，行免疫荧光法检测HCV阳性细胞，一抗用1:100稀释的HCV抗体阳性病人血清，二抗为1:100稀释的FITC标记羊抗人IgG。在荧光显微镜下观察发光细胞，并记录最后一个可观察到绿色荧光阳性细胞的孔内绿色荧光阳性细胞数及相应的稀释梯度，计算出focus forming unit/ml(ffu/ml)数值，以此代表HCVcc滴度。
(二)HCVcc感染性的检测
取处于对数生长期的Huh7细胞，调整细胞浓度为1×105个/ml，取100μl种96孔板；培养24h后加入化合物及HCVcc，积雪草酸按10μg/ml和20μg/ml浓度配制，37度培养4小时后去除化合物及HCVcc混液，换培养基继续培养；48h后进行免疫荧光检测，在荧光显微镜下读取各孔HCVcc阳性克隆数。
(三)结果(见表1)
表1积雪草酸对细胞培养丙肝病毒(HCVcc)的抑制活性(％)
上述实验结果表明，积雪草酸具有显著的抗丙型肝炎病毒活性。因此，可用于制备抗丙型肝炎病毒的药物和保肝的药物。
本发明通过体外建立的细胞培养来源的丙型肝炎病毒(HCVcc)，利用HCV易感染细胞人肝癌Huh7细胞系，对五环三萜酸化合物积雪草酸的抗HCV活性进行了体外实验。结果发现，积雪草酸具有显著的抗HCV活性，尤其能抑制HCV入侵靶细胞。因此，积雪草酸可用于制备抗丙肝病毒(HCV)的药物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。