技术领域：
：本发明涉及通过同时施用二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂来避免与施用钠葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂相关的胰高血糖素分泌增加的方法。本发明还涉及通过同时施用二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂使与施用钠葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂相关的胰高血糖素分泌正常化的方法。此外，本发明涉及治疗糖尿病，1型与2型糖尿病，尤其是2型糖尿病，以及高血糖症、高胰岛素血症、肥胖症、高三酸甘油酯血症、X综合征、糖尿病并发症、动脉粥样硬化及相关疾病的方法，其包括施用SGLT2抑制剂和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂。
背景技术：
：：SGLT2为蛋白质家族的一员，其利用电化学钠梯度（相对于细胞内的钠浓度梯度）来转运葡萄糖。不同Na+/葡萄糖转运蛋白存在于不同组织中：SGLT1主要存在于小肠的肠黏膜及肾脏肾单位近端小管的S3段中；而SGLT2主要存在于肾脏肾单位近端小管的S1段中。糖尿病的原因在于胰岛素的需求与供应之间的不匹配，从而导致葡萄糖水平增加。使用SGLT2抑制剂治疗糖尿病而降低血浆葡萄糖的原理是：抑制葡萄糖在肾脏中的再吸收来，使得尿中的葡萄糖排泄增加。DeFronzo和Ferranini的论文表明：用SGLT2抑制剂的治疗导致胰高血糖素分泌增加。目前还不清楚SGLT2抑制剂刺激胰高血糖素分泌的机制。胰高血糖素刺激肝脏葡萄糖产生，其抵消了SGLT2抑制剂降低葡萄糖的效果。本发明证实：出人意料的是，继发于给予SGLT2抑制剂的胰高血糖素分泌增加可通过使用二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂(例如沙格列汀(saxagliptin))来避免、正常化、甚至抵消，而且不影响β细胞的胰岛素分泌；另外，出人意料的是，所述胰高血糖素分泌增加的避免、正常化和抵消不会增加低血糖的风险、响应于低血糖的损害及体重降低。因此，相信施用SGLT2抑制剂与二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂(例如沙格列汀)将提供增强的血糖控制。发明概述一方面，本发明提供通过同时施用二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂避免与施用SGLT2抑制剂相关的胰高血糖素分泌增加的方法。在另一方面，本发明提供通过同时施用二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂使与施用SGLT2抑制剂相关的胰高血糖素分泌正常化的方法。在另一方面，本发明提供通过同时施用SGLT2抑制剂和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂来减少肝脏葡萄糖产生的方法。在又一方面，本发明提供改善哺乳动物中的血糖控制的方法，其包括向需要此控制的哺乳动物同时施用治疗有效量的SGLT2抑制剂和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂。在另一方面，本发明提供治疗哺乳动物的糖尿病，尤其是2型糖尿病的方法，其包括向需要这类治疗的哺乳动物同时施用治疗有效量的SGLT2抑制剂和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂。本发明的具体优选实施方案将从以下某些优选实施方案及权利要求的更详细描述变得显而易见。发明详述本发明提供避免与施用钠葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂或其药学上可接受的盐、其立体异构体或其前药酯相关的胰高血糖素分泌增加的方法，其包括施用SGLT2抑制剂和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂。在另一个实施方案中，本发明提供使与施用钠葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂或其药学上可接受的盐、其立体异构体或其前药酯相关的胰高血糖素分泌正常化的方法，其包括施用SGLT2抑制剂和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂。在另一个实施方案中，本发明提供减少肝脏葡萄糖产生的方法，其包括施用钠葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂或其药学上可接受的盐、其立体异构体或其前药酯和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂。在又一个实施方案中，本发明提供通过避免胰高血糖素分泌增加来改善哺乳动物的血糖控制的方法，其包括向需要此控制的哺乳动物同时施用治疗有效量的钠葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂或其药学上可接受的盐、其立体异构体或其前药酯和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂。在再一个实施方案中，本发明提供通过避免胰高血糖素分泌增加来治疗哺乳动物的糖尿病、优选1型及2型糖尿病、更优选2型糖尿病的方法，其包括向需要这类治疗的哺乳动物同时施用治疗有效量的钠葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂或其药学上可接受的盐、其立体异构体或其前药酯和二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂。在一个实施方案中，本发明提供其中哺乳动物为人的方法。本发明中使用的SGLT2抑制剂最优选对SGLT2是选择性的（相对于SGLT1）。对SGLT2的高选择性，正如同达格列净(dapagliflozin)的情况，有利于用于本发明中，因为其避免了不可预期的对肠道SGLT1抑制的影响。某种给定抑制剂对于SGLT2的选择性可通过比较SGLT1和SGLT2分析测得的EC50值确定。简言之，使用MARATHONREADYTM人肾脏cDNA(Clontech,MountainView,CA)和根据公开的序列(基因库(Genbank)登录号：NM_003041和NM_000343)设计的引物，通过PCR克隆人SGLT1(hSGLT1)及人SGLT2(hSGLT2)全长cDNA序列。将hSGLT1及hSGLT2序列克隆入用于哺乳动物表达的pIRESneo载体(Clontech,MountainView,CA)中，并将其稳定转染入中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中。基于对G418抗生素(GENETICIN®，Invitrogen,Carlsbad,CA)的抗性及14C-α-甲基-D-吡喃葡萄糖苷(14C-AMG)摄取分析中的活性选择SGLT表达克隆。使用标准细胞培养技术维持表达hSGLT1或hSGLT2的细胞。通过添加100μl/孔含有钠的无蛋白分析缓冲液(Hepes/TrispH7.4、137mMNaCl、5.4mMKCl、2.8mMCaCl2、1.2mMMgSO4)、10μM14C-AMG和抑制剂或二甲亚砜(DMSO)介质来启动在96孔培养盘中的钠依赖性葡萄糖转运分析，且在37℃下培养盘中培育2h。通过在含钠条件下观测到的计数减去在不含钠摄取条件下观测到的每分钟计数(CPM)来计算钠依赖性14C-AMG摄取。在钠存在下一式三份地分析在不同浓度下的抑制剂，且通过比较含抑制剂孔中的CPM与仅含DMSO介质的孔中的CPM来计算抑制百分比。已知的SGLT抑制剂根皮苷(Phlorizin)在每一分析中平行地进行评估。使用XLFit(IDBS,Guilford,UK)将剂量-反应曲线拟合为经验四参数模型以确定半最大反应下的抑制剂浓度(EC50)。SGLT2选择性表示为有利于SGLT2的EC50比率。有利于SGLT2的EC50选择性比率为至少10且更优选至少100的SGLT2抑制剂适合用于本发明。适合根据本发明使用的SGLT2抑制剂包含C-芳基葡糖苷或O-芳基葡糖苷。C-芳基葡糖苷及O-芳基葡糖苷在治疗糖尿病中为有效的。参见美国专利第6,774,112号，其以全文引用的方式并入本文中。可用于本发明方法中的C-芳基葡糖苷(也称为C-葡糖苷)SGLT2抑制剂的实例包括但不限于以下：1)如美国专利第6,515,117号及第6,414,126号中所公开的C-芳基葡糖苷，所述专利的公开内容以全文引用的方式并入本文中用于任何目的；2)如美国专利申请案第11/233617号(美国专利申请公开案第2006/0063722A1号)中所描述的C-芳基葡糖苷，该申请案的公开内容以全文引用的方式并入本文中；3)美国专利第6,774,112号中所描述的C-芳基葡糖苷，该专利的公开内容以全文引用的方式并入本文中；4)如美国专利申请公开案第2005/0209166号中所公开的经吡喃葡萄糖基取代的苯衍生物，该公开案的公开内容以全文引用的方式并入本文中；及5)如美国专利申请公开案第S2006/0074031号中所公开的经D-吡喃糖基取代的苯基化合物，该公开案的公开内容以全文引用的方式并入本文中。可用于本发明的方法中的O-葡糖苷SGLT2抑制剂的实例包括但不限于以下：1)如美国专利申请公开案第2006/0194809号中所公开的5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖苷，该公开案的公开内容以全文引用的方式并入本文中用于任何目的；2)如WO03/01180中所公开的葡萄吡喃基氧基苯衍生物，WO03/01180的公开内容以全文引用的方式并入本文中用于任何目的；3)如美国专利第6,908,905号中所公开的吡唑衍生物，该专利的公开内容以引用的方式并入本文中用于任何目的；及4)如美国专利第6,815,428号中所公开的吡唑化合物，该专利的公开内容以引用的方式并入本文中用于任何目的。以下的其他公开内容及公开案公开了可用于本发明方法的SGLT2抑制剂：K.Tsujihara等人,Chem.Pharm.Bull.,44:1174-1180(1996)；M.Hongu等人,Chem.Pharm.Bull.,46:22-33(1998)；M.Hongu等人,Chem.Pharm.Bull.,46:1545-1555(1998)；A.Oku等人,Diabetes,48:1794-1800(1999)；及JP10245391(Dainippon)。在一个优选方面，本发明提供美国专利第6,414,126号及第6,515,117号中所公开的用于本发明方法的SGLT2抑制剂，更优选的SGLT2抑制剂为化合物I或达格列净；或其药学上可接受的盐、其所有立体异构体或其前药酯。在另一个优选方面，本发明提供结晶形式的化合物I，包括美国专利申请公开案第2008/0004336号中所公开的所述结晶形式，所述专利申请的公开内容以全文引用的方式并入本文中用于任何目的。用于本发明方法的最优选结晶形式为达格列净(S)丙二醇水合物及达格列净(R)丙二醇水合物。可用于本发明中的另外的SGLT2抑制剂包括卡格列净(canagliflozin)(Johnson&Johnson/MitsubishiTanabePharma)；依碳酸瑞格列净(remogliflozinetabonate)(GlaxoSmithklinePlc、KisseiPharmaceuticalsCo.)；伊格列净(ipragliflozin)(Astellas/Kotobuki)；依帕列净(empagliflozin)(BoehringerIngelheim)；BI-44847(BoehringerIngelheim)；TS-071(TaishoPharmaceutical)；托格列净(tofogliflozin)(Roche/ChugaiPharmaceutical)；LX-4211(LexiconPharmaceuticals)；DSP-3235(GlaxoSmithKline/DainipponSumitomo)；ISIS-SGLT2Rx(IsisPharmaceuticals)；及YM543(AstellasPharmaInc)。可用于本发明方法中的DPP-IV抑制剂的实例包括但不限于沙格列汀(saxagliptin)、西他列汀(sitagliptin)(Merck&Co.,Inc.、OnoPharmaceuticalsCo.,Ltd)；维格列汀(vildagliptin)(NovartisPharmaAG)；利拉利汀(linagliptin)(BoehringerIngelheim及EliLilly)；阿格列汀(alogliptin)(TakedaPharmaceuticalCompanyLtd.)，作用于β细胞的ATP依赖性通道的其他已知的DPP-IV抑制剂或其他抗高血糖药剂，其中沙格列汀、西他列汀、利拉利汀及维格列汀为优选，其中沙格列汀为最优选。在一个实施方案中，本发明提供其中DPP-IV抑制剂为利拉利汀且SGLT2抑制剂为依帕列净的方法。根据本发明所用的SGLT2抑制剂及DPPIV抑制剂可施用给需要治疗的各种哺乳动物种类，诸如狗、猫、牛、人等。这些药剂可全身性施用，诸如经口或胃肠外施用。在另一个实施方案中，本发明提供一种或多种另外的抗糖尿病剂的同时施用。适用于本发明同时施用的合适的另外的抗糖尿病剂的实例包括但不限于双胍(例如，二甲双胍或苯乙双胍)；葡糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖(acarbose)或米格列醇(miglitol))；胰岛素(包括胰岛素促分泌素或胰岛素增敏剂)；美格替奈(meglitinide)(例如，瑞格列奈(repaglinide))；磺酰脲(例如，格列美脲(glimepiride)、格列本脲(glyburide)、格列齐特(gliclazide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)及格列吡嗪(glipizide))；双胍/格列本脲组合(例如，Glucovance®)；噻唑烷二酮(例如，曲格列酮(troglitazone)、罗格列酮(rosiglitazone)及吡格列酮(pioglitazone))；PPAR-α激动剂；PPAR-γ激动剂；PPARα/γ双重激动剂；糖原磷酸化酶抑制剂；脂肪酸结合蛋白(aP2)的抑制剂；胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其他GLP-1受体激动剂。其他适合的噻唑烷二酮包括但不限于MCC-555(公开于美国专利第5,594,016号中，Mitsubishi)、法格列扎(faraglitazar)(GI-262570，Glaxo-Wellcome)、恩格列酮(englitazone)(CP-68722，Pfizer)、达格列酮(darglitazone)(CP-86325，Pfizer)；伊萨列酮(isaglitazone)(MIT/Johnson&Johnson)、瑞格列扎(reglitazar)(JTT-501，(JPNT/Pharmacia&Upjohn)、来格列酮(rivoglitazone)(R-119702，Sankyo/WL)、利拉鲁肽(liraglutide)(NN-2344，Dr.Reddy/NN)及(Z)-1,4-双-4-[(3,5-二氧-1,2,4-噁二唑烷-2-基-甲基)]苯氧基丁-2-烯(YM-440，Yamanouchi)。PPAR-α激动剂、PPAR-γ激动剂及PPARα/γ双重激动剂的实例包括但不限于莫格他唑(muraglitazar)、培利格列扎(peliglitazar)、替格列扎(tesaglitazar)AR-HO39242(AstraZeneca)、GW-501516(Glaxo-Wellcome)、KRP297(KyorinMerck)以及由Murakami等人“ANovelInsulinSensitizerActsAsaColigandforPeroxisomeProliferation-ActivatedReceptorAlpha(PPARalpha)andPPARgamma.EffectonPPARalphaActivationonAbnormalLipidMetabolisminLiverofZuckerFattyRats”,Diabetes47,1841-1847(1998)；WO01/21602、美国专利第6,414,002号及美国专利第6,653,314号(其公开内容以全文引用的方式并入本文中)中所公开的那些激动剂，采用其中所述的剂量。在一个实施方案中，优选用于本文中的是所引用的参考文献中指定的优选化合物。适合的aP2抑制剂包括但不限于1999年9月7日申请的美国申请案第09/391,053号及美国专利第6,548,529号(其公开内容以全文引用的方式并入本文中)中所公开的那些aP2抑制剂，采用其中所述的剂量。其他适合的美格替奈包括那格列奈(nateglinide)(Novartis)或KAD1229(PF/Kissei)。在另一个实施方案中，本发明进一步提供一种或多种另外的抗糖尿病剂的同时施用，其中所述另外的抗糖尿病剂为二甲双胍。本发明中使用的SGLT2抑制剂、DPPIV抑制剂及任何另外的抗糖尿病剂以药物组合物形式施用，所述药物组合物包含与一种或多种药学上可接受的载体一起调配的化合物。所述药物组合物可经专门调配用于以固态或液态形式口服施用、用于胃肠外注射或直肠施用。药物组合物可经口、经直肠、胃肠外、脑池内、阴道内、腹膜内、经颊或以经口或鼻的喷雾形式施用给人及其他哺乳动物。如本文所用的术语“胃肠外（的）”是指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下及关节内的注射及输注的施用模式。将SGLT2抑制剂、DPPIV抑制剂及任何另外的抗糖尿病剂掺入常规的全身剂型，诸如片剂、胶囊、酏剂或可注射制剂。以上剂型还包括必要的生理学上可接受的载体物质、赋形剂、润滑剂、缓冲剂、抗菌剂、膨化剂(诸如甘露糖醇)、抗氧化剂(抗坏血酸或亚硫酸氢钠)等。但优选口服剂型，尽管胃肠外剂型形式同样非常令人满意。用于胃肠外注射的药物组合物包含药学上可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳液以及临用前复原成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉剂。适合的水性及非水性载体、稀释剂、溶剂或介质的实例包括水；乙醇；多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)；植物油(诸如橄榄油)；可注射有机酯(诸如油酸乙酯)；及其合适的混合物。可例如通过使用包衣物质(诸如卵磷脂)，在分散液的情况下通过维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。所述组合物也可含有佐剂，诸如防腐剂、湿润剂、乳化剂及分散剂。可通过包括各种抗菌剂及抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等来确保防止微生物作用。可能还需要包括等张剂，诸如糖、氯化钠等。可通过包括诸如单硬脂酸铝及明胶的延迟吸收的试剂来实现可注射药物形式的延长吸收。在一些情况下，为延长药物作用，需要减缓自皮下或肌肉内注射的药物吸收。这可通过使用水溶性较差的结晶或非晶形物质的液体悬浮液来实现。药物的吸收速率则视其溶解速率而定，溶解速率又可视晶体大小及结晶形式而定。或者，通过在油介质中溶解或悬浮药物来实现胃肠外施用的药物形式的延迟吸收。通过在可生物降解聚合物(诸如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成药物的微胶囊基质来制得可注射积存形式（injectabledepotform）。视药物与聚合物的比率及所用具体聚合物的性质而定，可控制药物释放速率。其他可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。还可通过将药物覆埋于与身体组织兼容的脂质体或微乳液中来制备可注射积存制剂。可例如通过细菌截留过滤器过滤或通过在无菌固体组合物形式中掺入灭菌剂来将可注射制剂灭菌，所述无菌固体组合物可在临使用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中。用于口服施用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂及粒剂。在这类固体剂型中，活性化合物与以下各物混合：至少一种药学上可接受的惰性赋形剂或载体，诸如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇及硅酸；b)粘合剂，诸如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖及阿拉伯胶；c)保湿剂，诸如甘油；d)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠；e)溶液迟延剂，诸如石蜡；f)吸收促进剂，诸如季铵化合物；g)湿润剂，诸如十六醇及单硬脂酸甘油酯；h)吸附剂，诸如高岭土及膨润土及i)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂及丸剂的情况下，剂型也可包含缓冲剂。也可使用相似类型的固体组合物作为软填充及硬填充的明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，诸如乳糖(lactose/milksugar)以及高分子量聚乙二醇等。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂及粒剂的固体剂型可制备有包衣及外壳，诸如肠溶包衣及药物制剂技术中熟知的其他包衣。其任选含有乳浊剂，且也可为仅在肠道的某一部分或优选在肠道的某一部分任选以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质及蜡。SGLT2抑制剂、DPPIV抑制剂及任何另外的抗糖尿病剂也可(若适宜)与一种或多种上述赋形剂呈微囊封形式。用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆及酏剂。除活性化合物之外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，诸如水或其他溶剂、助溶剂及乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀释剂之外，口服组合物也可包括佐剂，诸如湿润剂、乳化剂及悬浮剂、甜味剂、调味剂及芳香剂。除活性化合物之外，悬浮液可含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇及脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝（aluminummetahydroxide）、膨润土、琼脂、黄芪胶及其混合物。所施用的剂量根据患者的年龄、重量及病状以及施用途径、剂型及疗法及所需结果来调整。一般而言，上述剂型可施用的SGLT2抑制剂的含量为每天约1mg至约1000mg，优选每天约2mg至约400mg，更优选每天2.5mg至约75mg，且甚至更优选每天2.5mg至约50mg。所述剂型可以每天单次剂量或以1-4次的分次剂量施用。除非另外指明，否则本文所述方法中所用的SGLT2抑制剂、DPPIV抑制剂及任何另外的抗糖尿病剂的剂量及制剂公开于本申请通篇论述的各种专利及申请中，所述文献以全文引用的方式并入本文中。本领域技术人员将认识到，药物治疗效果所需的施用量当然随所选试剂、病状的性质及严重程度及受治疗的哺乳动物而变化，且最终由医师酌情处理。此外，药物的最优选数量及个别剂量的间隔由所需治疗效果的性质及程度、施用形式、施用途径及施用部位、受治疗的特定患者来确定，且所述最优选值可通过常规技术确定。还应该认识到的是，最佳治疗过程，例如给定的剂量数量可由本领域技术人员使用常规的治疗测定测试过程来确定。适用于本发明的化合物的SGLT2抑制剂活性可通过使用如下所述的分析系统来确定。SGLT2活性分析通过使用标准分子生物学技术，从人肾mRNA反转录及扩增来克隆人SGLT2的mRNA序列。将cDNA序列稳定转染入CHO细胞中，且基本上如Ryan等人,1994,“HK-2:animmortalizedproximaltubuleepithelialcelllinefromnormaladulthumankidney,”KidneyInternational45:48-57中所述，针对SGLT2活性分析克隆。评估克隆性选定的细胞系中的SGLT2活性的抑制，评估方法基本上如Ryan等人所述进行，但是进行以下修改。在F-12营养混合物(Ham'sF-12；GIBCO,LongIsland,NY)、10%胎牛血清、300μg/ml遗传霉素及青霉素-链霉素中，使细胞在96孔培养盘中生长2-4天达到75,000细胞/孔或30,000细胞/孔。在细胞汇合时，用10mMHepes/Tris(pH7.4)、137mMN-甲基-D-葡糖胺、5.4mMKCl、2.8mMCaCl2、1.2mMMgSO4洗涤细胞两次。随后用10μM[14C]AMG及10μM抑制剂(最终DMSO=0.5%)在10mMHepes/Tris(pH7.4)、137mMNaCl、5.4mMKCl、2.8mMCaCl2、1.2mMMgSO4中在37℃下温育细胞1.5h。用含有0.5mM根皮苷的冰冷1XPBS猝灭摄取分析，且随后用0.1%NaOH溶解细胞。在添加MicroScint闪烁流体之后，使细胞振荡1小时，且随后在TopCount闪烁计数器上定量[14C]AMG。在有NaCl和无NaCl的情况下进行对照。为测定EC50值，在适当反应范围内在2个对数间隔内使用10种抑制剂浓度，且在整个培养盘上针对三个培养盘求平均值。Ryan等人，同上。实施例以下为本发明的说明。使在筛检时已进行至少8周稳定二甲双胍疗法的患有2型糖尿病(T2DM)且糖化血红蛋白(HbA1c)水平大于或等于8%且小于或等于12%的成人患者以1:1:1随机接受沙格列汀(5mg/天)及达格列净(10mg/天)加二甲双胍XR(1500-2000mg/天)剂量，沙格列汀(5mg/天)及安慰剂加二甲双胍XR(1500-2000mg/天)剂量，或达格列净(10mg/天)及安慰剂加二甲双胍XR(1500-2000mg/天)剂量持续24周。在4周引入期初期，将所有患者切换成在引入期及24周治疗期间最接近的二甲双胍XR剂量(1,500-2,000mg/天)。随后使患者随机接受沙格列汀5mg/天及达格列净10mg/天加二甲双胍(SAXA+DAPA+MET)，沙格列汀5mg/天及安慰剂加二甲双胍(SAXA+MET)，或达格列净10mg/天及安慰剂加二甲双胍(DAPA+MET)持续24周。在筛检及治疗期间禁止患者接受其他抗糖尿病药物(除了开放标记的急救药物以外)。在基线（baseline）及施以液体膳食耐受性测试(MTT，360-375kcal；蛋白质14-28.2g；脂肪10.5-14g；碳水化合物42-45g；作为碳水化合物组分的糖16.8-22g，随研究部位变化)之后第24周评估餐后葡萄糖(PPG)。在药物施用之前的基线和24周在药物施用之后1小时进行MTT。抽取血液样品以测定在0分钟、30分钟、60分钟、120分钟及180分钟时间处的胰高血糖素。计算在MTT期间获得的胰高血糖素从0分钟至180分钟的曲线下面积(AUC0-180min)相对于基线的平均变化。通过放射免疫分析(LINCOResearch,St.Charles,MO)测量血浆胰高血糖素。依据梯形规则，在每个时间点的基于模型的平均值估计值(包括营救（rescue）之前的观测结果)，计算AUC0-180min。使用纵向重复测量分析，针对基线值、治疗组、时间、治疗组与时间的相互作用、及基线值与时间的相互作用分析在MTT期间所获得的胰高血糖素的AUC0-180min在24周相对于基线的平均变化。计算各治疗组内经调整的平均变化以及治疗组之间经调整的平均变化的差异的点估计值及95%置信区间(CI，confidenceinterval)。为了评价HbA1c变化与在24周胰高血糖素的AUC0-180min变化的相关性、HbA1c变化与空腹胰高血糖素浓度变化的相关性、和基线空腹胰高血糖素浓度或胰高血糖素AUC0-180min与基线HbA1C的相关性，进行事后回归分析。回归模型包括固定的治疗效果及24周胰高血糖素的AUC0-180min变化、空腹胰高血糖素浓度、基线空腹胰高血糖素浓度或胰高血糖素AUC0-180min。未施加多重性控制（multiplicitycontrol）。数据参见下表1。表1中所列举的数据表明在添加达格列净时胰高血糖素水平与对照组相比增加，且此效果通过添加沙格列汀而抵消且出乎意料地完全消除。鉴于所述发现，申请人认为，同时施用SGLT2抑制剂及DPPIV抑制剂以及任选另外的抗糖尿病剂(如二甲双胍)将有效地控制哺乳动物的血糖水平和治疗糖尿病(尤其是2型糖尿病)以及高血糖症、高胰岛素血症、肥胖症、高三酸甘油酯血症、X综合征、糖尿病并发症、动脉粥样硬化及相关疾病。当前第1页1 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