包含α‑型干扰素的稳定的不含苄醇的水溶液制剂的制作方法

文档序号：11526346阅读：467来源：国知局

公开了稳定的、不含苄醇的水溶液制剂，其包含α-型干扰素、优选聚乙二醇化α-型干扰素；维持ph为6.0±0.5的缓冲剂；作为表面活性剂的聚山梨酯20或泊洛沙姆188；作为稳定剂的l-甲硫氨酸；和张度剂，并且该水溶液制剂将聚乙二醇化α-型干扰素的高化学和物理学稳定性维持延长的储存时间期限(至少在2-8℃的目标储存温度18个月或在25℃的升高温度6个月)。

发明背景

本发明涉及稳定的水溶液制剂，其将干扰素α、优选聚乙二醇化干扰素α的高生物学活性以及高化学和高物理学稳定性维持延长的时间期限，即在作为商品生物药物产品通常所需的预期的储存温度(2-8℃)至少18个月，优选24个月或以上。物理学稳定性通过控制可溶性(寡聚化形式和更高可溶性聚集物，如例如通过尺寸排阻色谱法显示)和不溶性(可见和/或次可见颗粒)聚集种类形成、通过控制视觉外观如浊度和脱色以及活性成分的恒定总浓度(例如通过反相hplc显示)来证实。通过控制典型地通过碎片化发生的活性成分降解(例如通过反相hplc显示)、氧化(特别是甲硫氨酸侧链)、天冬酰胺残基的脱酰胺作用、天冬氨酸残基的异构化(后面三种情形例如通过肽作图、使用受控的限制性蛋白质水解后肽的质谱分析显示)来证实化学稳定性。

干扰素溶液的制备涉及因活性成分对物理学和化学影响的敏感性导致的许多问题。如同另外的蛋白质，水溶液中的干扰素易经历化学降解机制例如蛋白质水解、氧化、二硫化物交换、寡聚化、脱酰胺作用和β-消除，以及物理机制例如聚集、沉淀和吸附。因此，干扰素溶液包含添加物，其存在是为了抵抗这些效应。

美国专利no.4,496,537公开了生物学稳定的干扰素α水溶液制剂，其包含干扰素α、人血清白蛋白和丙氨酸或甘氨酸、水和维持ph在6.5-8.0的缓冲剂系统。人血清白蛋白(“hsa”)用作干扰素α的稳定剂并且通过将干扰素α涂布和/或吸附在混合容器、加工设备和储存容器的不锈钢和玻璃表面上防止干扰素α从溶液中损失。包含干扰素α和hsa的溶液制剂在将这类溶液储存在2-8℃延长期限即2年以上时，维持干扰素α的化学和生物学稳定性。然而，鉴于潜在的病毒污染和形成共价聚集物(通过二硫化物形成/二硫化物借助于其游离硫羟基移动)，由此可能导致免疫原性，潜在地导致功效损失甚至过敏反应，所以hsa存在问题。

随后，已经提出了避免使用hsa和包含另外的助剂、特别是非离子洗涤剂的干扰素α溶液(参见，例如wo89/04177)。由于干扰素α具有高度活性并且以最低浓度存在于药物制剂中，所以干扰素制剂的稳定性和确保活性成分的恒定浓度是特别重要的。已经发现，为了确保最佳应用特性，干扰素溶液的赋形剂必须从大量潜在适合的试剂中谨慎地选择并且彼此协调。例如，玻璃表面上干扰素-α2a的吸附在ph5-6具有最大值，使得该ph在原则上似乎是不利的。另一方面，共价降解反应通过在该ph的最小值来进行。商品hsa-稳定的溶液具有ph7。干扰素溶液的应用特性以不可预测的方式受到众多不相关因素影响。

美国专利no.5,762,923公开了不含hsa的干扰素-α水溶液制剂，其包含干扰素α、非离子洗涤剂、用于调整ph4.5-6.0的缓冲剂、苄醇和任选的等渗剂，该制剂表现出最佳应用特性，即储存稳定性和声称量的活性成分的生物利用度。更具体地，美国专利no.5,762,923公开了干扰素水溶液制剂，其包含式(i)的聚乙二醇化干扰素α-2a、

10mg/ml量的苄醇、作为缓冲剂调整至最终ph6.0的乙酸钠/乙酸、作为张度剂的氯化钠和作为表面活性剂的聚山梨酯80。从美国专利no.5,762,923中所示的数据中显而易见的是实现了溶液的可接受的储存稳定性，条件是通过添加苄醇制备该溶液。

然而，在大量药物和生物技术应用中，如用于制备(聚乙二醇化)α-型干扰素的制备方法中，转移流体的过程中维持流体完整性(即定性和定量组成以及总体积)是非常重要的。流体或其组分的一种或几种例如通过迁移至管壁的损耗可以导致终产物结果中的不一致性。已知苄醇被多种管材料吸附并且特别是被硅橡胶制成的管吸附，而这些材料广泛应用于许多制药加工设施中。

因此，从制备工艺角度来看，期望避免使用苄醇。然而，不含苄醇的α-型干扰素、优选聚乙二醇化α-型干扰素制剂仍然应当提供至少相同的储存稳定性。因此，需要重新配制现存的α-型干扰素，优选聚乙二醇化α-型干扰素溶液产品，得到不含苄醇、同时将水溶液制剂中高化学、高物理学稳定性和高干扰素α、优选聚乙二醇化干扰素α活性维持延长储存期限的溶液制剂。

发明概述

本发明基于如下令人惊奇的发现：可以通过用l-甲硫氨酸取代避免预先用作α-型干扰素、优选聚乙二醇化α-型干扰素制剂中的稳定剂的苄醇，从而提供还包含聚山梨酯20或泊洛沙姆188作为表面活性剂的制剂。例如，仅用l-甲硫氨酸替换商品制剂(40kda支链聚乙二醇化干扰素α2a)中的苄醇将导致商品制剂提供的延长储存期限的水溶液制剂中化学、物理学稳定性和聚乙二醇化干扰素α活性更低。然而，l-甲硫氨酸与聚山梨酯20或泊洛沙姆188的组合将导致形成相差无几的稳定性。

不预期受到任何理论约束，本发明制剂中的表面活性剂似乎是更稳定的，因为ps20比ps80倾向于降解更少，这可能导致得到的制剂的氧化性应激减少。由于l-甲硫氨酸不会形成过氧化物(与苄醇相反)，所以本发明的制剂可以不储存在惰性气体(例如氮气)罩中，并且由此具有改善的储存稳定性。此外，药物产品的制备方法得到简化，因为l-甲硫氨酸(与苄醇相反)不易于被典型地用于制备方法中的塑料或合成橡胶(如，例如硅橡胶管道、ptfe管道、塑料接管)吸收或吸附其上，并且完全不会蒸发。因此，管线阻塞的关键性下降并且管线阻塞后应当被清除的药物产品部件的冲洗体积或数量得以减少。本发明的制剂还为药物产品组合物提供了更好的稳定性，因为l-甲硫氨酸不会蒸发或透过合成橡胶容器盖(如，例如橡胶塞)并且也不会被它们吸附或吸附其上。

本发明提供了稳定的、等渗水溶液制剂，其维持高生物学α-型干扰素活性并且不含苄醇，该制剂包含：

(i)0.1-0.5mg/ml，优选0.18、0.27或0.36mg/ml的α-型干扰素，优选聚乙二醇化α-型干扰素；

(ii)维持ph为6.0±0.5的20mm的乙酸盐、优选乙酸钠缓冲剂系统；

(iii)5-20mm，优选10mm的l-甲硫氨酸；

(iv)120-150mm，优选130-140mm或137mm的氯化钠；

(v)有效稳定α-型干扰素，优选聚乙二醇化α-型干扰素以防止其活性损失的0.01-0.07，优选0.02％重量的表面活性剂；和

(vi)足以制备上述列出的成分的溶液的量的注射用水。

在本发明的一个可选的实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨酯20或泊洛沙姆188。在一个实施方案中，所述表面活性剂是聚山梨酯20。

在本发明的进一步的实施方案中，所述聚乙二醇化α-型干扰素是式(i)的生理学活性聚乙二醇化α-型干扰素结合物

其中r和r’是甲基，x是nh，n和n’的平均总和为850至1000，并且聚乙二醇单元的分子量为约40kda。

在另一个实施方案中，上述聚乙二醇化α-型干扰素是α-2a干扰素。

本发明进一步提供了稳定的水溶液制剂，其包含：

(i)式(i)的聚乙二醇化α-型干扰素0.18mg/ml