小分子多糖无水组合物及其用于皮肤保湿的用途的制作方法

本发明涉及一种新颖的皮肤保湿组合物及其用途，尤其是关于一种小分子多糖无水组合物及其用途。

背景技术：

皮肤是人体隔绝外界环境中的伤害，例如紫外线、病原体、摩擦力等，与防止水分流失的首要防线。皮肤由外向内依序包含由皮脂(sebum)、角质层(hornylayer)、颗粒层(granularlayer)、及基底层(basallayer)构成的表皮层(epidermis)，主要由结缔组织构成的真皮层(dermis)，及皮下组织。随着年龄增长，皮肤会出现皱纹、细纹、松弛、凹陷等老化现象。这些皮肤老化现象的形成与诸多因素有关，例如真皮层内的玻尿酸(hyaluronicacid，简称ha)不足及胶原蛋白缺乏等。其中，玻尿酸不足会造成皮肤含水量减少，进而降低皮肤饱满度与弹性。

玻尿酸又名透明质酸或糖醛酸，是细胞间质的重要组成，其在皮肤中主要分布于真皮层，具有保水的功用。此一功用来自于玻尿酸分子的高度吸水性，其保水值可达1000ml/g。玻尿酸分子是一种双糖聚合物，其双糖单元为葡糖醛酸(glucuronicacid)及乙酰葡糖胺(acetylglucosamine)。在人体内玻尿酸分子的分子量约由5kda至10mda。

为解决前述随年龄增长而发生的玻尿酸不足、皮肤含水量减少的问题，市面上贩卖多种皮肤保湿产品，大多为含有分子量百万以上的高分子玻尿酸的含水产品，将其局部施用于皮肤可提高皮肤表面的含水量，并且避免皮肤内的水分向外界流失，即“锁水屏蔽”的功效。近年来，保养品厂商亦开发出含有分子量10kda至低于1mda的小分子玻尿酸的含水保湿产品，以试图提高皮肤对 玻尿酸的吸收度，进而提升皮肤保水能力，然其收效甚微。

市售含小分子玻尿酸保湿产品的保湿效果有限可归究于两个原因：其一，小分子玻尿酸的品质不佳；其二，小分子玻尿酸保湿产品的配方。工业上，制备小分子玻尿酸的方法多为化学分解法，是利用酸水解、碱水解、或氧化降解等方式将高分子玻尿酸分解为小分子尿酸。此方法虽然简单，所制得的小分子玻尿酸却往往分子粒径不一致，或分子结构遭到破坏，使足以穿透皮肤角质层的角质细胞间隙(约40-50nm)的小分子玻尿酸的有效浓度降低，或者吸水力变差，因而影响含小分子玻尿酸的保湿产品的保湿效果。

关于上述小分子玻尿酸保湿产品的配方问题，由于市售玻尿酸保湿产品皆含水，而玻尿酸的吸水膨胀特性会使小分子玻尿酸的实际粒径放大，进而阻碍小分子玻尿酸穿透皮肤角质层。

因此，开发一种由粒径均一、结构完整的小分子玻尿酸构成的新颖无水组合物，使其真正发挥穿透皮肤角质层、提高皮肤含水量的功效，实有迫切需要。更进一步，或可将此新颖无水组合物的配方应用于其它具有吸水、保湿性质的多糖，以研发出新颖的皮肤保湿组合物。

技术实现要素：

本发明提供一种用于皮肤保湿的小分子多糖无水组合物，由至少一小分子多糖及一无水基剂组成，其中该小分子多糖的分子粒径约12-22nm且能直接穿透皮肤角质层。

在本发明之一实施例中，该小分子多糖为一小分子玻尿酸，由一玻尿酸酶水解一玻尿酸制得，其分子量范围系为4kda至8kda。

在本发明之一较佳实施例中，该小分子玻尿酸占该小分子多糖无水组合物总量的0.5％-3％w/v。

在本发明之一实施例中，该无水基剂为至少一多元醇。

本发明亦提供一种小分子多糖用于制备有效维持皮肤含水量的小分子多糖无水组合物的用途，其中该小分子多糖无水组合物由至少一小分子多糖及一无水基剂组成，其中该小分子多糖的分子粒径约12-22nm，且能直接穿透皮肤角质层。

在本发明之一实施例中，该小分子多糖为一小分子玻尿酸，由一玻尿酸酶水解一玻尿酸制得，其分子量范围系为4kda至8kda。

在本发明之一较佳实施例中，该小分子玻尿酸占该小分子多糖无水组合物总量的0.5％-3％w/v。

在本发明之一实施例中，该无水基剂为至少一多元醇。

本发明的小分子多糖无水组合物凭借其无水配方，使该小分子多糖保持其粒径12-22nm，不至因为该小分子多糖自组合物中吸水而导致该小分子多糖的实际粒径膨胀至大于皮肤角质层的角质细胞间隙40-50nm，因此可达到直接穿透皮肤角质层、将水分有效保留在皮肤表皮层中的效果。本发明的小分子多糖无水组合物因其透皮吸收特性能使皮肤表现出较佳的保水能力，还能长时间维持皮肤含水量，最终将有效预防或改善皮肤的皱纹形成、松弛或凹陷。

目前市售的玻尿酸保湿商品皆采用高比例含水的玻尿酸，这是因为玻尿酸本身具有高亲水性，容易在制程搅拌中溶解于水，故以水作为主要溶剂有制程上的便利性。本发明的一个实施例是通过多元醇溶剂创造出无水配方环境，使小分子玻尿酸保留透皮吸收能力，增加其皮肤保水效果。再者，多元醇本身即是一种良好的入肤载体，可创造出优良的入肤条件。另外，玻尿酸等多糖体材料本就容易滋生微生物，将其置于含水环境下更有助于微生物生长，故市售玻尿酸产品需要在配方中添加额外的抑菌成份或经过灭菌处理。当本发明以高浓度多元醇作为无水基剂时，由于多元醇即具有良好的抑菌效果，不需额外添加抑菌剂或采用进一步的抑菌手段。

以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，以下所列举的实施例用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，因此本发明的保护范围应当以权利要求范围所界定为准。任何熟悉此技术的技术人员的，在不脱离本发明的精神和范围内，所做些许更动与润饰，皆应涵盖于本发明的权利要求范围内。

附图说明

图1a为涂抹玻尿酸分子量1,700kda-1,800kda的含水玻尿酸样品或无水玻尿酸样品的皮肤的皮肤含水量变化图。

图1b为涂抹玻尿酸分子量1,000kda-1,100kda的含水玻尿酸样品或无水玻尿酸样品的皮肤的皮肤含水量变化图。

图1c为涂抹玻尿酸分子量110kda-120kda的含水小分子玻尿酸样品或小分子玻尿酸无水组合物的皮肤的皮肤含水量变化图。

图1d为涂抹玻尿酸分子量4kda-8kda的含水小分子玻尿酸样品或本发明小分子玻尿酸无水组合物的皮肤的皮肤含水量变化图。

图1e为涂抹图1a-d的不同分子量无水玻尿酸样品或小分子玻尿酸无水组合物的皮肤的皮肤含水量增加率变化图。

图2为涂抹不同浓度的本发明小分子玻尿酸无水组合物的皮肤的皮肤含水量变化图。

图3为长期使用本发明小分子玻尿酸无水组合物的皮肤的皮肤含水量变化图。

图4为涂抹(a)本发明小分子玻尿酸无水组合物、(b)屏蔽式玻尿酸无水组合物、(c)小分子玻尿酸与屏蔽式玻尿酸混合无水组合物、或(d)本发明小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物的组合的皮肤的皮肤含水量变化图。

图5为涂抹含水玻尿酸样品或本发明小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物的组合的皮肤的皮肤弹性变化倍率趋势图。

图6为涂抹含水玻尿酸样品或本发明小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物的组合的皮肤的皮肤含水量变化倍率趋势图。

具体实施方式

本发明的小分子多糖无水组合物将由以下实施例进一步说明。本发明一较佳实施例中，选用的小分子多糖为小分子玻尿酸。先将该小分子玻尿酸与作为无水基剂的多元醇配制为特定浓度的小分子玻尿酸无水组合物，再将该组合物局部施用于皮肤表面，以评估该小分子玻尿酸无水组合物提升皮肤含水量的效果。其次，进一步将小分子玻尿酸无水组合物局部施用于皮肤表面，以分析对皮肤弹性及皮肤含水量的影响。

定义

本发明中所称“玻尿酸”，为分子量约1mda以上的玻尿酸及其盐或其衍生物，又称为高分子玻尿酸，以区别于本发明说明书中的小分子玻尿酸。

本发明中所称“小分子玻尿酸”，除非特别指定分子量者，均是分子量约4kda至8kda的玻尿酸及其盐或其衍生物，其所包含的双糖单元约12-22个，其分子粒径约12-22nm。

本发明中所称“多糖”，又称为多糖体，泛指具有良好吸水性且由复数个单糖、单糖的衍生物、双糖或双糖的衍生物经脱水聚合而形成的糖聚合物及其盐，其中，构成单一多糖的单糖或单糖的衍生物可以是一种或多种。例如玻尿酸、葡聚糖、芦荟多糖、海藻多糖、银耳多糖体、灵芝多糖体等是可用于保湿功用的多糖体。

本发明中所称“小分子多糖”，为分子粒径约12-22nm的上述多糖或其水解物。

本发明中所称“多元醇”，泛指具有二个以上羟基的醇类，例如乙醇、丙三 醇(又名甘油)、丙二醇、丁二醇、己六醇(又名山梨醇)等，且该多元醇用于配制本发明小分子多糖无水组合物时，皆为无水形式。

材料与方法

小分子玻尿酸无水组合物

以下实施例的小分子玻尿酸无水组合物所含小分子玻尿酸，购买自bloomagefredabiopharm公司(中国)，利用玻尿酸酶在中性ph与30-50℃的环境下水解高分子玻尿酸而制得微小玻尿酸，且该微小玻尿酸为无水形式的小分子玻尿酸干燥粉末。除非特别指定分子量者，以下实施例中小分子玻尿酸的分子量约4kda至8kda，其所包含的葡糖醛酸及乙酰葡糖胺双糖单元约12-22个，而其分子粒径约为12-22nm。制备小分子玻尿酸无水组合物时，在温度40℃以下的常温及相对湿度45％±5％的环境中，先将小分子玻尿酸干燥粉末与无水丙二醇以真空搅拌机混合均匀，再加入无水丙三醇继续搅拌至粉末完全溶解，即制得重量体积浓度为2％w/v的小分子玻尿酸无水组合物，该组合物含有58％丙二醇和40％丙三醇。以下实施例中提到小分子玻尿酸无水组合物的浓度皆表示小分子玻尿酸在该组合物中的重量体积浓度(w/v)。为维持小分子玻尿酸无水组合物的无水状态，其制备过程中需保持所有容器或接触器物干燥，并且以真空填充机将制得的小分子玻尿酸无水组合物充入真空瓶以保存。

屏蔽式玻尿酸无水组合物

以下实施例的屏蔽式玻尿酸无水组合物是将购买自bloomagefredabiopharm公司(中国)的无水形式高分子玻尿酸干燥粉末(玻尿酸分子量约1mda)，依上述小分子玻尿酸无水组合物的配制方法，而配制得重量体积浓度为1％w/v的屏蔽式玻尿酸无水组合物，该组合物含有58％丙二醇和40％丙三醇。以下实施例中提到屏蔽式玻尿酸无水组合物的浓度皆表示玻尿酸在该组合物中 的重量体积浓度(w/v)。为维持屏蔽式玻尿酸无水组合物的无水状态，其制备过程中需保持所有容器或接触器物干燥，并且以真空填充机将制得的屏蔽式玻尿酸无水组合物充入真空瓶以保存。

含水小分子玻尿酸样品

以下实施例的含水小分子玻尿酸样品是将购买自bloomagefredabiopharm公司(中国)的微小玻尿酸粉末(玻尿酸分子量约4kda-8kda)与二次水混合配制为重量体积浓度为2％w/v的含水小分子玻尿酸样品，该样品含有98％水，近似于一般市售的玻尿酸浓度1％、含水量80％以上的含水玻尿酸产品。以下实施例中提到含水小分子玻尿酸样品的浓度表示小分子玻尿酸在该样品中的重量体积浓度(w/v)。

含水玻尿酸样品

以下实施例的含水玻尿酸样品将购买自bloomagefredabiopharm公司(中国)的玻尿酸粉末(玻尿酸分子量约1mda)与二次水混合配制为重量体积浓度为2％w/v的含水玻尿酸样品，该样品含有98％水，近似于一般市售的玻尿酸浓度1％、含水量80％以上的含水玻尿酸产品。以下实施例中提到含水玻尿酸样品的浓度皆表示玻尿酸在该样品中的重量体积浓度(w/v)。

体外经皮传输分析(invitrotransdermaldeliveryanalysis)

首先，准备用于分析的穿透膜，本试验中是取用猪耳表皮。以二次水清洗猪耳皮肤表面，用解剖刀取猪耳表皮，将其裁切为面积1.5×1.5cm²、厚度650μm的穿透膜后，以磷酸盐缓冲生理食盐水(phosphatebufferedsaline，简称pbs)溶液浸湿封袋后冷冻备用。实验前将穿透膜浸泡在pbs溶液中解冻至室温，使角质细胞间隙回复自然状态，再将穿透膜固定于法兰兹型扩散槽(franztypediffusioncell,loganfdc-6,美国；扩散面积为0.636cm²)。为确认穿透膜的完 整性，先于扩散槽上下层填充pbs溶液，去除下槽中气泡后，测量穿透膜两侧的电阻大于4kω，代表表皮切片完整无破损。进行体外经皮运输分析时，在扩散槽上层施药端放置1.0ml待测样品，将pbs生理溶液置于下层受药端(体绩为5.3ml)，并启用恒温水槽加热器(vtc-200，美国)，经过磁石搅拌，平衡受药端内待测样品浓度分布。每隔一段时间自受药端取样50μl以高效液相层析(简称hplc)系统分析定量，并立即回填相同体积的pbs溶液，以确保受药端内的体积不变。每次实验同时使用5个扩散槽测定，取其平均值。该hplc系统由typebeta50梯度帮浦(ecomsro，捷克)，spd-10avp紫外光可见光侦测器(shimadzu，日本)，dg1310在线除泡装置(uniflows，日本)及metachempolarisc18-a5μm150x4.6mm管柱(agilenttechnologies，美国)组成。样品分析时，以5mm磷酸二氢钠缓冲溶液(ph3.0)进行等位冲提，设定流速1.0ml/min，侦测波长260nm。对照由浓度10ppm-200ppm的aa2g标准溶液所建立的检量线，可计算得样品浓度。各样品浓度重复3次侦测其平均值。

皮肤含水量测试

皮肤含水量由表皮水分测量仪skicon200(acaderm)或cm825(courage+khazakaelectronicgmbh)进行测量。在本测试过程中，连接至表皮水分测量仪的探头与受试者的皮肤待测区域接触，并测量该待测区域的表皮层含水量。此两种表皮水分测量仪皆可测量皮肤含水量，其中，skicon200由该待测区域的导电度计算表皮含水量，而cm825则由探头表面电极的电容量变化计算表皮含水量。测试结果可进一步计算得表皮含水量变化率。由于外界的温湿度等因素会对皮肤含水量有所影响，受试者必须先进入恒温恒湿室平衡20分钟后才进行测试。本测试的环境条件为温度20℃±1℃，相对湿度50％±5％。

皮肤弹性测试

皮肤弹性由皮肤弹性测量仪cutometermpa580(courage+khazakaelectronicgmbh)进行测量。在本测试过程中，连接至皮肤弹性测试仪的皮肤弹性探头与受试者的皮肤待测区域接触，通过在皮肤表面形成一负压而将该待测区域吸入，并测量该待测区域被吸入的深度随时间的变化。该测试结果经过皮肤弹性测量仪所附软件分析，可得到该待测区域的皮肤弹性指数，并可进一步计算得皮肤弹性变化率。由于外界的温湿度等因素会对皮肤弹性有所影响，受试者必须先进入恒温恒湿室平衡10分钟后才进行测试。本测试的环境条件为温度20℃±1℃，相对湿度50％±5％。

上述皮肤含水量测试与皮肤弹性测试前，受试者的皮肤待测区域皆先经过清洗与擦干，而后在涂抹各种玻尿酸或小分子玻尿酸样品前后，进行上述测试。

实施例1

小分子玻尿酸无水组合物的小分子玻尿酸有效穿透皮肤角质层与表皮层

验证本发明小分子玻尿酸无水组合物的无水配方相较于一般含水玻尿酸产品的含水配方能使小分子玻尿酸更有效地穿透皮肤角质层与表皮层，本实施例使用猪耳表皮及法兰兹型扩散槽进行体外经皮传输分析，在43℃下，比较2％小分子玻尿酸无水组合物中分子量4kda-8kda的小分子玻尿酸与2％含水小分子玻尿酸样品中分子量4kda-8kda的小分子玻尿酸的表皮穿透率。

将上述小分子玻尿酸无水组合物或含水小分子玻尿酸样品添加至扩散槽的施药端后，在1小时内由受药端取样3次并以hplc定量，此定量结果除以扩散槽的扩散面积即为小分子玻尿酸的单位面积累积穿透量。依据以下公式：

j＝dq/dt

将此单位面积累积穿透量(上式中的q)对取样时间(上式中的t)微分，即可计算出小分子玻尿酸的表皮穿透率(上式中的j)。

实验结果显示，本发明小分子玻尿酸无水组合物的小分子玻尿酸的表皮穿透率为217.86μg/cm².hr，明显高于含水小分子玻尿酸样品中的小分子玻尿酸的表皮穿透率156.02μg/cm².hr。因此，本发明小分子玻尿酸无水组合物能更有效地让小分子玻尿酸穿透皮肤角质层及表皮层。

实施例2

比较水分与玻尿酸的分子量对玻尿酸组合物的皮肤保水能力的影响

为评估本发明小分子玻尿酸无水组合物的无水配方以及小分子玻尿酸的分子量对该组合物的皮肤保水能力的影响，首先将分子量1,700kda-1,800kda、1,000kda-1,100kda的玻尿酸或分子量110kda-120kda、4kda-8kda的小分子玻尿酸分别以二次水或丙二醇与丙三醇配制为1,700kda-1,800kda或1,000kda-1,100kda的2％含水玻尿酸样品、110kda-120kda或4kda-8kda的2％含水小分子玻尿酸样品、1,700kda-1,800kda或1,000kda-1,100kda的2％无水玻尿酸样品(含58％丙二醇和40％丙三醇)、110kda-120kda或4kda-8kda的2％小分子玻尿酸无水组合物(含58％丙二醇和40％丙三醇)。然后，将上述4种不同分子量的含水玻尿酸或小分子玻尿酸样品分别涂抹于3位25至35岁受试者的右前臂4个皮肤区域，同时将上述另外4种不同分子量的无水玻尿酸样品或小分子玻尿酸无水组合物分别涂抹于同一受试者的左前臂4个皮肤区域，各皮肤区域面积为4x4cm²，涂抹量为3.0±0.1mg/cm²；并且利用表皮水分测量仪corneometercm825(courage+khazakaelectronicgmbh)测量该涂抹区域在涂抹前及涂抹后1小时、2小时、4小时、6小时、8小时的皮肤含水量。

实验结果如图1a-d所示，样品含水与否以及玻尿酸的分子量皆会影响涂抹区域的皮肤的皮肤含水量，图1a-d中横坐标为时间(小时)，纵坐标为皮肤含水量读值(％)，各长条数值表示3位受试者皮肤含水量读值的平均值并整理于表 1-4。在涂抹后1小时至8小时期间，不论玻尿酸的分子量如何，相对于使用含水玻尿酸样品或含水小分子玻尿酸样品的皮肤，使用无水玻尿酸样品或小分子玻尿酸无水组合物的皮肤的皮肤含水量均较高且该含水量的下降趋势较缓，即无水配方的玻尿酸组合物的皮肤保水能力及保湿持久力较佳。此外，以受试者涂抹前的皮肤含水量为基准，计算使用不同分子量的无水玻尿酸样品或小分子玻尿酸无水组合物的皮肤的皮肤含水量增加率，整理于表5及绘制成图1e，会发现含有分子量4kda-8kda的小分子玻尿酸的小分子玻尿酸无水组合物具有最佳皮肤保湿效果，且此保湿效果的持久性也最佳。因此，本实施例证实本发明小分子玻尿酸无水组合物的无水配方以及4kda-8kda小分子玻尿酸能有效提高玻尿酸组合物的皮肤保水能力与保湿持久力。

表1.玻尿酸分子量1,700kda-1,800kda的含水或无水玻尿酸样品的皮肤含水量测试结果

表2.玻尿酸分子量1,000kda-1,100kda的含水或无水玻尿酸样品的皮肤含水量测试结果

表3.玻尿酸分子量110kda-120kda的含水小分子玻尿酸样品或小分子玻尿酸无水组合物的皮肤含水量测试结果

表4.玻尿酸分子量4kda-8kda的含水小分子玻尿酸样品或小分子玻尿酸无水组合物的皮肤含水量测试结果

表5.玻尿酸的分子量对皮肤含水量增加率的影响

实施例3

比较不同浓度小分子玻尿酸无水组合物的皮肤保水能力

为评估不同浓度的本发明小分子玻尿酸无水组合物的皮肤保水能力，首先以分子量4kda-8kda的小分子玻尿酸配制为浓度0.1％、0.5％、1.0％、2.0％、3.0％的小分子玻尿酸无水组合物，这些组合物分别含有59.9％、59.5％、59％、58％或57％的丙二醇，且皆含有40％丙三醇。然后，将上述5种不同浓度的小分子玻尿酸无水组合物分别涂抹于5位30至45岁受试者的左右前臂共5个皮肤区域，各皮肤区域面积为4x4cm²，涂抹量为3.0±0.1mg/cm²，并且利用表皮水分测量仪corneometercm825(courage+khazakaelectronicgmbh)测量该涂抹区域在涂抹前及涂抹后1小时、2小时、4小时、6小时、8小时的皮肤含水量。

如图2所示，小分子玻尿酸无水组合物的浓度会影响涂抹区域的皮肤的皮肤含水量，图2中横坐标为时间(小时)，纵坐标为皮肤含水量读值(％)，各折点表示5位受试者皮肤含水量读值的平均值并整理于表6。随着小分子玻尿酸无水组合物中的小分子玻尿酸的浓度由0.5％上升至2％，受试者皮肤涂抹区域的皮肤 含水量亦显著增加，但当小分子玻尿酸无水组合物的浓度达到3％，涂抹区域的皮肤含水量与使用2％小分子玻尿酸无水组合物时相当而无显著增加，可见浓度2％的小分子玻尿酸无水组合物足以表现出最佳皮肤保水能力。

表6.小分子玻尿酸无水组合物的浓度对皮肤含水量的影响

实施例4

小分子玻尿酸无水组合物的皮肤保水能力长期试验

为评估小分子玻尿酸无水组合物的长期皮肤保水能力，将2％含水玻尿酸样品或2％小分子玻尿酸无水组合物每日2次分别涂抹于10位20至50岁受试者的左前臂一皮肤区域或右前臂一皮肤区域，各皮肤区域面积为4x4cm²，涂抹量为3.0±0.1mg/cm²，持续涂抹8周，并且利用表皮水分测量仪corneometercm825(courage+khazakaelectronicgmbh)测量该涂抹区域在涂抹前及涂抹后1周、2周、4周、6周、8周之皮肤含水量。

图3为长期使用本发明小分子玻尿酸无水组合物的皮肤的皮肤含水量变化图。图3中横坐标为时间(周)，纵坐标为皮肤含水量读值(％)，各长条数值表示10位受试者皮肤含水量读值的平均值。当受试者连续使用本发明小分子玻尿酸无水组合物8周，其皮肤含水量较涂抹前增加27％，且此保湿效果明显优于使用含水玻尿酸样品的情况。

由于市售的一般含水玻尿酸产品主要含有高分子玻尿酸以防止水分由皮肤表面散失，甚至于再加入小分子玻尿酸以试图依靠小分子玻尿酸对皮肤穿透力 而增加皮肤含水量，为了进一步验证小分子玻尿酸与高分子玻尿酸的间隔使用方能得到加乘的皮肤保湿效果，在以下实施例5-7中，将先后使用彼此独立的小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物于皮肤表面以作为实验组。该屏蔽式玻尿酸无水组合物因为含有分子量约1mda的玻尿酸而具有包覆皮肤表面以防止水分散失至外界的效果。

实施例5

小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物组合的皮肤保水能力

本实施例比较本发明小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物的先后使用相对于一般含水玻尿酸产品的皮肤保水能力。首先配制2％小分子玻尿酸无水组合物、1％屏蔽式玻尿酸无水组合物以及2％小分子玻尿酸与1％屏蔽式玻尿酸混合无水组合物(含有2％小分子玻尿酸、1％屏蔽式玻尿酸、57％丙二醇和40％丙三醇)。其后，依照以下4个组别：(a)涂抹1％屏蔽式玻尿酸无水组合物2次，间隔2分钟，(b)涂抹2％小分子玻尿酸无水组合物2次，间隔2分钟，(c)涂抹2％小分子玻尿酸与1％屏蔽式玻尿酸混合无水组合物2次，间隔2分钟，(d)先涂抹2％小分子玻尿酸无水组合物1次，再涂抹1％屏蔽式玻尿酸无水组合物1次，间隔2分钟，将上述组合物涂抹于3位25至35岁受试者的左前臂4个皮肤区域，各皮肤区域面积为4x4cm²，涂抹量为3.0±0.1mg/cm²，并且利用表皮水分测量仪corneometercm825(courage+khazakaelectronicgmbh)测量该涂抹区域在涂抹前及涂抹后1小时、2小时、4小时、6小时、8小时的皮肤含水量。

图4为上述4个组别的皮肤含水量变化。图4中横坐标为时间(小时)，纵坐标为皮肤含水量读值(％)，各折点数值表示3位受试者皮肤含水量读值的平均值并整理于表7。如图4所示，当先后使用2％小分子玻尿酸无水组合物与1％屏蔽式玻尿酸无水组合物，涂抹区域的皮肤含水量明显多于重复使用2％小分子玻尿 酸与1％屏蔽式玻尿酸混合无水组合物的情况。此外，实验结果亦显示先后使用小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物较单独使用小分子玻尿酸无水组合物的情况能造成更佳的皮肤保湿效果与保湿持久力。换言之，将本发明小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物搭配使用，基于屏蔽式玻尿酸能防止水分由皮肤表面散失的特性，将得到加乘的皮肤保湿效果。

表7.小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物的组合对皮肤含水量的影响

实施例6

小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物组合的脸部皮肤弹性测试

为探讨小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物的组合相对于一般含水玻尿酸产品对脸部皮肤弹性的中长期影响，将2％含水玻尿酸样品或2％小分子玻尿酸无水组合物与1％屏蔽式玻尿酸无水组合物的组合每日早晚各1次涂抹于6位受试者的左脸皮肤或右脸皮肤(包含眼睛周围)，持续涂抹14天，并且利用皮肤弹性测量仪cutometermpa580(courage+khazakaelectronicgmbh)每天测量该涂抹区域在涂抹后1-14天的皮肤弹性。在使用2％小分子玻尿酸无水组合物与1％屏蔽式玻尿酸无水组合物的组别中，先涂抹2％小分子玻尿酸无水组合物于右脸1次，再涂抹1％屏蔽式玻尿酸无水组合物于右脸1次，间隔2分钟。在单独使用2％含水玻尿酸样品的组别，则是涂抹该样品于左脸2次，间隔2分钟。

图5为上述2个组别的皮肤弹性变化。图5中横坐标代表时间(天)，纵坐标 代表以第一天测量的皮肤弹性为基准的皮肤弹性变化倍率，各时间点的变化率是6位受试者皮肤弹性变化率的平均值并整理于表8。如图5所示，相对于使用2％含水玻尿酸样品的脸部皮肤的弹性减少，当2％小分子玻尿酸无水组合物与1％屏蔽式玻尿酸无水组合物搭配使用时，脸部皮肤弹性会增加，且此一效果可有效维持至少14天。

表8.不同玻尿酸样品对皮肤弹性变化倍率的影响

实施例7

小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物组合的脸部皮肤保水能力

为验证小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物组合相对于一般含水玻尿酸产品的中长期脸部皮肤保水能力，将2％含水玻尿酸样品或2％小分子玻尿酸无水组合物与1％屏蔽式玻尿酸无水组合物的组合每日早晚各1次涂抹于6位受试者的左脸皮肤或右脸皮肤(包含眼睛周围)，持续涂抹14天，并且利用表皮水分测量仪skicon200(acaderm)每天测量该涂抹区域在涂抹后1-14天 的皮肤含水量。在使用2％小分子玻尿酸无水组合物与1％屏蔽式玻尿酸无水组合物的组别中，先涂抹2％小分子玻尿酸无水组合物于右脸1次，再涂抹1％屏蔽式玻尿酸无水组合物于右脸1次，间隔2分钟。在单独使用2％一般含水玻尿酸样品的组别，则是涂抹该样品于左脸2次，间隔2分钟。

图6为上述2个组别的皮肤含水量变化。图6中横坐标代表时间(天)，纵坐标代表以第一天测量的皮肤含水量为基准的皮肤含水量变化倍率，各时间点之变化率是6位受试者皮肤含水量变化倍率的平均值并整理于表9。如图6所示，相对于使用2％含水玻尿酸样品的脸部皮肤的含水量减少，当1％屏蔽式玻尿酸无水组合物与2％小分子玻尿酸无水组合物搭配使用时，脸部皮肤含水量上升，且此效果随着使用天数逐渐增加。

表9.不同玻尿酸样品对皮肤含水量变化倍率的影响

现今市面上含小分子玻尿酸的保湿产品大多混合高分子玻尿酸，以便同时具备高分子玻尿酸的锁水屏蔽功效及小分子玻尿酸的较佳皮肤穿透力。然而，由于此二种分子间的吸引力，高分子玻尿酸的存在会干扰小分子玻尿酸穿透皮 肤角质层，反而降低小分子玻尿酸表现出的皮肤保水能力。实施例5-7的实验结果显示，将本发明小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物分别配制再间隔使用，而非将二者混合为一来使用，可得到优于市售的一般含水玻尿酸产品的皮肤保湿效果。

由上述实施例可知，相对于含水小分子玻尿酸样品，本发明小分子玻尿酸无水组合物具有有效穿透皮肤角质层的能力，可将水分有效保留在皮肤表皮层，增加皮肤的含水量。另外，将本发明的小分子玻尿酸无水组合物与屏蔽式玻尿酸无水组合物搭配使用，能进一步提升皮肤含水量与皮肤弹性。

综合而言，本发明的小分子多糖无水组合物因其无水配方，保持小分子多糖的分子粒径为12-22nm，可避免小分子多糖自组合物中吸水而造成小分子多糖的实际粒径膨胀至大于皮肤角质层的角质细胞间隙40-50nm，因此达到直接穿透皮肤角质层、将水分有效保留在皮肤表皮层中的效果。本发明的小分子多糖无水组合物能增加皮肤保水能力，还能长时间维持皮肤含水量，将有效预防或改善皮肤的皱纹形成、松弛或凹陷。