本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种培美曲塞二钠的注射剂及其制备方法。
背景技术：
培美曲塞二钠(Pemetrexed disodium)，化学名称为N-[4-[2-(2-氨基-4，7-二氢-4-氧-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-烷基)乙基]苯甲酰基]-L-谷氨酸二钠。
培美曲塞二钠为多靶点叶酸拮抗剂，由美国礼来公司开发用于治疗肿瘤，联合顺铂可治疗无法手术的恶性胸膜间皮瘤，目前，培美曲塞二钠是世界上唯一治疗恶性胸膜间皮瘤(MPM)的药物，同时用于转移性非小细胞肺癌二线治疗。培美曲塞单药或联合化疗对多种肿瘤有明显的治疗作用，尤其对既往治疗失败的患者，培美曲塞二钠给他们带来了新的机会和希望。培美曲塞二钠的稳定性较差，在高温、氧化条件下易发生降解，产生可能引发毒副作用的杂质，不适合制成需要高温灭菌的注射液，因而培美曲塞二钠通常制成冻干粉针剂，但现有的培美曲塞二钠的冻干粉针剂在运输和贮藏的过程中，也常因为温度控制不严格而导致冻干粉针剂中杂质含量明显增加。
CN102106833A公开一种培美曲塞二钠冻干粉针剂及其制备方法，该培美曲塞二钠冻干粉针剂由培美曲塞二钠和甘露醇组成，所述甘露醇和培美曲塞二钠的质量比为0.6～2.0∶1。CN101411710A公开了一种培美曲塞二钠冻干粉针剂及其制法，该粉针剂由培美曲塞二钠、甘露醇和亚硫酸钠组成，其中原料质量份配比：培美曲塞二钠50，甘露醇10～50，亚硫酸钠0.1～1；所述的培美曲塞二钠冻干粉针剂的pH值为7.0～8.0。亚硫酸钠为常用的抗氧剂，具有较强的活血活性，对主药有一定的影响。
在药物载体输送系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性。作为一种新型药物制剂，脂质体制剂具有以下优点：（1）具有缓释作用：活性成分缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间，提高质量效果；（2）降低药物毒性；（3）增加药物的溶解性，提高制剂质量；（4）具有靶向性：脂质体所载的药物在肝、脾网状内皮系统脏器局部维持高浓度，从而起到药物器官靶向性作用；（5）具有对活性药物成分的保护作用。
随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。
CN201210551378.1公开了一种培美曲塞二钠脂质体注射剂，该脂质体注射剂由培美曲塞二钠、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱、PEG600、胆固醇和甘露醇制成。该脂质体注射剂具有脂质体粒径小且分布均匀、包封率高、渗漏率低、稳定性好。虽然CN201210551378.1公开的培美曲塞二钠脂质体注射剂具有在“体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了部分缓释效果，生物利用度增加”的技术效果，但仍然没有实现靶向给药的效果。
由于培美曲塞二钠注射剂和脂质体注射剂的不足，目前存在培美曲塞二钠靶向给药制剂的需求。
技术实现要素：
为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种更有优势的培美曲塞二钠脂质体注射剂。
本发明提供的培美曲塞二钠脂质体注射剂含有培美曲塞二钠、中性磷脂、带电荷磷脂、胆固醇、抗氧剂，任选的含有助悬剂，脂质体的粒径控制在100-150nm。
所述的培美曲塞二钠和中性磷脂的质量比为0.01～0.2:1，带电荷磷脂和中性磷脂的质量比为0.01～0.4:1；胆固醇与中性磷脂质量比为0.1～0.3:1；抗氧剂与中性磷脂质量比为0～0.02:1；优选培美曲塞二钠:带电荷磷脂:胆固醇:抗氧剂:中性磷脂=0.1～0.2: 0.1～0.4:0.1～0.3 : 0.01～0.02:1。胆固醇可使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低了氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。为了进一步降低形成脂质体的磷脂和脂质体所包裹药物的化学降解，抗氧剂通过与磷脂过氧化自由基反应并猝灭单一态的氧分子和对磷脂的双分子层进行排序（如限制类脂层分子的流动性）等分子机制而发挥其抗氧化作用。本发明的抗氧剂选自维生素E或维生素C。
进一步地，所述的中性磷脂为蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双硬脂酸卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、双软脂酸卵磷脂或双肉豆寇酸卵磷脂；
所述的带电荷磷脂为带负电荷磷脂或带正电荷磷脂；其中负电荷磷脂选自双肉豆寇酸磷脂酰甘油、双月桂酸磷脂酰甘油、双软脂酸磷脂酰甘油、双硬脂酸磷脂酰甘油、双肉豆寇酸磷脂酸、双硬脂酸磷脂酸、双月桂酸磷脂酸、双软脂酸磷脂酸、双油酸磷脂酰丝氨酸或双亚油酸磷脂酰肌醇其中一种或多种；
所述带正电荷磷脂选自为二棕榈酰基磷脂酰基乙基氨基-L-赖氨酸、二油酸磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酸或十八胺中一种或多种。目前脂质体制备主要选用中性的卵磷脂，但由于含有卵磷脂的脂质体的粒径在贮存期间会发生改变而影响其药效，本发明在配方中加入带电荷的磷脂可使脂质体粒径在贮存期间的变化减小到最小低程度。
本发明在配方中加入的助悬剂选自羧甲基纤维素、甲基纤维素或聚乙二醇。助悬剂选自聚乙二醇时，聚乙二醇的分子量为200至400，优选300。本发明通过加入助悬剂尤其是优选的聚乙二醇300，增加了注射剂体系的黏度，降低微粒的沉降速度，减少了微粒之间相互聚集，使得脂质体稳定性显著增强。
本发明所述的脂质体注射剂，主要由培美曲塞二钠、双软脂酸卵磷脂、双硬脂酸磷脂酰甘油、胆固醇、维生素E和聚乙二醇组成。
本发明所述的脂质体注射剂，优选主要由培美曲塞二钠、双软脂酸卵磷脂、双硬脂酸磷脂酰甘油、胆固醇、维生素E和聚乙二醇300组成。
本发明的目的还在于提供一种培美曲塞二钠脂质体注射剂的制备方法，步骤如下：
(1)将培美曲塞二钠、中性磷脂、 带电荷磷脂、胆固醇和抗氧剂制成脂质薄膜；
(2)加入助悬剂的水溶液水化；
(3)均化脂质体至所需粒径和均匀度；
(4)定容、除菌、分装。
更为具体的，培美曲塞二钠脂质体注射剂的制备方法步骤如下：
1）制备培美曲塞或培美曲塞二钠脂质体：根据配方选用培美曲塞二钠、中性磷脂、带电荷磷脂、胆固醇和抗氧剂溶于甲醇中，混合均匀；用旋转蒸发仪将溶液中溶剂减压除去，形成脂质薄膜；2）加入助悬剂的水溶液水化，水化温度一般在30℃-50℃ 之间，得培美曲塞或培美曲塞二钠悬浮液；3)均化脂质体：水化完全后用高压均粒机制备脂质体至所需粒径和均匀度，脂质体的粒径控制在100-150nm，脂质体粒径和均匀度用多角度纳米粒子分析器来检测；4)定容、除菌、分装、保存：用注射用水定容；将培美曲塞或培美曲塞二钠脂质体悬浮液用微孔膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存至使用。
本发明培美曲塞二钠脂质体制剂控制脂质体粒径在100-150nm，将水溶性的培美曲塞二钠包裹在脂质体内环境中，通过控制脂质体粒径控制，使得脂质体选择性的肿瘤组织中的血管壁，把药物输送到病灶部位，达到靶向给药的目的。本发明培美曲塞二钠脂质体制剂能够将培美曲塞二钠靶向分布在癌变器官，显著提高了培美曲塞二钠的疗效，减少了毒副作用。
本发明的培美曲塞二钠脂质体注射剂包封率高、稳定性好，生产工艺简单可靠，避免了生产和存储过程培美曲塞二钠降解产生的有关物质提高，显著放宽了培美曲塞二钠脂质体注射剂的保存条件。
附图说明
图1是大鼠静脉注射3mg/kg实施例2培美曲塞二钠脂质体注射剂后的组织分布图
具体实施例
以下所述仅是本发明的部分优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。
实施例1
制剂处方
制剂工艺如下：
根据配方选用培美曲塞二钠、磷脂、胆固醇和维生素E溶于甲醇中混合均匀；用旋转蒸发仪将溶液中甲醇减压除去，形成脂质薄膜；将PEG300溶于注射用水10ml，并水化脂质薄膜，水化温度为40℃，得培美曲塞二钠脂质体悬浮液；水化完全后用高压均粒机制备脂质体至平均粒径为130±10nm，脂质体粒径和均匀度用多角度纳米粒子分析器来检测；用注射用水定容并调节至的浓度为2.0mg/ml溶液，将培美曲塞二钠脂质体悬浮液用0.22微米孔径的微孔膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存。
实施例2
制剂处方
制剂工艺如下：
根据配方选用培美曲塞二钠、磷脂、胆固醇和维生素E溶于甲醇中混合均匀；用旋转蒸发仪将溶液中甲醇减压除去，形成脂质薄膜；将PEG300溶于注射用水10ml，并水化脂质薄膜，水化温度为30℃，得培美曲塞二钠脂质体悬浮液；水化完全后用高压均粒机制备脂质体至平均粒径为120±10nm，脂质体粒径和均匀度用多角度纳米粒子分析器来检测；用注射用水定容并调节至的浓度为2.0mg/ml溶液，将培美曲塞二钠脂质体悬浮液用0.22微米孔径的微孔膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存。
实施例3
制剂处方
制剂工艺如下：
根据配方选用培美曲塞二钠、磷脂、胆固醇和维生素E溶于甲醇中混合均匀；用旋转蒸发仪将溶液中甲醇减压除去，形成脂质薄膜；将PEG300溶于注射用水10ml，并水化脂质薄膜，水化温度为50℃，得培美曲塞二钠脂质体悬浮液；水化完全后用高压均粒机制备脂质体至平均粒径为110±10nm，脂质体粒径和均匀度用多角度纳米粒子分析器来检测；用注射用水定容并调节至的浓度为2.0mg/ml溶液，将培美曲塞二钠脂质体悬浮液用0.22微米孔径的微孔膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存。
实施例4
制剂处方
制剂工艺如下：
根据配方选用培美曲塞二钠、磷脂、胆固醇溶于甲醇中混合均匀；用旋转蒸发仪将溶液中甲醇减压除去，形成脂质薄膜；将PEG300溶于注射用水10ml，并水化脂质薄膜，水化温度为30℃，得培美曲塞二钠脂质体悬浮液；水化完全后用高压均粒机制备脂质体至平均粒径为120±10nm，脂质体粒径和均匀度用多角度纳米粒子分析器来检测；用注射用水定容并调节至的浓度为2.0mg/ml溶液，将培美曲塞二钠脂质体悬浮液用0.22微米孔径的微孔膜过滤除菌，分装即得成品，成品可在2℃-8℃下保存。
试验例1
采用经气管穿刺方法，将人非小细胞肺癌H460SM细胞接种于辐射后的裸大鼠左肺内，构建人非小细胞肺癌原位动物模型。随机将动物分成5组，每组8只，雌雄各半，分别单次静脉注射3mg/kg实验例二制备的培美曲塞二钠脂质体注射剂，测定在给药后0.25h、2h、8h、24h各主要组织和血浆中培美曲塞二钠的浓度，评价其分布情况，分布图如图1所示。
试验例2
将本发明实施例1-4的样品分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月，进行加速稳定性试验考察，考察结果见下表：