硫酸巴龙霉素用于制备中性粒细胞抑制剂的应用的制作方法

本发明涉及医药技术领域，进一步涉及物质的新的医药用途，具体涉及硫酸巴龙霉素用于制备中性粒细胞抑制剂的应用。

背景技术：

中性粒细胞是在瑞氏染色中，胞质呈无色或极浅淡红色的一类细胞。中性粒细胞来源于骨髓，具有分叶形或杆状的核，胞浆内含有大量既不嗜碱也不嗜酸的中性细颗粒，这些颗粒多是溶酶体，内含髓过氧化酶、溶菌酶、碱性磷酸酶和酸性水解酶等丰富的酶类，与细胞的吞噬和消化功能有关。现有技术研究表明，中性粒细胞具有趋化作用、吞噬作用、杀菌作用。

中性粒细胞在化学趋向因子的作用下，可向目的物移行，炎症发生时，在化学趋向因子的作用下，粒细胞先吸附于血管壁，然后向血管外移行至组织。中性粒细胞在免疫球蛋白和补体参与下，可使微生物吸附于粒细胞膜上，微生物被粒细胞伸出的伪足包围，胞膜凹陷形成空泡，进而发挥吞噬作用。此外，中性粒细胞经吞噬作用后发生代谢变化，耗氧增加，过氧化氢产生增多，磷酸戊糖旁路代谢增强，部分过氧化氢进人吞噬空泡，与过氧化物酶作用后起杀菌作用。临床研究表明，中性粒细胞密切伴随炎症存在，可激活并表达炎性因子，是多种炎性损伤的直接物质基础，中性粒细胞的异常增加往往指向急性、化脓性感染、恶性肿瘤、急性大出血、急性溶血等症。因此对中性粒细胞的调节可作为多种炎症性疾病重治疗靶点。

滴虫性阴道炎(trichomonal vaginitis，TV)是由阴道毛滴虫引起的女性生殖道炎症，是最常见的性传播疾病之一。临床研究表明，滴虫感染后，VECs和嗜中性粒细胞对IL-8、TNF-α等化学趋化因子的表达明显升高，IL-8对嗜中性白细胞具有化学趋向性和脱颗粒作用，IL-8和TNF-α可进一步促进白细胞游出、聚集、活化，后者在吞噬病原体的同时可释放损伤性炎症介质，加重感染过程中细胞和组织的损伤。因此对中性粒细胞及其所分泌的炎性因子IL-8、TNF-α的调节将可能对滴虫性阴道炎起到治疗作用。

硫酸巴龙霉素为氨基糖苷类抗生素，对革兰氏阳性和阴性细菌均有抑制作用，以对志贺菌属和金葡菌的作用较显著，对铜绿假单胞菌和厌氧菌无作用，对阿米巴原虫有较强抑制作用，对利什曼原虫、隐孢子虫、丝虫等亦有良好作用。现有技术中未发现其对中性粒细胞或炎性因子IL-8、TNF-α具有调节作用。

技术实现要素：

本发明要解决的一个技术问题是提供硫酸巴龙霉素的一种新用途。

本发明要解决的另一技术问题是提供可用于调节中性粒细胞炎性因子分泌性能的新药物。

本发明要解决的再一技术问题是降低白细胞介素8的分泌量。

本发明要解决的又一技术问题是降低肿瘤坏死因子α的分泌量。

本发明要解决的又一技术问题是实现滴虫性阴道炎的治疗。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

硫酸巴龙霉素用于制备中性粒细胞活性抑制药物的应用。

作为优选，所述中性粒细胞活性是中性粒细胞的炎性因子分泌量。

作为优选，所述炎性因子是白细胞介素8。

作为优选，所述炎性因子是肿瘤坏死因子α。

作为优选，所述中性粒细胞的炎性因子分泌量抑制药物，是以抑制中性粒细胞的炎性因子分泌量为治疗通路的炎症性疾病治疗药物。

作为优选，所述炎症性疾病是滴虫性阴道炎。

本发明创新性的发现硫酸巴龙霉素可抑制中性粒细胞活性，尤其可以降低IL-8及TNF-α的分泌量，而且，这种炎性因子抑制作用在中性粒细胞的体外培养实验和体内实验中均得到了证实。由于IL-8、TNF-α作为典型的炎性细胞因子在炎症损伤的病理过程中作用确切，因此对其抑制作用可作为炎症性疾病的治疗药物。就本发明而言，基于硫酸巴龙霉素的以上新性质，可应用其治疗以IL-8、TNF-α过度分泌为效应的多种疾病，其中又以滴虫性阴道炎治疗效果较佳。本发明基于实验手段研究了硫酸巴龙霉素的新性质，并基于该新性质确定了将其作为炎症性疾病治疗药物的新用途，同时明确了硫酸巴龙霉素对滴虫性阴道炎的治疗机理，为中性粒细胞炎性因子分泌抑制药物的开发奠定了基础。

附图说明

图1是本发明具体实施方式中，体外培养条件下、阴道毛滴虫刺激时，硫酸巴龙霉素对中性粒细胞的IL-8、TNF-α分泌量影响图。

图2是本发明具体实施方式中，以阴道给药方式施用硫酸巴龙霉素时，对滴虫性阴道炎患病小鼠的阴道冲洗液中IL-8、TNF-α含量影响图。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。

以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。

除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1(体外检测硫酸巴龙霉素对IL-8和TNF-α含量的影响)

实验材料：

滴虫虫株取自天津医科大学总医院妇产科就诊的患者，将虫株于37℃条件下常规培养，培养基为含10％血清的肝浸汤培养基；肝浸汤培养基为实验室自行配制；中性粒细胞购自于南京凯基生物科技发展有限公司；胎牛血清购自于购自赛默飞世尔科技有限公司；硫酸巴龙霉素购自于河南辅仁药业有限公司；NaCl购自于上海永叶生物科技有限公司；蛋白胨购自于OXOID；半胱氨酸盐酸盐购自于Amresco公司；麦芽糖购自于Amresco公司；白细胞介素8(IL-8)ELISA试剂盒购自于上海酶联生物科技有限公司；小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒购自于上海酶联生物科技有限公司。

实验方法：

中性粒细胞与滴虫以10：1的比例共培养24h后加硫酸巴龙霉素，加药的终浓度分别为0、2mg/ml；给药时间为24h。加药培养24h后，用中性粒细胞裂解液裂解3h，1000rpm离心5min，取上清液；用ELISA试剂盒检测以上上清液中的IL-8和TNF-α的水平，各设置3个复孔，用450nm酶标仪读取数据。所有数据经SPSS17.0统计，用Graphpad Prism 5软件进行作图，实验结果如表1、图1所示。

表1体外培养条件下、阴道毛滴虫刺激时，硫酸巴龙霉素对中性粒细胞的IL-8、TNF-α分泌量影响

注：**，与溶剂对照组相比较，P<0.01

如表1、图1所示，体外培养条件下，因阴道毛滴虫刺激作用所导致的中性粒细胞过度分泌IL-8、TNF-α现象会因硫酸巴龙霉素的干预得到明显的抑制，两种炎性因子分泌量显著降低。

实施例2(体内动物模型水平检测硫酸巴龙霉素对IL-8和TNF-α含量的影响)

实验材料：

雌性Balb/c小鼠购自中国人民解放军军事医学科学院试验动物中心；滴虫虫株取自天津医科大学总医院临床，37℃条件下常规培养，培养基为含10％血清的肝浸汤培养基；胎牛血清购自于购自赛默飞世尔科技有限公司；苯甲酸雌二醇注射液购自于天津金耀药业有限公司；乳酸杆菌胶囊购自于内蒙古双奇药业股份有限公司；硫酸巴龙霉素购自于河南辅仁药业有限公司；NaCl购自于上海永叶生物科技有限公司；蛋白胨购自于OXOID；半胱氨酸盐酸盐购自于Amresco公司；麦芽糖购自于Amresco公司；白细胞介素8(IL-8)ELISA试剂盒购自于上海酶联生物科技有限公司；小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒购自于上海酶联生物科技有限公司。

实验方法：

选用体重18-22g的雌性Balb/c小鼠15只，分为3组，每组5只，第一组为溶剂对照组，第二组为模型组，第三组为硫酸巴龙霉素组。第一天、第二天小鼠腹部肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mL；第三天、第4天将乳酸杆菌悬液注入小鼠阴道内，每次20μL；第10天、第11天小鼠腹部肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1ml；第12天、第13天将对数生长期的滴虫悬液注入小鼠阴道内，每次20μL(107/mL)。每天取小鼠阴道冲洗液显微镜下观察，阴道冲洗液中发现活动的阴道毛滴虫，即小鼠滴虫性阴道炎模型建模成功。建模成功后，开始阴道给药。硫酸巴龙霉素组阴道给20mg/ml的硫酸巴龙霉素，每只每次0.1ml，溶剂对照组和模型组给等量的生理盐水，给药5天后，取3组小鼠的阴道冲洗液；用ELISA试剂盒检测溶剂对照组、模型组与硫酸巴龙霉素组小鼠阴道冲洗液中炎症因子IL-8和TNF-α的水平，各设置3个复孔，用450nm酶标仪读取数据。所有数据经SPSS17.0统计，用Graphpad Prism 5软件进行作图，实验结果如表2、图2所示。

表2以阴道给药方式施用硫酸巴龙霉素时，对滴虫性阴道炎患病小鼠的阴道冲洗液中IL-8、TNF-α含量影响

注：#，与溶剂对照组相比较，P<0.05；**，与模型组相比较，P<0.01。

如表2、图2所示，阴道给药方式施用硫酸巴龙霉素，能够显著降低滴虫性阴道炎模型小鼠的阴道冲洗液中IL-8、TNF-α含量，结合实施例1的实验结果有理由相信这种含量降低现象是由于中心粒细胞对IL-8、TNF-α分泌量受到抑制所导致的。因此硫酸巴龙霉素可以作为滴虫性阴道炎的治疗药物，这种治疗是以硫酸巴龙霉素抑制中性粒细胞分泌IL-8、TNF-α为药理作用实现的。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。