技术领域
本发明涉及一种枸杞提取物、抗疲劳作用的药物制剂及其制备方法，属于天然药物提取技术领域。
背景技术：
枸杞（学名：Lyciumchinense）是茄科枸杞属的多分枝灌木植物，高 0.5-1 米，栽培时可达 2 米多。国内外均有分布。
枸杞的作用包括有：1．增强非特异性免疫作用 宁夏枸杞的醇或水提取物，均能显著增强网状内皮系统对印度墨汁的吞噬能力。枸杞的提取物，也能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。 2．保护肝脏及抗脂肪肝作用 枸杞的水提取物或甜菜碱，可提高大鼠肝脏的磷酯水平和总胆固醇含量。对四溴酜钠(BSP)、谷草转氨酶(SGPT)、碱性磷酸酶、胆碱脂酶等试验均有改善作用。另外，还有促进肝细胞再生作用，抑制脂肪在肝细胞内的沉积作用。枸杞对脂质代谢及抗脂肪肝作用，主要和甜菜碱传递甲基供体有关。 3．其他作用 枸杞煎剂对小鼠正常造血功能有促进作用，可使白细胞(主要是淋巴细胞)数增多，对环磷胺抑制白细胞(主要是淋巴细胞)生成也具有对抗作用。枸杞水提取物，能引起家兔血压降低、心脏抑制、呼吸和肠平滑肌兴奋，其作用可被阿托品阻断。枸杞内含有胍的衍生物具有降低血糖作用。甜菜碱还有刺激家禽生长及促进乳酸菌生长及产酸作用。
枸杞多糖是一种水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分，相对分子质量为68-200，成为国内外研究热点。其中又以枸杞多糖的免疫调节和抗肿瘤作用的研究最多。现已有很多研究表明枸杞多糖具有促进免疫、抗衰老、抗肿瘤、清除自由基、抗疲劳、抗辐射、保肝、生殖功能保护和改善等作用。
CN101564469A公开了一种枸杞多糖提取物，其特征在于酸性多糖含量为85％-95％，中性多糖为1％-5％。采用水提醇沉、超滤和离子交换有机结合的方法，提取得到枸杞多糖提取物；药理实验表明，该枸杞多糖具有很好的治疗肿瘤的作用。CN101133833A公开一种枸杞活性多糖制备方法，用经过40～60度酒精冷浸或加热提取后的枸杞药渣为原料，以水为溶剂进行提取，从而获得枸杞多糖提取物；选择具有α－(1→4)糖苷键内切活性的α－淀粉酶对枸杞多糖提取物中的枸杞粗多糖进行酶解，从而获得低分子量的枸杞活性多糖。
但是上述常规方法得到的枸杞多糖存在着活性低，保健治疗效果有待进一步提高的问题。
技术实现要素：
本发明的目的是：提供一种枸杞提取物，其具有较好的抗疲劳效果，并提供了相应的药物制剂。
技术方案是：
一种枸杞提取物，它是通过如下方法提取得到：
第1步、按重量份计，取枸杞20～30份，研磨成粉末，再加入6～8倍重量的水、硫酸钠0.2～0.5份、磷酸二氢钠0.2～0.4份，升温至60～70℃浸提，时间是1～3小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的30%～40%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度大于80%，使产生沉淀，静置1～3小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入30～40份的水，再加入水的重量0.5～1%的酶，调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为25%～30%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%以上，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物。
第1步中研磨的粉末目数是200～400目。
第2步中微滤膜的平均孔径是100～200 nm。
第3步中纳滤膜的截留分子量是300～500Da。
第5步中，使用质量浓度是1%～3%的盐酸溶液对pH进行调节；酶解时间为0.5～2h，酶解温度为50～70℃。
第5步中，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物。
包含有上述枸杞提取物的药物制剂。
上述的枸杞提取物在制备提高哺乳动物抗疲劳能力药物中的应用。
有益效果
本发明提供的枸杞提取物，具有纯度高、收率高的优点，采用了酶解技术之后，促进了其中的大分子向小分子的转变，使抗疲劳作用效果更好。
具体实施方式
实施例1
第1步、按重量份计，取枸杞20份，研磨成200～400目粉末，再加入6倍重量的水、硫酸钠0.2份、磷酸二氢钠0.2份，升温至60℃浸提，时间是1小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是100nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是300Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的30%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置1小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入30份的水，再加入水的重量0.5%的酶，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用质量浓度是1%的盐酸溶液对pH进行调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为0.5h，酶解温度为50℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为25%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量43wt%。
实施例2
第1步、按重量份计，取枸杞30份，研磨成200～400目粉末，再加入8倍重量的水、硫酸钠0.5份、磷酸二氢钠0.4份，升温至70℃浸提，时间是3小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是200 nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是500Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的40%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置3小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入40份的水，再加入水的重量1%的酶，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用质量浓度是3%的盐酸溶液对pH进行调节pH至6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为2h，酶解温度为70℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为30%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量45wt%。
实施例3
第1步、按重量份计，取枸杞25份，研磨成200～400目粉末，再加入7倍重量的水、硫酸钠0.3份、磷酸二氢钠0.3份，升温至65℃浸提，时间是2小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是150 nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是400Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的35%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置2小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入35份的水，再加入水的重量0.8%的酶，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用质量浓度是2%的盐酸溶液对pH进行调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为1h，酶解温度为60℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为28%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量47wt%。
对照例1
与实施例3的区别在于：浸提过程中未加入硫酸钠。
第1步、按重量份计，取枸杞25份，研磨成200～400目粉末，再加入7倍重量的水、磷酸二氢钠0.3份，升温至65℃浸提，时间是2小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是150 nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是400Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的35%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置2小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入35份的水，再加入水的重量0.8%的酶，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比1：0.5：2：1的混合物，使用质量浓度是2%的盐酸溶液对pH进行调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为1h，酶解温度为60℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为28%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量43wt%。
通过实施例3和对照例1可以看出，通过在浸提过程中加入硫酸钠可以有效地促进细胞分解，使更多的提取物可以得到利用，提高了提取物中多糖含量。
对照例2
与实施例3的区别在于：在第5步的酶解中碱性果胶酸裂解酶未加入，其重量被碱性木聚糖酶所替代。
第1步、按重量份计，取枸杞25份，研磨成200～400目粉末，再加入7倍重量的水、硫酸钠0.3份、磷酸二氢钠0.3份，升温至65℃浸提，时间是2小时，得到浸提液；
第2步、将浸提液通过平均孔径是150 nm的微滤膜进行过滤，得到微滤透过液；
第3步、将微滤透过液用截留分子量是400Da的纳滤膜进行浓缩，得到纳滤浓缩液；
第4步、将纳滤浓缩液进一步蒸发至体积缩小为纳滤浓缩液体积的35%，然后加入乙醇使料液中的乙醇的体积浓度80%，使产生沉淀，静置2小时后，取下部的沉淀；
第5步、在沉淀中加入35份的水，再加入水的重量0.8%的酶，所述的酶选自碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比0.5：3：1的混合物，使用质量浓度是2%的盐酸溶液对pH进行调节pH至5.0～6.0，混合均匀，进行酶解，酶解时间为1h，酶解温度为60℃，结束后升温灭酶，得到酶解液；
第6步、将酶解液蒸发浓缩，直至体积缩小为28%，再在浓缩液中加入乙醇使乙醇的体积浓度在80%，产生沉淀，滤出沉淀后，干燥，得到提取物，提取物中多糖含量44wt%。
对阳虚症小鼠的影响
取雄性小鼠70只，体重20～23g，将小鼠随机分7组：正常对照组、阳虚证模型组(氢化 可的松0.125g/kg)及氢化可的松+本发明的枸杞提取物(实施例1～3、对照例1～2，0.5g/kg)5组。各组均灌胃给 药或N.S，每天一次，连续用药6天。给药第4天(除正常对照组外)同时肌注氢化可的松 0.125g/kg，连续肌注3天。末次给药后1小时记录各组小鼠体重、体温、自主活动次数(10 分钟内)及低温游泳存活时间，结果见下表：
本发明制剂对阳虚证小鼠的影响(n＝10， X±S)
注 ： 与阳虚模型组比较 ※P ＜ 0.05，与实施例3组比较 #P<0.05。
结果表明本发明得到的提取物能使阳虚证小鼠体温升高，活动增加，低温游泳时间延长，体重增加。实施例3相对于对照例2来说，通过加入碱性果胶酸裂解酶，促进了提取物的分解，使成分活性得到了提高，提高了促进阳虚证小鼠恢复体力的效果。