一种治疗高血压的野菊花提取物的制作方法

本发明涉及中药提取物领域，具体涉及一种野菊花提取物及含有该提取物的药物制剂，该提取物可以应用于治疗高血压。

背景技术：

野菊花为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.北野菊C.boreale Mak.或岩香菊C.lavandulaefolium(Fisch.)Mak.的头状花序。《中国药典》2010版一部及《中药大辞典》第二版中野菊花的来源均仅为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的干燥头状花序。野菊花性凉，味苦、辛，归肺肝经，具有疏风清热、消肿解毒的功效，主治风热感冒、高血压、肺炎、口疮、痈疖等。

野菊花含有多种化学成分。野菊花含萜类成分较多，主要有单萜、倍半萜、二聚倍半萜、三萜及其含氧衍生物等，其中大部分存在于挥发油中。黄酮类化合物是野菊花中重要的药效成分。早在1942年人们就从野菊花中分离出黄酮类化合物木犀黄酮苷。

野菊花在我国历史悠久，我国中医药书《神农本草经》等众多书籍中都记载了野菊花的药用功效。中医认为野菊花味道清香略带苦涩，药性比较平实，具有清除湿热解除毒素、消肿止痛的功效，对于夏季天气湿热带来的热感冒和肝火旺以及因其出现的口疮疾病都有很好地治疗作用，能够去肝火、治头痛流鼻涕、避暑消热的作用。另外野菊花还对夏季蚊虫叮咬后的红肿脓包具有杀菌去肿的作用。夏季可以多多食用野菊花，可以平心静气，尤其是对每天面对电脑的上班族，可以缓解眼部的疲劳、滋养眼睛和保护视力的作用。野菊花不仅可以食用也可以外敷的作用，将野菊花碾碎具有消毒和消除脓包的作用。另外现代医学也积极研究野菊花对现代病症的治疗作用，研究显示野菊花对细菌具有很强的抵抗能力，能够抵抗外界病毒进入体内，具有预防疾病的作用，对人体的心脏、大脑和血管都具有保护作用。另外经常饮用野菊花茶还具有降低和平稳血压的作用，对于高血压具有一定的治疗作用。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种野菊花提取物，其制备方法和液相分析方法，含有该提取物的药物制剂及利用该提取物制备治疗高血压的药物的用途。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种野菊花提取物，该提取物由以下方法制备：

(a)将干燥的野菊花用60％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用8％乙醇冲洗12个柱体积除去大极性成分，再用70％乙醇洗脱10个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩即得。

进一步地，步骤(c)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。

为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的提取物的批间差异，所述提取物的液相分析方法为：

色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：A为乙腈，B为0.4％磷酸溶液；

梯度洗脱程序：0.01～5min，A 10％→15％；5～15min，A 15％→48％；15～25min，A 48％→78％；25～40min，A 78％→10％；

流动相流速：1.0mL·min^-1；

检测波长：260nm；

柱温：30℃；

进样量：10μL。

药物制剂，含有治疗有效量的所述提取物和药学上可接受的载体。

所述的提取物在制备治疗高血压的药物中的应用。

所述的药物制剂在制备治疗高血压的药物中的应用。

本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。

所述药物制剂含有治疗有效量的本发明野菊花提取物，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。

本发明的优点：本发明通过对干燥的野菊花进行提取、除杂、富集处理，能得到具有治疗高血压的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取物的指纹图谱，用于控制不同批次制备的提取物的批间差异。

附图说明

图1为野菊花提取物HPLC液相图谱。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

实施例1：提取物制备

药材来源：野菊花购自安徽亳州中药材市场，产地江苏。

主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购自天津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA；85％磷酸为HPLC级，购于TEDIA；色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。

制备方法：将8kg干燥的野菊花用60％乙醇溶液热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液(2L)；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物212g；(c)正丁醇萃取物用1.5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集活性成分，先用8％乙醇冲洗12个柱体积(18L)除去大极性成分，再用70％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集70％洗脱液，减压浓缩，即得野菊花提取物95g。

实施例2：液相色谱分析

供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加30mL 10％乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加10％乙腈水溶液定容。

分析方法：

高效液相色谱仪：Agilent 1260，二元泵；

色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：A为乙腈，B为0.4％磷酸溶液；

梯度洗脱程序：0.01～5min，A 10％→15％；5～15min，A 15％→48％；15～25min，A 48％→78％；25～40min，A 78％→10％；

流动相流速：1.0mL·min^-1；

检测波长：260nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

用制备的10批次的野菊花提取物进行分析，进行色谱峰匹配，结果1～11号峰在10批样品色谱图中均出现。因此标定11个峰为共有色谱峰，据此建立该提取物的HPLC质量控制图谱，结果见图1。该10批次的野菊花提取物药理活性相似。

实施例3：提取物药理试验

一、实验材料

1、受试物：野菊花提取物，自制，制备方法见实施例1。

2、其他试剂及主要仪器：阳性药采用厄贝沙坦(厄贝沙坦片，法国生产，杭州赛诺菲安万特民生制药有限公司分装。分装批号：1306193，产品批号：1797，生产日期：2013年2月)。美国Kent公司的无创血压仪(CODATM2)。

3、实验动物：采用自发高血压大鼠(SHR)，购自北京维通实验动物有限公司，合格证号：SCXK(京)2013-0009。饲养条件：在有空调的动物室饲养，温度20～25℃，相对湿度40％～60％，每笼5只，定时定量添加饲料，食用大鼠专用饲料，自由饮水，每日更换垫料。

二、实验方法

1、分组：实验动物按基础血压随机分为6组：模型组、阳性药组(厄贝沙坦，15.5mg/kg)，野菊花提取物0.25、0.5、1.0、2.0g/kg组。各组均为SHR大鼠，每组10只。

2、实验方案：动物到达实验室后，预饲养1周，测定基础血压(基础血压需要测定1～2周，确保动物已经适应仪器，测到的血压为真值)。按照基础血压随机分组。分组后，次日开始实验，各给药组按10mL/kg灌胃，连续给予4周。期间每周测定血压1次，保证动物基本在同一个时间测定，避免日间自身血压波动的影响。

3、观察指标：动物血压(包括收缩压、舒张压、平均动脉压)、体重、心率。

三、实验结果

1、野菊花提取物对动物平均动脉压的影响

根据实验结果(表1，注：与同时刻的模型组比较：*：P<0.05；**：P<0.01；***：P<0.001；下同)，在连续给药的4周内，给药1周后，阳性药组和提取物2.0g/kg组大鼠的平均动脉压显著降低，较模型组均有显著降低(P<0.05)，其降低的显著性差异持续4周。提取物1.0g/kg组的平均动脉压有降低的趋势，但仅在给药1周和给药4周两次检测结果和模型组比较具有显著性降低(P<0.05)。野菊花提取物0.25、0.5g/kg组的检测值和模型组相比，均未见显著性差异。

表1野菊花提取物给药4周对各组动物平均动脉压的影响(mmHg)

2、野菊花提取物对动物收缩压的影响

根据实验结果(表2)，在连续灌胃4周内，阳性药组和提取物1.0、2.0g/kg组大鼠的收缩压均有降低，且较模型组有显著性差异(P<0.05)，其中阳性药和提取物2.0g/kg组与模型组间的显著性差异持续4周。野菊花提取物0.25、0.5g/kg组的检测值和模型组相比，均未见显著性差异。

表2野菊花提取物给药4周对各组动物收缩压的影响(mmHg)

3、野菊花提取物对动物舒张压的影响

根据实验结果(表3)，连续灌胃4周，阳性药组和提取物1.0、2.0g/kg组大鼠的舒张压均有降低，和模型组比较均具有显著性差异(P<0.05)，其中阳性药和提取物2.0g/kg组与模型组间的显著性差异持续4周。野菊花提取物0.25、0.5g/kg组的检测值和模型组接近。

表3野菊花提取物给药4周对各组动物舒张压的影响(mmHg)

实施例4：片剂的制备

按实施例1方法制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例5：口服液的制备

按实施例1方法先制得提取物，按常规口服液制法制成口服液。

实施例6：胶囊剂或颗粒剂的制备

按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。

实施例7：注射液的制备

按实施例1方法制得提取物，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例8：无菌粉针的制备

按实施例1方法先制得提取物，溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。