本发明一种具有抗氧化作用的当归多糖和硒化枸杞多糖的组合物，属于抗氧化中兽药研究技术领域。
二、
背景技术：
动物机体在细胞代谢过程中会产生许多活性氧(如过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基等)。这些活性氧会被机体的抗氧化系统(如谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等)主动清除，从而保持动态平衡。但是，当活性氧产生过多、超过机体的清除能力，或机体的抗氧化功能下降时，这些活性氧就会引发氧化损伤，使DNA、蛋白质、脂类和小分子等发生改变，从而诱发多种疾病和衰老。因此，临床急需安全、有效的抗氧化药物。
研究表明，硒是机体必需的微量元素，也是抗氧化酶(谷胱甘肽过氧化物酶)的活性中心，具有抗氧化作用；硒多糖是一种有机硒化合物，具有很强的抗氧化活性，而且比无机硒更安全、有效。但由于天然硒多糖一般存在于植物或微生物中，世界和我国大部分地区均为缺硒地区，天然硒多糖远远不能满足需要。通过化学修饰的方法，将硒与多糖结合形成硒多糖，则可弥补资源不足的问题。
为了研究安全有效的抗氧化药物，我们首先研究了十余种中药多糖的硒化修饰，证明硒化修饰能进一步提高中药多糖的抗氧化活性，分别筛选出各自活性最强的硒化多糖和最佳修饰条件。为节约成本，以多糖和硒化多糖组成多个复方，比较它们的抗氧化活性，通过离体试验筛选出活性较强的3个复方。本发明进一步通过动物在体试验比较3个复方的抗氧化活性，筛选出一个抗氧化活性最强的当归多糖和硒化枸杞多糖复方，可以开发成抗氧化中兽药。
三、
技术实现要素：
技术问题 本发明针对兽医临床缺乏安全、有效的抗氧化药物的问题，提供一种抗氧化作用显著的当归多糖和硒化枸杞多糖的组合物，可以开发成抗氧化中兽药。
技术方案 一种具有抗氧化作用的当归多糖和硒化枸杞多糖的组合物，包括：提取3种多糖，制备2种硒化多糖，组成3个多糖-硒化多糖复方，通过动物在体试验比较它们的抗氧化活性，筛选出活性最强的复方。其特征在于，由当归多糖和硒化枸杞多糖组成的复方，抗氧化作用最强。
有益效果 本发明提供一种具有抗氧化作用的当归多糖和硒化枸杞多糖的组合物，可开发成抗氧化中兽药；在动物生产上推广应用，减少疾病的发生，延缓衰老，保障养殖业的健康发展。
与现有技术相比，本发明优点如下：
1.从畜牧生产方面，兽医临床缺乏安全、有效的抗氧化药物，本发明提供一种具有抗氧化作用的多糖-硒化多糖复方，可开发成抗氧化中兽药，填补国内外的空白。
2.从中兽药研究方面，本发明应用分子修饰技术对中药多糖进行结构改造，进一步提高多糖的生物活性，而且处方精练，成分明确，质量可控，国内外未见报道。
3.与化学性抗氧化剂相比，本发明来源天然于中药，无毒副作用，无药残隐患，保障动物源食品安全。
四、具体实施方式
1.多糖和硒化多糖的制备
当归多糖(CAP)、枸杞多糖(LBP)和白术多糖(AMP)，分别用水煎醇沉法提取，DEAE-纤维素柱层析纯化；硒化枸杞多糖(sLBP)和硒化白术多糖(sAMP)，分别用硝酸-亚硒酸钠法制备，用硫酸-苯酚法测定多糖含量，原子荧光光谱法测定硒含量。
2.多糖-硒化多糖复方的制备
三个多糖-硒化多糖复方的组成分别为当归多糖9份加硒化枸杞多糖1份(CAP-sLBP)、枸杞多糖9份加硒化白术多糖1份(LBP-sAMP)、当归多糖9份加硒化白术多糖1份(CAP-sAMP)。将3个复方分别用蒸馏水溶解稀释成5mg·mL-1、10mg·mL-1两个浓度，煮沸灭菌，备用。
3.抗氧化活性的比较
取14日龄雏鸡270羽随机分为9组，每组30羽，除空白对照组(BC)外均用新城疫IV系苗点眼滴鼻免疫，28日龄二免。在每次免疫的同时，3个复方的高(CAP-sLBPH、LBP-sAMPH、CAP-sAMPH)、低(CAP-sLBPL、LBP-sAMPL、CAP-sAMPL)剂量组每羽分别肌肉注射10mg·mL-1、5mg·mL-1浓度的复方多糖溶液0.5ml，免疫对照组(VC)和BC组注射等量生理盐水，每天1次，连续3d。分别于首免后第7(D7)、14(D14)、21(D21)、28(D28)天，每组随机抽取6只翼静脉采血，分离血清，用试剂盒测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、及丙二醛(MDA)的含量，并计算4个时间点的平均值。统计比较各组的差异。结果如下：
(1)各组血清GSH-Px含量的变化
结果见表1。6个复方组在4个时间点的血清GSH-Px含量均高于或显著高于VC和BC组，GSH-Px的含量越高则抗氧化作用越强，说明3个复方的高、低剂量均能促进GSH-Px的产生，从而增强抗氧化功能。6个复方组在D7、3个复方的高剂量组在D14～D28的血清GSH-Px含量均显著高于VC和BC组(P＜0.05)，说明这些复方在这些时间点均能显著增强抗氧化功能。
四个时间点的平均值以CAP-sLBPH组为最高，其次为LBP-sAMPH和CAP-sAMPH组，这3组均显著高于VC组(P＜0.05)，表明3个复方均有显著的抗氧化活性，CAP-sLBP的活性最强。
表1各组血清GSH-Px含量的变化(U·mL-1)
注：同一列数据标注字母不同者差异显著(P＜0.05)。以下表同。
(2)各组血清SOD含量的变化
结果见表2。6个复方组在4个时间点的血清SOD含量多高于或显著高于VC和BC组，SOD的含量越高则抗氧化作用越强，说明3个复方的高、低剂量均能促进SOD的产生，从而增强抗氧化功能。CAP-sLBPH和CAP-sAMPH组在D7、LBP-sAMPH和CAP-sLBPH组在D14、CAP-sLBPH在D21、6个复方组在D28的血清SOD含量均显著高于VC和BC组(P＜0.05)，说明这些复方在这些时间点能显著提高SOD的含量。
四个时间点的平均值以CAP-sLBPH组为最高，显著高于VC和BC组(P＜0.05)，表明CAP-sLBP的抗氧化活性最强。
表2各组血清SOD含量的变化(U·mL-1)
(3)各组血清CAT含量的变化
结果见表3。6个复方组在4个时间点的血清CAT含量均高于、多显著高于VC和BC组，CAT的含量越高则抗氧化作用越强，说明3个复方的高、低剂量均能促进CAT的产生，从而增强抗氧化功能。LBP-sAMPH、LBP-sAMPL和CAP-sLBPH组在D7、6个复方组在D14～D28的血清CAT含量均显著高于VC和BC组(P＜0.05)，说明这些复方在这些时间点能显著提高CAT的含量。
6个复方组在4个时间点的平均值均显著高于VC和BC组(P＜0.05)，以LBP-sAMPH组为最高，其次为CAP-sLBPH组，两组之间的差异不显著(P＞0.05)表明3个复方在高、低剂量均有显著的抗氧化活性，LBP-sAMP和CAP-sLBP的活性最强。
表3各组血清CAT含量的变化(U·mL-1)
(4)各组血清MDA含量的变化
结果见表4。6个复方组在4个时间点的血清MDA含量均低于、多显著低于VC和BC组，MDA的含量越低则抗氧化作用越强，说明3个复方的高、低剂量均能抑制MDA的产生，从而增强抗氧化功能。6个复方组在D7和D28、除LBP-sAMPH和CAP-sAMPL组外其余4个复方组在D14、除CAP-sLBPL组外其余5个复方组在D21的血清MDA含量均显著低于VC组(P＜0.05)，说明这些复方在这些时间点均能显著降低MDA含量。
6个复方组在4个时间点的平均值均显著低于VC和BC组(P＜0.05)，以CAP-sLBPH组为最低，表明3个复方在高、低剂量均有显著的抗氧化活性，CAP-sLBP的活性最强。
表4各组血清MDA含量的变化(nmol·mL-1)
综合以上结果可见，当归多糖-硒化枸杞多糖的抗氧化活性最强，可以开发成抗氧化中兽药。