一种中草药多糖组合物及其用途的制作方法

本发明涉及保健食品领域，特别涉及一种中草药多糖组合物及其用途。

背景技术：

现有肿瘤治疗存在局限性。肿瘤目前居于死因谱的首位，成为重大的健康威胁，肿瘤的三大常规治疗：手术、放化疗均会造成具有一定的局限性，对患者造成一定的痛苦感受，放化疗对正常的免疫系统也有不同程度的抑制作用。

免疫治疗至关重要。随着肿瘤免疫学的研究进展，人们越来越认识到免疫系统对于肿瘤的监视及清除是至关重要的，免疫治疗被誉为有望攻克癌症的第四类治疗方法。

免疫负调控细胞成为新靶点。以往人们关注的是正向免疫，即免疫细胞对肿瘤细胞的直接杀伤，而现在学术界认为，肿瘤细胞实现免疫逃逸是肿瘤得以发生发展的重要前提，而该重要生物事件发生的原因是肿瘤微环境中存在着一个免疫负调控网络，该网络中的免疫负调控细胞和因子抑制了免疫效应细胞对肿瘤细胞的监视和清除。髓源抑制性细胞(MDSC)、调节性T细胞(Treg)是主要的免疫负调控细胞。

中草药多糖可改善肿瘤微环境。多糖是中草药提取物的主要成分，某些中草药多糖可以调控免疫细胞的激活、增殖和分化，近年的研究表明，中草药多糖对免疫负调控细胞的分化具有调控作用，进而影响其功能，发挥改善肿瘤微环境的作用。但未见相应的中药组合物的相关报道。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明提供一种中草药多糖组合物及其用途。本发明所得的中药组合物、药物或保健食品经科学配伍而成，相得益彰，无毒副作用。既有营养价值，又有恢复机体正常的免疫监视功能，能够对肿瘤起预防和/或辅助治疗作用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种中药组合物，由黄精、枸杞和灵芝组成。

在本发明的一些具体实施方案中，所述中药组合物中所述黄精的有效成分为黄精多糖，所述枸杞的有效成分为枸杞多糖，所述灵芝的有效成分为灵芝多糖。

在本发明的一些具体实施方案中，所述中药组合物中所述黄精多糖、所述枸杞多糖与所述灵芝多糖的质量比为(1～5):(1～5):(1～5)。

在本发明的一些具体实施方案中，所述中药组合物中所述黄精多糖、所述枸杞多糖与所述灵芝多糖的质量比为(2～4):(2～4):(2～4)。

在本发明的一些具体实施方案中，所述中药组合物中所述黄精多糖、所述枸杞多糖与所述灵芝多糖的质量比为2:3:3。

在本发明的一些具体实施方案中，所述中药组合物中所述黄精多糖、枸杞多糖或灵芝多糖由如下方法制得：将黄精、枸杞或灵芝粉碎后，以g/mL计，按照黄精、枸杞或灵芝与水的质量体积比为(0.5g～2.0g)∶5mL的比例加水，在70℃～75℃下加热搅拌提取2-4h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液∶95％乙醇＝1∶(7～10)的体积比将相应的7～10倍体积95％乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4℃过夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得黄精多糖、枸杞多糖或灵芝多糖。

本发明还提供了所述的中药组合物在制备解除MDSC对T细胞增殖的抑制剂和/或下调荷瘤机体Treg细胞比例的制剂中的应用。

本发明还提供了所述中药组合物在制备提高免疫机能的保健食品和/或药物中的用途。

本发明还提供了所述中药组合物在制备预防和/或辅助治疗肿瘤的保健食品和/或药物中的用途。

此外，本发明还提供了一种用于提高机体免疫机能和/或预防和/或辅助治疗肿瘤的药物和/或保健食品，包括所述的中药组合物以及药学上可接受的辅料。

在本方面一个优选的实施方式中，所述药物或保健食品的剂型为胶囊、片剂、颗粒剂、口服液、散剂、袋泡茶。

通过实验令人惊奇的发现，本发明所得的保健食品经科学配伍而成，相得益彰，无毒副作用。既有营养价值，又有恢复机体正常的免疫监视功能，能够对肿瘤起预防和/或辅助治疗作用。实验验证，本发明的保健食品解除MDSC对T细胞增殖的抑制效应；施用后还观察到复合多糖可以下调荷瘤小鼠脾脏中Treg细胞的比例。其意义在于恢复机体正常的免疫监视功能，预防肿瘤细胞发生免疫逃逸，可用于治疗或预防由免疫负调控细胞MDSC和Treg导致的肿瘤及癌前病变；增强化疗药抗肿瘤效果。

本发明目的提供一种具有恢复机体正常的免疫监视功能的保健食品及其制备方法，同时确认和评价黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖组合对恢复机体正常免疫监视是否具有预防和改善作用。本发明制备的保健食品通过恢复机体正常的免疫监视功能实验进行评价和验证，应该指出的是，所列举的实施例不应理解为对本发明的限制。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示复合多糖抑制MSC2增殖；注：***P<0.05；复合多糖组与对照组比较；

图2示复合多糖部分恢复T细胞增殖能力；其中，图2(A)示对照组(脾细胞)，图2(B)示对照组+刀豆蛋白(ConA)，图2(C)示对照组+ConA+MSC2，图2(D)示对照组+ConA+MSC2+GQ，图2(E)示对照组+ConA+MSC2+LZ，图2(F)示对照组+ConA+MSC2+HJ，图2(G)示对照组+ConA+MSC2+HJ+GQ+LZ；

图3示复合多糖下调荷瘤小鼠脾脏中Treg比例；其中，图3(A)示对照组的样品1，图3(B)示对照组的样品2，图3(C)示对照组的样品3，图3(D)示对照组的样品4，图3(E)示对照组的样品5，图3(F)示对照组的样品6，图3(G)示复合多糖组(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)的样品1，图3(H)示复合多糖组(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)的样品2，图3(I)示复合多糖组(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)的样品3，图3(J)示复合多糖组(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)的样品4；

图4示复合多糖增强化疗药抗肿瘤效果；

在本发明的图1～图4中，GQ示枸杞，LZ示灵芝，HJ示黄精。

具体实施方式

本发明公开了一种中草药多糖组合物及其用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供了一种中药组合物，由黄精、枸杞和灵芝组成。

在本发明的一些具体实施方案中，中药组合物中所述黄精的有效成分为黄精多糖，所述枸杞的有效成分为枸杞多糖，所述灵芝的有效成分为灵芝多糖。

在本发明的一些具体实施方案中，中药组合物中所述黄精多糖、所述枸杞多糖与所述灵芝多糖的质量比为(1～5):(1～5):(1～5)。

在本发明的一些具体实施方案中，中药组合物中所述黄精多糖、所述枸杞多糖与所述灵芝多糖的质量比为(2～4):(2～4):(2～4)。

根据本发明第一方面，提供了一种保健食品组合物，所述组合物包含黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖，优选以重量计2:3:3比例混合，任选进一步包括医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。

在本方面一个优选的实施方式中，所述黄精多糖、枸杞多糖或灵芝多糖为天然的或人工合成的。

根据本发明第二方面，提供一种保健食品组合物的制备方法，所述方法包括，混合以重量计2:3:3比例的黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖。

在本发明一个优选的实施方式中，所述黄精多糖、枸杞多糖或灵芝多糖由如下方法制得：取所述黄精、所述枸杞或所述灵芝粉碎，按照黄精、枸杞或灵芝∶水＝0.5g～2.0g∶5mL的比例加水，以g/mL计，在70℃～75℃下加热搅拌提取3h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液∶95％乙醇＝1∶7～10的体积比将相应的7～10倍体积95％乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4℃下过夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得黄精多糖、枸杞多糖或灵芝多糖。

根据本发明第三方面，提供了一种根据第二方面的方法制备的保健食品组合物。

根据本发明第四方面，提供了一种组合物和/或所述的制备方法制得的中药组合物在制备解除MDSC对T细胞增殖的抑制剂和/或下调荷瘤机体Treg细胞比例的制剂中的应用。

本发明还提供了所述的中药组合物和/或所述的制备方法制得的中药组合物在制备提高免疫机能的保健食品和/或药物中的用途。

本发明还提供了所述的中药组合物和/或所述的制备方法制得的中药组合物在制备预防和/或辅助治疗肿瘤的保健食品和/或药物中的用途。

本发明还提供了所述的中药组合物和/或所述制备方法制得的中药组合物在制备恢复机体正常的免疫监视功能的药物中的用途。

所述恢复机体正常的免疫监视功能，包括解除MDSC对T细胞增殖的抑制效应，恢复T细胞增殖的能力；下调荷瘤机体脾脏中Treg细胞比例，改善免疫状态；治疗或预防由免疫负调控细胞MDSC和Treg导致的疾病,所述疾病包括由免疫抑制状态引起的肿瘤及癌前病变；增强化疗药抗肿瘤效果。

本发明还提供了一种用于提高免疫机能和/或预防和/或辅助治疗肿瘤的药物和/或保健食品，包括所述的中药组合物和/或所述制备方法制得的所述的中药组合物以及药学上可接受的辅料。

在本方面一个优选的实施方式中，所述药物或保健食品的剂型为胶囊、片剂、颗粒剂、口服液、散剂、袋泡茶。

通过实验令人惊奇的发现，本发明所得的保健食品经科学配伍而成，相得益彰，无毒副作用。既有营养价值，又有恢复机体正常的免疫监视功能，能够对肿瘤起预防和/或辅助治疗作用。实验验证，本发明的保健食品解除MDSC对T细胞增殖的抑制效应；施用后还观察到复合多糖可以下调荷瘤小鼠脾脏中Treg细胞的比例。其意义在于恢复机体正常的免疫监视功能，预防肿瘤细胞发生免疫逃逸，可用于治疗或预防由免疫负调控细胞MDSC和Treg导致的肿瘤及癌前病变；增强化疗药抗肿瘤效果。

本发明目的提供一种具有恢复机体正常的免疫监视功能的保健食品及其制备方法，同时确认和评价黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖组合对恢复机体正常免疫监视是否具有预防和改善作用。本发明制备的保健食品通过恢复机体正常的免疫监视功能实验进行评价和验证，应该指出的是，所列举的实施例不应理解为对本发明的限制。

本发明提供的中药组合物及其制备方法、用途以及含有该中药组合物的药物、保健食品中所用原料及试剂均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1 黄精多糖的制备

本发明所述黄精多糖通过以下制备方法制备获得：将黄精粉碎后，按照黄精∶水＝0.5g∶5mL的比例加水，在70℃下加热搅拌提取2h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液∶95％乙醇＝1∶7的体积比将7倍体积95％乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4℃下过夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得黄精多糖。

实施例2 枸杞多糖的制备

本发明所述枸杞多糖通过以下制备方法制备获得：将枸杞粉碎后，按照枸杞∶水＝1g∶5mL的比例加水，在75℃下加热搅拌提取3h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液∶95％乙醇＝1∶9的体积比将9倍体积95％乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4℃下过夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得枸杞多糖。

实施例3 灵芝多糖的制备

本发明所述枸杞多糖、灵芝多糖通过以下制备方法制备获得：将灵芝粉碎后，按照灵芝∶水＝2g∶5mL的比例加水，在75℃下加热搅拌提取4h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液∶95％乙醇＝1∶10的体积比将10倍体积95％乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4℃下过夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得灵芝多糖。

实施例4 黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖组合物的制备

将实施例1制得的黄精多糖、实施例2制得枸杞多糖和实施例3制得的灵芝多糖以重量计比例2:3:3混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。

制成包含黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖的保健食品组合物。

实施例5 黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖组合物的制备

将实施例1制得的黄精多糖、实施例2制得枸杞多糖和实施例3制得的灵芝多糖以重量计比例1:5:5混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。

制成包含黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖的保健食品组合物。

实施例6 黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖组合物的制备

将实施例1制得的黄精多糖、实施例2制得枸杞多糖和实施例3制得的灵芝多糖以重量计比例5:1:1混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。

制成包含黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖的保健食品组合物。

实施例7 黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖组合物的制备

将实施例1制得的黄精多糖、实施例2制得枸杞多糖和实施例3制得的灵芝多糖以重量计比例2:4:3混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。

制成包含黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖的保健食品组合物。

实施例8 黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖组合物的制备

将实施例1制得的黄精多糖、实施例2制得枸杞多糖和实施例3制得的灵芝多糖以重量计比例4:2:4混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。

制成包含黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖的保健食品组合物。

实施例9 黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖组合物的制备

将实施例1制得的黄精多糖、实施例2制得枸杞多糖和实施例3制得的灵芝多糖以重量计比例3:3:2混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。

制成包含黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖的保健食品组合物。

实施例10 多糖组合物对预防或辅助治疗肿瘤功能的验证

本发明申请人使用上述实施例1～4所制得的黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖、复合多糖进行了细胞学实验，实验结果如下：

1实验材料

1.1 实验仪器

流式细胞仪：BD公司，Calibo；

分析天平：北京赛多利斯有限公司产品，Sartorius BS124S型；

电子天平：北京赛多利斯有限公司产品，Sartorius BL1500型。

1.2 实验试剂

CFSESigma购自公司。CD4+、CD8+、CD25+流式抗体购自BD公司。

1.3 实验药物

表1 细胞实验原料清单

2 实验方法

2.1 复合多糖对MDSC增殖的效应

MSC2接种于96孔板，细胞密度为1×10⁴/孔。黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖加入培养体系中。单一多糖组的多糖浓度分别为1mg/ml，复合多糖组总浓度为1mg/ml，其中每种多糖浓度比为2：3：3。作用3天后，进行MTT检测。

2.2 小鼠结肠癌皮下移植瘤模型构建及复合多糖体外干预

结肠癌细胞系CT26，皮下接种于Balb/c小鼠，接种剂量为1×10⁶/只，21天后，处死小鼠，取脾脏制备单细胞悬液，按4×10⁶/孔接种于96孔板，实验组为培养体系中加入复合多糖(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)，对照组包括未加入多糖组(正常组)及3种多糖的单用组(单一多糖组)。作用1天后进行流式细胞学检测，检测CD11b+Gr1+细胞在单核细胞中的比例。

2.3 复合多糖与化疗药联用

结肠癌细胞系CT26，皮下接种于Balb/c小鼠，接种剂量为1×10⁶/只。12天后，采用复合多糖(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)灌胃，每天一次。同时，皮下注射5-氟尿嘧啶(5Fu)，剂量为5毫克/公斤/天。复合多糖剂量为500毫克/公斤/天。对照组采用蒸馏水灌胃，每天也皮下注射5Fu，剂量同复合多糖组。每组样本例数为8只。第20天时，记录肿瘤大小(长和宽)，计算肿瘤体积，公式为1/2×长×宽²。

3 实验结果

3.1 复合多糖对MSC2增殖的效应，见图1、表2。

结果显示，复合多糖组MDSC增殖明显少于对照组，也少于单一多糖组。本结果说明复合多糖(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)可以产生协同增效，抑制MDSC，改善机体的免疫状态，可用于制备保健品和食品，可用于肿瘤的预防和辅助治疗。

表2 复合多糖对MDSC增殖的抑制效应

注：*：复合多糖与对照组比较，P＜0.01；#：复合多糖与各单一多糖组比较，P＜0.01。

3.2 复合多糖部分恢复T细胞增殖功能，见图2、表3。

结果显示，复合多糖组T细胞增殖得到部分恢复，出现增殖峰，而单一多糖组未出现增殖峰。本结果说明复合多糖(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)可以部分解除MDSC对T细胞增殖的抑制作用，起到免疫调节作用，可用于制备保健品和食品，可用于肿瘤的预防和辅助治疗。

表3 复合多糖逆转MDSC对T细胞增殖的抑制的效应

注：*：复合多糖与对照组比较，P＜0.01；#：复合多糖与单一多糖组比较，P＜0.01。

3.3 复合多糖下调结肠癌CT26荷瘤小鼠Treg细胞比例，见图3、表4。

结果显示，复合多糖组Treg细胞比例少于对照组。本结果说明复合多糖(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)可以下调荷瘤机体Treg细胞比例，改善机体的免疫状态，可用于制备保健品和食品，可用于肿瘤的预防和辅助治疗。

表4 复合多糖下调CT26荷瘤小鼠脾脏中Treg的比例

注：*：复合多糖与对照组比较，P＜0.01；#：复合多糖与单一多糖组比较，P＜0.05。

3.4 复合多糖协同化疗药抗肿瘤，见图4、表5。

结果显示，第20天时，复合多糖与化疗药联用组，结肠癌肿瘤体积小于单纯化疗组。本结果说明复合多糖(黄精多糖+枸杞多糖+灵芝多糖)可以增强化疗药的抗肿瘤效果，可用于肿瘤化疗的辅助治疗。

表5 复合多糖体内抗结肠癌的效应

注：*：复合多糖与对照组比较，P＜0.01。

综合以上结果，实施例4制备的黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖组合物可以解除MDSC对T细胞增殖的抑制效应；还观察到复合多糖可以下调荷瘤小鼠脾脏中Treg细胞的比例。其意义在于恢复机体正常的免疫监视功能，预防肿瘤细胞发生免疫逃逸，预防肿瘤的发生。由此，表明本发明实施例4制备的黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖组合物具有恢复机体正常的免疫监视功能，而且比单独使用黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖更具优势(p<0.05)。

取实施例5～实施例9制备的黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖组合物进行上述实验，实验结果与实施例4制备的组合物的结果相同或相近，比单独使用黄精多糖、枸杞多糖更具优势，且具有显著差异(P≤0.05)。

根据该黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖组合物具有恢复机体正常的免疫监视功能，将天然的、人工的、以及上述实施例1、2和3的制备方法制成的黄精多糖、枸杞多糖、灵芝多糖，按比例配制(即实施例4制备的组合物，试验发现2:3：3比例配置效果最出人意料)，再加入食用或药用辅料，可制备成胶囊、片剂、颗粒剂、口服液、散剂、袋泡茶等各种保健食品的剂型。

实施例11 不同比例的黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖组合物及其功效

将实施例1制得的黄精多糖、实施例2制得枸杞多糖和实施例3制得的灵芝多糖以表6中不同重量计比例混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。制成包含黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖的保健食品组合物。并按照上述实施例中能够对肿瘤起预防和/或辅助治疗作用的验证方法，得到恢复机体正常免疫监视功能效力的结果分值。(100分制，以实施例4中2:3:3的混合质量比制得组合物相应的恢复机体正常免疫监视功能效力记为100分，其他混合比例相应的功能试验结果相比占实施例4的功能试验结果的百分点，记为相应的功能分值)。

表6 不同比例的黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖组合物及其功效

功能试验结果发现黄精多糖、枸杞多糖和灵芝多糖在(1～5):(1～5):(1～5)的混合比例时相比单独的施用三种多糖具有更显著的恢复机体正常免疫监视功能，对肿瘤起预防和/或辅助治疗作用。当施用多糖混合比例为(2～4):(2～4):(2～4)时，效果更显著。

本发明所述的保健食品经科学配伍而成，相得益彰，无毒副作用；既有营养价值，又有恢复机体正常免疫监视的功能。申请人声明，以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。