一种树鼩脊髓全横断模型的构建方法与流程

本发明属于生物
技术领域：
，具体地说，涉及一种树鼩脊髓全横断模型的构建方法。
背景技术：
：树鼩被认为是灵长类最亲密的近亲，由于树鼩的许多分子和细胞结构近似于人类，因此其在神经系统疾病研究中有应用优势。脊髓损伤(Spinalcordinjury,SCI)是一类中枢神经系统严重的致残性疾病，据报道，其年发生率高达(10.4～83)/100万，目前尚缺乏针对脊髓损伤的有效治疗手段，其中研究的难点和关键在于，如何促进残存神经元的存活，促进神经和轴突再生通过胶质瘢痕区重建脊髓神经环路。理想的脊髓损伤神经再生模型应既能模拟人类脊髓损伤，又能很好研究神经再生，目前大鼠、小鼠是常用的脊髓全横断模型。而树鼩比大鼠、小鼠更加接近人类，可以更好的复制人类脊髓全横断损伤模型。本实验制备树鼩的脊髓全横断模型，建立模型制备技术规范，为人类神经系统疾病研究奠定模型基础。技术实现要素：有鉴于此，本发明针对上述的问题，提供了一种脊髓全横断模型的构建方法，本疾病模型为脊髓外伤的研究提供了一种稳定性好、复制性强、存活率高的研究模型。为了解决上述技术问题，本发明公开了一种树鼩脊髓全横断模型的构建方法，包括以下步骤：1)对树鼩进行分组，将树鼩分成假手术组和脊髓全横断组；2)制备脊髓全横断组；3)制备假手术组；4)术后护理。进一步地，步骤2)中的制备脊髓全横断组具体为：术者带口罩帽子，对所有树鼩采用腹腔注射10ml/kg、3.6％水合氯醛进行麻醉，待树鼩失去意识后使用橡皮筋固定于手术台上，采用俯卧位；使用电动推子将树鼩自肩部至臀部的背部毛发剃净以进行备皮；术者洗手消毒后采用0.5％聚维酮碘进行皮肤消毒三遍，铺无菌洞巾，然后穿无菌手术衣带无菌手套。沿树鼩背部中线以胸10为中心作一纵行切口，切口长4cm，逐层切开皮下组织，分离棘突两侧肌肉，充分暴露胸9-11棘突及椎板；使用咬骨钳咬除胸10棘突及椎板，显露硬脊膜；使用组织剪于胸10处剪断脊髓，2.5倍的手术放大镜下观察脊髓断端无任何纤维组织相连；若术后安静状态下树鼩尾巴小幅度不自主的痉挛性摆动，用手指压迫尾部，树鼩尾巴立即出现痉挛、卷曲、张力增加及抽搐等现象，表明造模成功；使用0.1％聚维酮碘消毒液冲洗伤口，采用丝线逐层缝合肌肉、皮下组织及皮肤，无菌敷贴覆盖伤口。进一步地，步骤3)中制备假手术组具体为：进行手术切开皮肤，肌肉并暴露脊髓，但不损伤脊髓。进一步地，步骤4)中术后护理具体为：手术后每日早、晚挤尿两次，直至树鼩恢复排尿反射。隔日换药直至伤口愈合。与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：1)与假手术组树鼩相比，全横断手术组树鼩脊髓损伤后平衡木实验及运动行为评分显著下降，说明脊髓明显受损，但术后有逐渐好转的趋势。2)脊髓全横断模型为其将来应用于治疗人类脊髓外伤后运动功能障碍研究及药物治疗提供了实验模型基础。当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。附图说明此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：图1是本发明树鼩固定图；图2是本发明实施例1中的树鼩改良横梁实验；图3是本发明实施例1中的树鼩改良Tarlov评分。具体实施方式以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。实施例1脊髓全横断模型的构建方法术者带口罩帽子，对所有树鼩采用腹腔注射质量分数3.6％水合氯醛(10ml/kg)进行麻醉，待树鼩失去意识后使用橡皮筋固定于手术台上，采用俯卧位。使用电动推子将树鼩背部(自肩部至臀部)毛发剃净以进行备皮(如图1所示)。术者洗手消毒后采用0.5％聚维酮碘进行皮肤消毒三遍，铺无菌洞巾，然后穿无菌手术衣带无菌手套。沿树鼩背部中线以胸10为中心作一纵行切口，切口长约4cm，逐层切开皮下组织，分离棘突两侧肌肉，充分暴露胸9-11棘突及椎板。使用咬骨钳咬除胸10棘突及椎板，显露硬脊膜。使用组织剪于胸10处剪断脊髓，手术放大镜(2.5倍)下观察脊髓断端无任何纤维组织相连。若术后安静状态下树鼩尾巴小幅度不自主的痉挛性摆动，用手指压迫尾部，树鼩尾巴立即出现痉挛、卷曲、张力增加及抽搐等现象，表明造模成功。使用质量分数为0.1％聚维酮碘消毒液冲洗伤口，采用丝线逐层缝合肌肉、皮下组织及皮肤，无菌敷贴覆盖伤口。本实验分两个组，分别是假手术组和脊髓全横断组。对于假手术组树鼩(只进行手术切开皮肤，肌肉并暴露脊髓，但不损伤脊髓)是脊髓全横断组的对照；而脊髓全横断组暴露硬脊膜后即使用0.1％聚维酮碘消毒液冲洗伤口，采用丝线逐层缝合肌肉、皮下组织及皮肤，无菌敷贴覆盖伤口。手术后每日挤尿两次(早、晚)，直至树鼩恢复排尿反射。隔日换药直至伤口愈合。下面结合具体的实验过程来说明本发明的技术效果：1、横梁评分结果正常组行为学变化：正常组树鼩放上横梁后直接逃逸，得分为6分，评分结果见(表1)。脊髓全横断后行为学变化：在术后4～6天脊髓全横断组树鼩上肢悬挂于横梁上，给予刺激后移动距离超过横梁中点，评分在1分之间，评分结果见(表1)。脊髓全横断组得分比假手术组明显降低(图2)。表1横梁评分结果假手术脊髓全横断脊髓全横断标准差第二天600第四天60.30.5第四天6002、Tarlov评分结果正常组树鼩步态正常，得分为5分，评分结果见(表2)。脊髓全横断术后第二天脊髓全横断组仅限于髋、膝关节的非反射性运动，评分在1分内，4-6d评分为0分，结果见(表2)。脊髓全横断组得分比假手术组明显降低(图3)。表2Tarlov评分结果假手术脊髓全横断脊髓全横断标准差第二天50.250第四天500第六天5003、动物分组及树鼩存活率各组术后7天内死亡情况如下表3所示，该实验技术方案树鼩存活率较高。适用于实验室研究。表3动物分组及树鼩存活率假手术组脊髓全横断组树鼩数量1010存活树鼩数量109存活率100％90％综上所述，本模型为脊髓外伤的研究提供了一种稳定性好、复制性强、存活率高的研究模型。上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。当前第1页1 2 3