本发明属于酶发酵工程技术和制药
技术领域：
，具体涉及一种具有高抗肿瘤活性的酵素复合物及其制备方法。
背景技术：
：利用中药材或者天然植物制取抗癌药物是现代药学研究中的热点。许多中药材中的成分已经被发现具有良好的抗肿瘤效果。最近，对于蜘蛛香的研究已经从其挥发性成分分析，拓展到了抗癌成分的分析。闫志勇等通过对蜘蛛香进行醇提，分离获得了多种具有抗肿瘤效果的成分。沙棘也具有一定的抗肿瘤作用，《沙棘抗肿瘤及相关免疫研究进展》总结了其产生抗肿瘤效果的原因及其研究进展。传统意义上的中药制药思路多为对药材进行提取（水提或醇提）获得具有某种药用效果的纯化物，或者根据中药配伍原理组成方剂。对于利用现代发酵工程技术从中药中获取药用成分的研究相对较少。传统的中药发酵方法目的是为了改变药材的药性，以更好的进行方剂的配伍，采用的是固体发酵方法。如何利用现代发酵技术使得具有抗肿瘤成分的中药材更大程度的发挥抗肿瘤效果，是本领域中非常有价值的研究方向，也是难题之一。技术实现要素：针对现有技术的缺点，本发明的目的之一在于提供一种一种具有高抗肿瘤活性的酵素复合物的制备方法，该方法包括如下步骤：（1）按重量份计，准备如下原料：2-4份雷公藤、5-8份沉香、4-5份蜘蛛香和1-2份沙棘；（2）将步骤（1）所得物混合，并向混合物加入重量为混合物重量3-4倍的水，加入砂糖，控制糖度为18%，然后按3-6%的接种量，接种保加利亚乳杆菌；（3）设置发酵温度为37-40℃，发酵至体系pH为4.8-5.0时至终，得到所述酵素复合物。虽然蜘蛛香、沙棘、雷公藤和沉香中均有抗癌成分，但其提取方法各异，是否可以用同一种处理方法使其抗癌效果同时发挥出来，是发明人在研究前十分关注的问题。发明人发现，单独利用蜘蛛香进行发酵时，所得发酵产物具有较低的抗肿瘤效果，而利用蜘蛛香和具有抗肿瘤成分的人参混合，进行发酵时，人参的加入并不能提高发酵产物的抗肿瘤效果。加入沉香后，抗肿瘤效果有所提高，但不明显，而同时加入沙棘、雷公藤和沉香后，抗肿瘤效果得到了显著的提升。另外，发明人发现，当利用酵母菌对本发明原料进行发酵时，发酵难以启动。优选的，步骤（1）中，按重量份计，准备如下原料：3份雷公藤、7份沉香、4.5份蜘蛛香和1.5份沙棘。优选的，步骤（2）中，接种量为5%。优选的，步骤（3）中，发酵温度为38-39℃。本发明的另一个目的在于提供由上述制备方法制备得到的具有高抗肿瘤活性的酵素复合物。本发明的有益效果：本发明所得酵素复合物对于肿瘤具有非常明显的抑制效果。具体实施方式下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。实施例1（1）按重量份计，准备如下原料：2份雷公藤、5份沉香、4份蜘蛛香和1份沙棘；（2）将步骤（1）所得物混合，并向混合物加入重量为混合物重量3倍的水，加入砂糖，控制糖度为18%，然后按3%的接种量，接种保加利亚乳杆菌；（3）设置发酵温度为37-38℃，发酵至体系pH为4.8-5.0时至终，得到所述酵素复合物。实施例2（1）按重量份计，准备如下原料：4份雷公藤、8份沉香、5份蜘蛛香和2份沙棘；（2）将步骤（1）所得物混合，并向混合物加入重量为混合物重量3-4倍的水，加入砂糖，控制糖度为18%，然后按6%的接种量，接种保加利亚乳杆菌；（3）设置发酵温度为39-40℃，发酵至体系pH为4.8-5.0时至终，得到所述酵素复合物。实施例3（1）按重量份计，准备如下原料：3份雷公藤、7份沉香、4.5份蜘蛛香和1.5份沙棘；（2）将步骤（1）所得物混合，并向混合物加入重量为混合物重量3.5倍的水，加入砂糖，控制糖度为18%，然后按5%的接种量，接种保加利亚乳杆菌；（3）设置发酵温度为38-39℃，发酵至体系pH为4.8-5.0时至终，得到所述酵素复合物。对比实施例1除原料仅有蜘蛛香之外，其余与实施例3一致。对比实施例2除原料为蜘蛛香和人参按照重量比1:1加入之外，其余与实施例3一致。对比实施例3除原料不含雷公藤和沙棘之外，其余与实施例3一致。对比实施例4除发酵菌为酵母菌之外，其余与实施例3一致。发酵过程无法正常启动。实验例对实施例1-3和对比实施例1-3所得发酵产物进行抗肿瘤活性方面的检测。实验动物：昆明小鼠（35只，雌性）；细胞系：肝癌细胞H22。于小鼠左腋下接种细胞悬液，至肿瘤生长至400mm3后，用对实施例1-3和对比实施例1-3所得发酵产物和生理盐水（对照组）对小鼠进行灌胃处理，每日一次，一次5ml，持续28天，记录肿瘤体积并计算体积增长率。结果如表1所示。表1组别肿瘤体积增长率（%）实施例152实施例256实施例349对比实施例1385对比实施例2364对比实施例3276对照组430由表1可知，本发明所得酵素复合物对于肿瘤具有十分明显的抑制效果。当前第1页1 2 3