本发明涉及灵芝在制药及功能性食品和保健食品领域中的应用，尤其涉及一种桑黄灵芝粉及其制备方法。
背景技术：
：免疫是机体对入侵异物的识别、排除和消灭的过程。机体免疫系统的功能即识别自己排斥异己，具有免疫防御、免疫稳定、免疫监视三大功能。如果机体的免疫防御功能过高就会出现组织的病理性损害（如变态反应），功能不足轻则容易发生感染，重则出现免疫缺陷性疾病（如艾滋病）；如果免疫稳定功能失常，将会发生自身免疫病(如肝脏疾患)；如果免疫监视的功能低下，则易使细胞发生突变导致癌症发生(如肺癌等)。免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别的消灭外来侵入的任何异物（病毒、细菌等），处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。免疫低下的身体易被感染或患癌症，导致机体体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，且生病后很难恢复，长期如此还会诱发重大疾病。祖国传统医学理论认为，许多中药具有提高机体免疫力的作用。破壁灵芝孢子粉主要化学成分为多糖类和三萜类，三萜类成分复杂，具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂、抗氧化和抗衰老等药理作用，灵芝三萜具有抗HIV-1及HIV-1蛋白酶活性、保肝、抗肿瘤和抗艾滋病毒等药理活性。桑黄，是一种真菌，因寄生于桑树而得名。子实体无柄，菌盖扁半球形或马蹄形，木质，浅肝褐色至暗灰色或黑色。在杨、柳、桦、栎等树干上也有生长。据分析，桑黄的成分极其复杂，除含大量多糖类物质外，还含β葡聚糖、几丁质（壳聚糖）、杂多糖（果胶、半纤维素、多糖醛酸等膳食纤维）等成分，在肠道中有促进有害物质及胆固醇排泄的作用。此外，桑黄还具有抗衰老、降低胆固醇、护肝和抗肝硬化等药理作用，而这些药理作用恰恰是备受制药界青睐的。虫草花，虫草真菌，是人工栽培的蛹虫草子实体干品，颜色橙黄至橘红、具有独特的香味。虫草花并非花，是人工培养的虫草子实体，培养基是仿造天然虫草所含的各种养分，包括谷物类、豆类、蛋奶类等，属于一种真菌类。为了跟冬虫草区别开来，聪明的商家起了一个美丽的名字，把它叫做虫草花。虫草花功效作用主治：性平、味甘，具有补肺肾、止咳嗽、益虚损、养精气之功能。猴头菇，又叫猴头菌，只因外形酷似猴头而得名。具有养胃和中的功效，用于胃、十二指肠溃疡及慢性胃炎的治疗。另外，现代医学和药理学的很多研究对猴头菇多糖的药用功效概括为提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂等多种生理功能。现有的桑黄灵芝类桑黄灵芝粉，内容物多为将桑黄和/或灵芝直接粉碎后的桑黄灵芝细粉，又或民间常规煮食，由于其有效成分难以完全溶解被机体吸收利用，生物利用度低、效果不好。同样，未见破壁灵芝孢子粉、桑黄提取物、虫草花提取物以及猴头菇提取物联用于提高机体免疫力的保健品或药物的报道。将几味天然药物配伍使用，能否发挥原有药效或药效发生怎样的改变，对本领域技术人员来说，均是难以预料的。技术实现要素：鉴于上述不足，本发明的目的在于提供一种有效成分含量高，口服后易于吸收利用、具有增强免疫力的桑黄灵芝粉及其制备方法。为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案，本发明各组分的用量也是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在下述重量范围内制备出的桑黄灵芝粉均具有很好的疗效：一种桑黄灵芝粉，其原料由如下重量配比的组分组成：破壁率达98%的灵芝孢子粉8-12份、桑黄提取物4-6份、虫草花提取物4-6份、猴头菇提取物4-6份。进一步的，所述桑黄灵芝粉是由下述原料药按重量份配比制成：破壁率达98%的灵芝孢子粉10份、桑黄提取物5份、虫草花提取物5份、猴头菇提取物5份。上述各原料均为药食同源材料，即可作为药物或保健品使用，亦可作为食品使用。所述的桑黄灵芝粉，是由破壁率达98%的灵芝孢子粉、桑黄提取物、虫草花提取物、猴头菇提取物为活性成分，加上药学上常用的辅料或辅助性成分制备而成的经口给药剂型。所述剂型选自口服液、饮料、颗粒剂、粉剂、丸剂、片剂、茶剂或胶囊剂。一种桑黄灵芝粉的制备方法包括以下步骤：（1）桑黄提取物的制备：取桑黄，粉碎，用饮用水浸泡0.5-1小时，然后加入桑黄重量0.4-1.0%的纤维素酶，用醋酸调节pH值至5.0-6.5，超声辅助酶解15-45min；酶解反应后将料液升温至90-110℃，灭酶1-5分钟，过滤，滤液备用；将所得的滤渣用乙醇溶液提取两次：加热至微沸，回流提取1-2小时；过滤，减压浓缩回收乙醇，得浓缩液；合并上述酶解滤液与浓缩液，然后真空冷冻干燥、粉碎过100目筛，即得桑黄提取物；（2）虫草花提取物的制备：取虫草花，用10倍重量的75-90%的乙醇溶液中浸渍60-90min，在40-45℃的条件下以3000-4000W的功率超声提取30-40min后过滤；滤渣再用10倍重量的60-75%的乙醇溶液超声提取，条件同上，过滤，合并两次滤液备用，滤液浓缩后真空冷冻干燥、粉碎过100目筛，得虫草花提取物；（3）猴头菇提取物的制备：取猴头菇，粉碎，加10倍量75-90%乙醇，100℃回流提取3次，提取时间10-30min，合并提取液；离心，弃残渣，得上清液；聚酰胺树脂吸附：柱高与直径比20，去离子水洗涤0.5h；去离子水和80%乙醇洗脱，流速6ml/min，收集乙醇洗脱液，浓缩后真空冷冻干燥、粉碎过100目筛，得猴头菇提取物；（4）按配方量混合破壁率达98%的灵芝孢子粉、桑黄提取物、虫草花提取物以及猴头菇提取物，加上药学上常用的辅料或辅助性成分制备粉剂即可。上述剂型可制备为粉剂。本发明还提供了上述桑黄灵芝粉在制备增强免疫力的药物中的用途。本发明的有益效果在于：本发明通过独特的提取工艺最大限度的提取出桑黄、虫草花、猴头菇中的有效活性成分，如多糖、萜类等活性成分，最大限度地发挥桑黄、虫草花、猴头菇的药效或保健功效，提高了生物利用度，相应降低了桑黄、虫草花、猴头菇原生药材的用量。本发明的另一重要意义在于，对于某些异常珍贵的中药，将药材通过独特的提取工艺，制成提取物用于制备高含量的剂型，可以使现代剂型有效地模拟中医传统汤药，有利于推动中药现代化发展。研究表明，本发明组合物具有增强免疫力功效，且本发明组合物配伍精当，发挥了协同作用，药效活性明显优于各单味原料。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其他多种形式的修改、替换或变更。具体实施方式下面我们将结合具体实施方式对本发明作进一步的阐述。实施例1桑黄灵芝粉：（1）桑黄提取物的制备：取桑黄，粉碎，用饮用水浸泡1小时，然后加入桑黄重量1.0%的纤维素酶，用醋酸调节pH值至6.0，超声辅助酶解45min；酶解反应后将料液升温至100℃，灭酶5分钟，过滤，滤液备用；将所得的滤渣用乙醇溶液提取两次：加热至微沸，回流提取2小时；过滤，减压浓缩回收乙醇，得浓缩液；合并上述酶解滤液与浓缩液，然后真空冷冻干燥、粉碎过100目筛，即得桑黄提取物；（2）虫草花提取物的制备：取虫草花，用10倍重量的75%的乙醇溶液中浸渍70min，在45℃的条件下以4000W的功率超声提取40min后过滤；滤渣再用10倍重量的75%的乙醇溶液超声提取，条件同上，过滤，合并两次滤液备用，滤液浓缩后真空冷冻干燥、粉碎过100目筛，得虫草花提取物；（3）猴头菇提取物的制备：取猴头菇，粉碎，加10倍量75%乙醇，100℃回流提取3次，提取时间30min，合并提取液；离心，弃残渣，得上清液；聚酰胺树脂吸附：柱高与直径比20，去离子水洗涤0.5h；去离子水和80%乙醇洗脱，流速6ml/min，收集乙醇洗脱液，浓缩后真空冷冻干燥、粉碎过100目筛，得猴头菇提取物；（4）按重量份配比计：取2份破壁率达98%的灵芝孢子粉、1份桑黄提取物、1份虫草花提取物以及1份猴头菇提取物，然后与糊精制成粉剂。每克粉剂中含有破壁率达98%的灵芝孢子粉100mg、桑黄提取物50mg、虫草花提取物50mg以及猴头菇提取物50mg，每天2g，一天一次，温水送服。实施例2桑黄灵芝粉：制备方法同实施例1，只是破壁率达98%的灵芝孢子粉、桑黄提取物、虫草花提取物、猴头菇提取物的用量比为4:3:3:3。实施例3桑黄灵芝粉：制备方法同实施例1，只是破壁率达98%的灵芝孢子粉、桑黄提取物、虫草花提取物、猴头菇提取物的用量比的用量比为3:1:1:1。以下通过具体药效学试验证明本发明具有增强免疫力功效的有益效果。试验例：1.试验材料：药品：桑黄灵芝粉：实施例1所制备的桑黄灵芝粉（每克粉剂中含有破壁灵芝孢子粉100mg、桑黄提取物50mg、虫草花提取物50mg以及猴头菇提取物50mg）。单味破壁率达98%的灵芝孢子粉粉剂：参照实施例1制备方法，每克粉剂相当于含破壁率达98%的灵芝孢子粉250mg。单味桑黄提取物粉剂：参照实施例1制备方法，每克粉剂相当于含桑黄提取物250mg。单味虫草花提取物粉剂：参照实施例1制备方法，每克粉剂相当于含虫草花提取物250mg。单味猴头菇提取物粉剂：参照实施例1制备方法，每克粉剂相当于含猴头菇提取物250mg。动物分组：小鼠210只，随机分为7组；正常对照组（下称对照组）：灌服生理盐水0.5ml/只，连续7d；环磷酰胺模型组（下称模型组）：灌服生理盐水0.5ml/只，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d；灵芝组：灌服单味破壁率达98%的灵芝孢子粉粉剂混悬液40mg/kgBW，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d；桑黄组：灌服单味桑黄提取物粉剂混悬液40mg/kgBW，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d；虫草花组：灌服单味虫草花提取物粉剂混悬液40mg/kgBW，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d；猴头菇组：灌服单味猴头菇提取物粉剂混悬液40mg/kgBW，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d；复方组：灌服桑黄灵芝粉混悬液40mg/kgBW，连续7d，于灌服第3天，腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体重，连续2d。2小鼠免疫器官指数的测定给药结束后称小鼠体重，颈椎脱臼处死小鼠，称其脾脏、胸腺湿重，计算脾指数和胸腺指数:脾指数＝脾重量(mg)/体重(g)胸腺指数＝胸腺重量(mg)/体重(g)3单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的测定各组末次给药后1h，称体重，各鼠均按0.1ml/10g剂量由尾静脉注入印度墨汁(以生理盐水按1：5稀释)，注射后分别在1min(t1)和5min(t2)从小鼠眼眶静脉丛取血20μl，溶于2.0ml浓度0.1％Na2CO3溶液中，摇匀，放置20min后于680nm处测其吸光度值(A)，以浓度0.1％Na2CO3溶液作空白对照，将小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，根据公式计算廓清指数K值和校正廓清指数α值。计算公式:K＝(logA1-logA2)/(t2-t1)α＝K1/3х体重/(肝重+脾重)4小鼠血清溶血素的检测给药第3天，每鼠腹腔注射2％SRBC0.2ml致敏，并继续给药。致敏后第4天于末次给药后90min取小鼠眼球血，静置1h，2000r/min离心10min，取上层血清20μl，用NS稀释500倍，取该血清样1ml作为补体，37℃温浴1h，反应结束，将反应管立即移入冰浴中，以终止反应，以2000r/min离心10min，取1ml上清液盛于含3ml都氏试剂的试管摇匀，放置10min后于540nm测其吸光度值(A)。计算小鼠的半数溶血值(HC50)。样品HC50＝(样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值)х稀释倍数5数据处理利用SPSS13.0进行统计分析，显著性分析采用单因素方差分析和多重比较。6结果及分析表1对小鼠免疫活性影响试验结果组别脾脏指数胸腺指数廓清指数（K）吞噬指数（α）半数溶血值（HC50）对照组5.05±0.383.50±0.570.0232±0.00484.89±0.51102.96±10.38模型组4.12±0.341.85±0.410.0153±0.00514.10±0.4980.07±11.43灵芝组4.56±0.352.81±0.480.0195±0.524.32±0.5099.03±11.25桑黄组4.25±0.412.33±0.510.0171±0.00454.13±0.4882.01±10.98虫草花组4.51±0.442.77±0.490.0189±0.00474.27±0.4998.99±11.58猴头菇组4.23±0.392.01±0.520.0159±0.00504.12±0.5280.56±10.31复方组5.21±0.423.31±0.470.0243±0.00514.91±0.48108.00±12.02注P<0.05；由表1结果可知，正常小鼠腹腔注射环磷酰胺后，可显著降低小鼠脾脏和胸腺的重量,与正常对照组相比差异显著(P<0.05)，说明免疫抑制模型建立成功；猴头菇组各指标与模型组相比差异不大，说明猴头菇组免疫增强作用较弱；灵芝组和虫草花组胸腺指数、廓清指数吞噬指数、半数溶血值显著高于模型组(P<0.05)，但与正常组相比还存在差异，但其免疫增强作用强于桑黄组；相比之下，本发明桑黄灵芝粉（复方组）能明显提高免疫抑制小鼠脾脏指数、胸腺指数、半数溶血值、吞噬指数、廓清指数等指标，与模型组相比差异显著(P<0.05)，小鼠各项指标基本恢复至正常水平，疗效优于灵芝、桑黄、虫草花、猴头菇等单味药粉组，证明本发明桑黄灵芝粉能提高免疫抑制小鼠的免疫活性,可对抗环磷酰胺引起的免疫抑制，疗效优于组方中各单味药组，说明本发明药物组合物，通过四味不同中药的相互配伍，符合中医药理论，发挥了协同增效作用，获得了更为理想的增强免疫力的功效。当前第1页1 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