本发明涉及黄芪注射剂生产技术领域。
背景技术：
黄芪作为药材，目前栽培黄芪的原植物种质主要为豆科草本植物蒙古黄芪和膜荚黄芪，野生黄芪几乎无商品供应。
黄芪注射液化学成分主要有黄芪皂苷类、黄酮类、多糖类等成分，其中皂苷类、黄酮类为黄芪注射液的主要药效成分。黄芪总皂苷具有保护血管内皮，改善血液流变学等作用，在缺血缺氧心肌、病毒感染心肌、阿霉素和异丙肾上腺素损伤心肌方面具有保护作用；黄芪总黄酮在心肌缺血再灌注、急性心肌梗死、病毒性心肌炎及氯化钡引起的心律失常方面具有保护作用。
黄芪注射液为由黄芪药材通过水提醇沉精制而成的一种黄色或淡棕黄色的中药注射液，中药成方制剂第十七册(标准号WS3-B-3335-98)和国家药品监督管理局国家药品标准修订批件(修订编号2001ZFBO171)中均明确了黄芪注射液的制备方法，标准中仅对皂苷类成分中化学性质稳定的黄芪甲苷进行检测，只规定了低限，不得少于0.08mg/ml。
随着研究的不断深入和对黄芪注射液的了解，目前关于黄芪注射液的制备或精制工艺主要有如下专利公开。
对比文件1，中国专利CN105560173A公开了一种黄芪注射液的制备方法。黄芪水提醇沉后对所得醇沉液进行酸沉处理，使醇沉液pH值至1～2，冷藏、过滤，用氢氧化钠溶液调节pH值至7～8，加热煮沸，冷藏放置后过滤，加炭煮沸，脱炭后加注射用水至全量，调节pH值至7.5，过滤，灌封，灭菌即得。上述制备的黄芪注射液，每1ml黄芪甲苷不得少于0.08mg，芒柄花素含量不得少于0.12mg/ml。该方法在部颁标准中药成方制剂第十七册的制法工艺基础上增加了酸沉处理和冷藏，延长了生产周期，且过低的pH值致使后续的调pH值至7.5时用碱量增多，导致产品的炽灼残渣偏多。
对比文件2，中国专利CN102895294A公开了一种制备黄芪注射液的方法，其含有黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷两种有效成分，黄芪甲苷含量在0.08～0.8mg/ml，毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.02～0.4mg/ml，黄芪甲苷占总固体的1％～10％，毛蕊异黄酮葡萄糖苷占总固体0.20％～5％。其制备方法为：黄芪加水煎煮2～3次，煎液合并后浓缩，加醇沉至70～75％，滤过回收乙醇，加水稀释后得水提液，回收药渣。药渣加乙醇回流提取2次，合并提取液，回收乙醇，加水稀释得醇提液；合并水提液和醇提液，加醇使含醇量为83％～87％，冷藏，滤过，回收乙醇至无醇味，加注射用水至每ml相当于5～6g生药，放冷，调节pH值至7.5～8.5，煮沸，加炭煮沸，趁热过滤，加注射用水定容后滤过，调pH值，滤过，灌封，灭菌，即得。该制备方法提取分水提和醇提两部分，每部分均提取2～3次，每次提取时间1.5～2小时，提取工艺复杂，且提取用时较长。且整个工艺除使用乙醇提取外，还有两次不同浓度的醇沉，乙醇消耗量大，生产成本高，设备要求高。
以上方法制得的黄芪注射液，稳定性差，贮存有效期短，不溶性微粒多，易出现可见异物，注射液产品质量不稳定。
另外，对比文件3，中国专利CN99106225.6公开了连续使用三次醇沉进行精制黄芪注射液的方法，其在达到精制效果的同时也损失大量有效成分，且三次醇沉所用乙醇量大，生产成本高；对比文件4，中国专利CN102631402A公开了采用黄芪浸膏经钛棒过滤、微孔超滤后，加入非离子表面活性剂聚山梨酯80和注射用水制备黄芪注射液，其大量使用聚山梨酯80可能引发不良反应，增加用药的不安全因素；对比文件5，中国专利CN101049339A公开了采用冷冻技术精制黄芪注射液的工艺，其生产周期较长，且冷冻技术的应用，对设备的要求高，增加了生产成本；对比文件6，中国专利CN1515295A公开了采用大孔树脂分离提纯制备黄芪注射液，其生产工艺复杂，所得洗脱液中可能含有树脂的降解物和致孔剂类成分，该工艺的后续步骤不能很好的去除该类物质。
由此可见，目前的黄芪注射液精制方法仍存在一定的问题，表现为生产工艺复杂、生产周期较长、生产成本高，制得的黄芪注射液产品质量不稳定、有效成分含量低等。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种高稳定性黄芪注射液的精制方法，不限制黄芪药材基原，去除鞣质、蛋白质等杂质彻底，同时最大限度的保留皂苷类和黄酮类成分，制得黄芪注射液具有较高的稳定性，贮存有效期长,具有生产周期短、操作简便、生产成本低的优点。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种高稳定性黄芪注射液的精制方法，所述方法包括：
将黄芪进行水提醇沉；
将所得醇溶液回收乙醇后再进行水沉处理；
将所得水沉液浓缩后，放冷，过滤，再用碱调节pH至9.0～10.0，优选为9.0～9.5，加热煮沸，经过滤，滤液加注射用水至全量，再用碱调节其pH至7.3～7.5，优选为7.4～7.5，灌封，灭菌后即得高稳定性黄芪注射液。
其中，所述黄芪为Astragalus membranaceus(Fi sch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao和/或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。
具体的，所述碱为质量浓度为20～40％的氢氧化钠溶液，优选为质量浓度为30％的氢氧化钠溶液。
进一步地，所述加热煮沸的时间为30～120分钟，优选为60～90分钟。
进一步地，所述将黄芪进行水提醇沉具体包括：
取黄芪切片，加水煎煮2～4次，每次1～2小时，合并煎液，将煎液浓缩至每1ml相当于生药1～2g，得水提取液；
将水提取液用乙醇沉淀处理2次，第一次醇沉液中乙醇含量为70～75％，第二次醇沉液中乙醇含量为83～87％，每次均冷藏放置，除去固体杂质，得醇溶液。
优选的，加水煎煮3次，每次1.5小时，第一次醇沉液中乙醇含量为75％，第二次醇沉液中乙醇含量为85％。
进一步地，所述水沉处理具体是指将醇溶液回收乙醇后，加注射用水稀释至每1ml相当于生药0.75～1.5g，优选为0.75～1g，冷藏放置，除去固体杂质，得水沉液。
进一步地，所述水沉液先浓缩至每1ml相当于生药4～7g，优选为5～6g，放冷后，再用碱调节其pH。
进一步地，所述放冷是指在2～10℃，冷藏8～12小时，优选为10～12小时。
进一步地，所述加热煮沸后过滤所得滤液中加注射用水前，先用活性炭处理，再向处理完后所得滤液中加入注射用水至全量，滤过，最后用碱调节pH值至7.3～7.5，优选为7.4～7.5，滤过，灌封，灭菌，即得高稳定性黄芪注射液；
所述用活性炭处理具体是指：向滤液中加入其重量的0.1％～0.15％的活性炭，煮沸2～10分钟，趁热过滤。
优选的，向滤液中加入其重量的0.125％的活性炭，煮沸5分钟。
按以上所述精制方法，制得高稳定黄芪注射液。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：
1.本发明方法不受黄芪药材基原的限制，可以是豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪中的任意一种或两种任意比例的搭配。
2.本发明方法水沉液浓缩后，通过调节pH值成碱性，在煮沸环境下，促使皂苷类化学性质不稳定成分转化成趋于稳定的皂苷类成分，有利于消除或减少产品的可见异物，与现有技术相比，本发明方法制得的黄芪注射液产品的稳定性更好，不溶性微粒含量明显降低。
3.本发明方法操作简单，生产周期短，对生产设备的要求相对较低，便于车间工人操作，产品质量稳定，适于工业化的大规模生产，生产成本低。
具体实施方式
本发明提供一种高稳定性黄芪注射液的精制方法，所述方法包括：
将黄芪进行水提醇沉；
将所得醇溶液回收乙醇后再进行水沉处理；
将所得水沉液浓缩后，放冷，过滤，再用碱调节pH至9.0～10.0，加热煮沸，经过滤，向滤液中加注射用水，再用碱调节其pH至7.3～7.5，灌封灭菌后即得高稳定性黄芪注射液。
其中，黄芪为蒙古黄芪和/或膜荚黄芪的干燥根。碱为质量浓度为20～40％的氢氧化钠溶液，优选为质量浓度为30％的氢氧化钠溶液。
本发明所述精制方法的优选实施方式具体为：
取蒙古黄芪和/或膜荚黄芪的干燥根，切片，加水煎煮2～4次，每次1～2小时，合并煎液，过滤，将其浓缩至每1ml相当于生药1～2g，得水提取液；
将水提取液用乙醇沉淀处理2次，第一次醇沉液中乙醇含量为70～75％，第二次醇沉液中乙醇含量为83～87％，每次均冷藏放置，除去固体杂质，得醇溶液；
将所得醇溶液回收乙醇后，加注射用水稀释至每1ml相当于生药0.75～1.5g，冷藏放置，除去固体杂质，得水沉液；
所述水沉液先浓缩至每1ml相当于生药4～7g，2～10℃下冷藏放置8～12小时放冷，过滤，再用氢氧化钠溶液调节pH至9.0～10.0，加热煮沸30～120分钟，过滤去除沉淀，向滤液中加入其重量的0.1％～0.15％的活性炭，煮沸2～10分钟，趁热过滤，再向滤液中加注射用水至全量，再用氢氧化钠溶液调节其pH至7.3～7.5，滤过，灌封，灭菌，即得高稳定性黄芪注射液。
本发明所述精制方法的最佳实施方式具体为：
取蒙古黄芪和/或膜荚黄芪的干燥根，切片，加水煎煮3次，每次1.5小时，合并煎液，过滤，将其浓缩至每1ml相当于生药1～2g，得水提取液；
将水提取液用乙醇沉淀处理2次，第一次醇沉液中乙醇含量为75％，第二次醇沉液中乙醇含量为85％，每次均冷藏放置，除去固体杂质，得醇溶液；
将所得醇溶液回收乙醇后，加注射用水稀释至每1ml相当于生药0.75～1.0g，冷藏放置，除去固体杂质，得水沉液；
所述水沉液先浓缩至每1ml相当于生药5～6g，2～10℃下冷藏放置10～12小时放冷，过滤，再用30％氢氧化钠溶液调节其pH至9.0～9.5，加热煮沸60～90分钟，过滤去除沉淀，向滤液中加入其重量的0.125％的活性炭，煮沸5分钟，趁热过滤，再向滤液中加注射用水至全量，滤过，再用氢氧化钠溶液调节其pH至7.4～7.5，滤过，灌封，灭菌，即得高稳定性黄芪注射液。
一、下面举例对本发明高稳定黄芪注射液精制方法作进一步说明。
实施例1
取豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根，洗净后切段，干燥，称取1000g，加水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并煎液。煎液浓缩后至500ml，用乙醇沉淀处理两次，第一次醇沉液中乙醇含量是75％，第二次醇沉液中乙醇含量是85％，每次均冷藏放置。醇溶液回收乙醇后，加注射用水稀释至1330ml，冷藏放置，除去固体杂质，得水沉液，将所得水沉液浓缩至200ml，将其在2～10℃环境中冷藏10小时，过滤。用20％氢氧化钠溶液调节滤液pH值至9.0，煮沸90分钟，过滤。滤液加0.125％活性炭煮沸4分钟，趁热过滤，加注射用水至全量，滤过，再用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.45，滤过，灌封入10ml安瓿，灭菌，即得高稳定性黄芪注射液。
实施例2
取豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，洗净后切段，干燥，称取1000g，加水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并煎液。煎液浓缩后至500ml，用乙醇沉淀处理两次，第一次是75％，第二次是85％，每次均冷藏放置。醇溶液回收乙醇后，加注射用水稀释至1000ml，冷藏放置，除去固体杂质，得水沉液，将所得水沉液浓缩至160ml，将其在2～10℃环境中冷藏8小时，过滤。用20％氢氧化钠溶液调节pH值至9.5，煮沸60分钟，过滤。滤液加0.125％活性炭煮沸2分钟，趁热过滤，加注射用水至全量，滤过，再用40％氢氧化钠溶液调节pH值至7.44，滤过，灌封入10ml安瓿，灭菌，即得高稳定性黄芪注射液。
实施例3
取豆科植物蒙古黄芪和膜荚黄芪的干燥根，分别洗净后切段，干燥，按1:1比例共称取1000g，加水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并煎液。煎液浓缩后至500ml，用乙醇沉淀处理两次，第一次是75％，第二次是85％，每次均冷藏放置。醇溶液回收乙醇后，加注射用水稀释至每1ml相当于生药660ml，冷藏放置，除去固体杂质，得水沉液，将所得水沉液浓缩至200ml，将其在5～7℃环境中冷藏10小时，过滤。用20％氢氧化钠溶液调节pH值至9.5，煮沸70分钟，过滤。滤液加0.125％活性炭煮沸5分钟，趁热过滤，加注射用水至全量，滤过，再用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.45，滤过，灌封入10ml安瓿，灭菌，即得。
实施例4
取豆科植物蒙古黄芪和膜荚黄芪的干燥根，分别洗净后切段，干燥，按10:1比例共称取1000g，加水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并煎液。煎液浓缩后至500ml，用乙醇沉淀处理两次，第一次是75％，第二次是85％，每次均冷藏放置。醇溶液回收乙醇后，加注射用水稀释至1250ml，冷藏放置，除去固体杂质，得水沉液，将所得水沉液浓缩至180ml，将其在4～7℃环境中冷藏10小时，过滤。用20％氢氧化钠溶液调节pH值至9.5，煮沸70分钟，过滤。滤液加0.125％活性炭煮沸7分钟，趁热过滤，加注射用水至全量，滤过，再用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.46，滤过，灌封入10ml安瓿，灭菌，即得。
实施例5
取豆科植物蒙古黄芪和膜荚黄芪的干燥根，分别洗净后切段，干燥，按1:1比例共称取1000g，加水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并煎液。煎液浓缩后至500ml，用乙醇沉淀处理两次，第一次是75％，第二次是85％，每次均冷藏放置。醇溶液回收乙醇后，加注射用水稀释至1000ml，冷藏放置，除去固体杂质，得水沉液，将所得水沉液浓缩至200ml，将其在6～8℃环境中冷藏12小时，过滤。用20％氢氧化钠溶液调节pH值至9.0，煮沸120分钟，过滤。滤液加0.125％活性炭煮沸5分钟，趁热过滤，加注射用水至全量，滤过，再用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.41，滤过，灌封入10ml安瓿，灭菌，即得。
实施例6
取豆科植物蒙古黄芪的干燥根，洗净后切段，干燥，称取1000g，加水煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并煎液。煎液浓缩后至1000ml，用乙醇沉淀处理两次，第一次是75％，第二次是85％，每次均冷藏放置。醇溶液回收乙醇后，加注射用水稀释至1330ml，冷藏放置，除去固体杂质，得水沉液，将所得水沉液浓缩至200ml，将其在4～6℃环境中冷藏12小时，过滤。用20％氢氧化钠溶液调节pH值至10.0，煮沸30分钟，过滤。滤液加0.125％活性炭煮沸10分钟，趁热过滤，加注射用水至全量，滤过，再用30％氢氧化钠溶液调节pH值至7.41，滤过，灌封入10ml安瓿，灭菌，即得。
二、下面就上述实施例制得高稳定性黄芪注射液与对比例作对比说明。
对比例1
本对比例与实施例1相比，区别仅在于本对比例采用部颁标准制法工艺提取制备黄芪注射液(10ml安瓿)，具体工艺参见中药成方制剂第十七册，此处对该工艺作简略说明：
黄芪加水煎煮三次，合并煎液，滤液浓缩，用乙醇沉淀处理二次，第一次溶液中含乙醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g，用注射用水稀释至每1ml相当于原药材0.75～1g，冷藏放置12小时，滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原药材5～6g，放冷，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.5，煮沸，加入0.125％的活性炭，煮沸5分钟，趁热滤过，加注射用水使成1000ml，滤过，再用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.5，滤过，灌封，灭菌，即得。
对比例2
本对比例与实施例1相比，区别仅在于本对比例采用公布号CN105560173A的中国专利所公开的高稳定性黄芪注射液制备方法的最佳实施方式制备黄芪注射液(10ml安瓿)。此处对其方法作简略说明：
(1)取黄芪2000g，加水煎煮3次，合并煎液，将煎液浓缩至每1ml相当于原药材1～2g；
(2)用乙醇沉淀处理2次，第一次溶液中含乙醇量为75％，第二次为85％，每次均冷藏放置，合并沉液，回收乙醇并浓缩至每1ml相当于原药材10g；
(3)用注射用水稀释至每1ml相当于原药材0.75～1g，冷藏放置12小时，滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原药材5～6g，放冷，得醇沉液；
(4)用20％盐酸溶液调节所述醇沉液pH值至1～2，冷藏、过滤，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.5；
(5)加热煮沸60分钟，在4～8℃下冷藏放置12小时，过滤；
(6)加入0.125％的活性炭，煮沸5分钟，趁热滤过，加注射用水至处方量，滤过，再用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.5，滤过，灌封，灭菌，即得。
对比例3
本对比例与实施例1相比，区别仅在于本对比例采用公布号CN102895294A的中国专利所公开的黄芪注射液制备方法制备黄芪注射液(10ml安瓿)。此处对其方法作简略说明：
1)取黄芪，加水煎煮2-3次，每次加入6-10倍量的水，每次煎煮1.5-2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每1ml相当于原药材1-2g，加入95％乙醇使含乙醇量为70-75％，冷藏放置12-36小时，滤过，回收乙醇并浓缩至无醇味，用注射用水稀释至每1ml相当于原药材2.5-4g，冷藏放置12-36小时，滤过，得水提液，回收药渣；
2)回收的药渣加入黄芪的6-10倍量50％-95％乙醇回流提取2-3次，每次提取时间为1.5-2小时，合并提取液，回收乙醇并浓缩至无醇味，用注射用水稀释至每1ml相当于原药材2.5-4g，冷藏放置12-36小时，滤过，得醇提液；
3)合并水提液和醇提液，加入乙醇使含醇量为83％-87％，冷藏放置12-36小时，滤过，回收乙醇至无醇味，用注射用水稀释至每1ml相当于原药材5-6g，放冷，用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.5-8.5，煮沸，加入药材重量的1-2％的活性炭煮沸，趁热滤过，加注射用水使成1000ml，滤过，再用20％氢氧化钠溶液调节pH值至7.0-8.0，滤过，灌封，灭菌，即得。
本发明实施实例1-5及对比例1-3所制得的黄芪注射液样品，其中黄芪甲苷含量的测定方法参照国家药品标准修订批件2001ZFBO171，毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的测定方法参照黄芪注射液质量标准草案(具体内容如下)，可见异物、不溶性微粒的测定参照中国药典2015版四部相应通则。
黄芪注射液中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法为，照高效液相色谱法(中国药典2015版四部通则0512)测定，具体包括：
a、色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，流速为每分钟1.0ml，检测波长为260nm。柱温为30℃，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算不低于3000。
b、对照溶液的制备
取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加20％乙腈制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
c、供试品溶液的制备
精密吸取本品2ml，置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
d、测定法
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
按照以上测定方法测得不同制备工艺黄芪注射液产品的稳定性加速试验及有效成分含量等的相关数据和说明见下表。
由上表可见，本发明方法制备所得黄芪注射液稳定性明显优于现有技术对比例1-3，且有效成分含量更高，注射液产品质量好。
本发明方法生产周期较短，对生产设备的要求相对较低，操作简便，适用蒙古黄芪和膜荚黄芪两种药材基元，产品质量好且稳定，生产成本低，适于工业化的大规模生产，市场前景好。
以上对本发明进行了详细介绍，本发明中应用具体个例对本发明的实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明，应当指出，对于本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可对本发明进行若干改进，这些改进也落入本发明权利要求的保护范围内。