本发明属于药品领域，涉及一种治疗手足口病的中药组合物及其制备方法。
背景技术：
：手足口病是一种儿童传染病，又名发疹性水疱性口腔炎,多发生于5岁以下儿童。手足口病是由肠道病毒引起的传染病，引发手足口病的肠道病毒多达20多种，其中以肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒最为常见。两种病毒为小RNA病毒科肠道病毒属成员，近年来在中国大陆暴发流行危害日益严重，居丙类传染病之首，感染引起手、足、口、臀部疱疹，少数可引起中枢神经系统感染如无菌性脑膜炎、脑干脑炎、脊髓灰质样麻痹等、心肌炎和呼吸系统疾病神经源性肺水肿、甚至死亡，致残率和致死率很高。目前，对于手足口病的治疗，尚无特异、高效的抗病毒药物。西医主要采用抗病毒药物加对症治疗，主要利巴伟林、阿昔洛韦、更昔洛韦等抗病毒药物来治疗，具有一定的疗效，同时加强护理以及密切观察病情变化，及时发现并发症。中医认为，手足口病属于“温病”范畴，温热邪毒夹湿侵入口鼻肌肤，内转入心脾两脏，再自内向外透发。脾开窍于口而主四肢，心开窍于舌而主血脉，故疹发于口舌与手足之肌肤。治疗上以清热利湿、解毒透疹为法。本发明针对手足口病的发病原因，研究出一种治疗儿小手足口病的中药组合物，目前，尚未见相关报道。(1)铁线草，为铁线蕨科植物扇叶铁线蕨AdiantumflabellulatumL.的干燥全草。收载于《广西中药材标准》1990年版：【性味】微苦、辛，凉。【功能与主治】清热解毒，利湿，消肿。用于泌尿系结石，肝炎，痢疾，感冒发热，泄泻，砂淋。(2)金银花，为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花。收载于中国药典2015年版：【性味与归经】甘，寒。归肺、心、胃经。【功能与主治】清热解毒，疏散风热。用于痈肿疗疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热。技术实现要素：本发明的目的是提供一种治疗小儿手足口病疗效好、见效快的中药组合物及其制备方法。本发明治疗手足口病的中药组合物在中医传统理论的基础上，结合民间用药经验，运用现代科学理论配制而成。具有组方严谨，药少力专，对手足口病有良好的疗效，能有效改善患者的临床症状，缩短病程，提高患者的生活质量。本发明所采用的技术方案如下：一种治疗手足口病的中药组合物，由以下重量份的中药组分组成：铁线草10-50份、金银花5-30份。以上所述的治疗手足口病的中药组合物，优选由以下重量份的中药组分组成：铁线草20-40份、金银花5-20份，最佳优选由以下重量份的中药组分组成：铁线草25份、金银花10份。以上所述治疗手足口病的中药组合物，可制备成药品上允许的任意剂型，如：颗粒剂、片剂、口服液或糖浆剂等，优选制成口服液。以上所述治疗手足口病的中药组合物制成口服液的制备方法，包括以下步骤：(1)分别取铁线草、金银花，净选，干燥；(2)按重量份称取：铁线草10-50份、金银花5-30份；(3)将称量好的中药加6-10倍量水，加热回流提取2-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液；(4)将所得滤液浓缩至相对密度为在60℃时为1.20～1.25的清膏，加入3-5倍量80％乙醇，搅匀，静置24～48小时，滤取上清液；(5)将上清液浓缩至适量，加入防腐剂、矫味剂，煮沸，搅匀，滤过，灭菌，即得。所述防腐剂可为苯甲酸、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、山梨酸钾等中的一种或两种以上的组合，优选为苯甲酸钠。所述矫味剂为蔗糖、单糖浆、山梨醇、甘露醇、甜菊苷、天冬甜精等中的一种或两种以上的组合优选为甜菊苷。以上所述治疗手足口病的中药组合物，在制备治疗手足口病药物中的应用。本发明中铁线草具有清热解毒，利湿，消肿之功；金银花具有清热解毒，疏散风热功效；二者合用，达到清热解毒、散湿化瘀之功，用其治疗小儿手足口病疗效好，见效快，愈后效果好。本发明的有益效果是：1.原料药均取自中药品种，药味简单易得，安全无毒副作用。2.组方严谨，药少力专，具有清热解毒、散湿化瘀等功效，能有效抑制手足口病病毒，能有效改善患者的临床症状，缩短病程，提高患者的生活质量，对小儿手足口病有良好的疗效，总有效率达100％。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明的保护范围和应用范围：一、治疗手足口病的中药组合物口服液的制备实施例1一种治疗手足口病的中药组合物制备成口服液的方法，包括以下步骤：(1)分别取铁线草、金银花，净选，干燥；(2)按重量份称取：铁线草20kg、金银花15kg；(3)将称量好的中药加7倍量水，加热回流提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液；(4)将所得滤液浓缩至相对密度1.22(60℃)的清膏，加入4倍量80％乙醇，搅匀，静置24～48小时，滤取上清液；(5)将上清液浓缩至适量，加入苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、蔗糖，煮沸，搅匀，滤过，灭菌，即得。实施例2一种治疗手足口病的中药组合物制备成口服液的方法，包括以下步骤：(1)分别取铁线草、金银花，净选，干燥；(2)按重量份称取：铁线草50kg、金银花30kg；(3)将称量好的中药加10倍量水，加热回流提取2次，每次3小时，滤过，合并滤液；(4)将所得滤液浓缩至相对密度1.25(60℃)的清膏，加入5倍量80％乙醇，搅匀，静置24～48小时，滤取上清液；(5)将上清液浓缩至适量，加入对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、天冬甜精，煮沸，搅匀，滤过，灭菌，即得。实施例3一种治疗手足口病的中药组合物制备成口服液的方法，包括以下步骤：(1)分别取铁线草、金银花，净选，干燥；(2)按重量份称取：铁线草25kg、金银花10kg；(3)将称量好的中药加8倍量水，加热回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液；(4)将所得滤液浓缩至相对密度1.23(60℃)的清膏，加入4倍量80％乙醇，搅匀，静置24～48小时，滤取上清液；(5)将上清液浓缩至适量，加入苯甲酸钠、甜菊苷，煮沸，搅匀，滤过，灭菌，即得。实施例4一种治疗手足口病的中药组合物制备成口服液的方法，包括以下步骤：(1)分别取铁线草、金银花，净选，干燥；(2)按重量份称取：铁线草40kg、金银花20kg；(3)将称量好的中药加9倍量水，加热回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液；(4)将所得滤液浓缩至相对密度1.24(60℃)的清膏，加入4倍量80％乙醇，搅匀，静置24～48小时，滤取上清液；(5)将上清液浓缩至适量，加入对羟基苯甲酸乙酯、单糖浆、山梨醇，煮沸，搅匀，滤过，灭菌，即得。实施例5一种治疗手足口病的中药组合物制备成口服液的方法，包括以下步骤：(1)分别取铁线草、金银花，净选，干燥；(2)按重量份称取：铁线草10kg、金银花5kg；(3)将称量好的中药加6倍量水，加热回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液；(4)将所得滤液浓缩至相对密度1.20(60℃)的清膏，加入3倍量80％乙醇，搅匀，静置24～48小时，滤取上清液；(5)将上清液浓缩至适量，加入山梨酸钾、单糖浆、甘露醇，煮沸，搅匀，滤过，灭菌，即得。二、体外抗病毒试验采用体外实验CPE(细胞病变)法对上述实施例进行体外抗病毒试验。1、材料宿主细胞：猴胚胎肾细胞(MA104细胞)，购自中国协和医科大学基础所细胞中心；病毒：肠道病毒EV71株，柯萨奇病毒B3株、B4株、B5株，均购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)；细胞培养液：DEME培养液(美国Gibco公司)加10％胎牛血清(美国HyClone公司)；细胞维持液：RPMI-1640细胞维持液(美国GibcoTM公司)；样品：上述实施例1-5，同时以市售利巴韦林颗粒做对照；2、供试品溶液的制备取实施例1-5样品，分别用0.22μm的微孔滤膜滤过，存于西林瓶中，放于-40℃冰箱备用；取利巴伟林颗粒，制备成溶液后，用0.22μm的微孔滤膜滤过，存于西林瓶中，放于-40℃冰箱备用。3.体外抗病毒试验3.1病毒毒力测定MA104细胞接种于96孔板，100μl/，含细胞2×104个/孔，37℃培养24h，细胞长成单层，加入10倍稀释9个浓度的病毒液，每浓度4孔，100μl/孔，37℃，50％CO2温箱培养，每天用显微镜观察细胞病变情况(CPE)。细胞病变(CPE)判断标准：无CPE,记录为(-)；0～25％CPE，记录为(+)；25％～50％CPE，记录为(++)；50％～75％CPE，记录为(+++)；75～100％CPE，记录为(++++)。第7～8天判定结果，用Reed-Muench法计算病毒半数感染剂量(TCID50)。3.2对MA104细胞的毒性试验取各供试品溶液用培养液做1∶2～1∶256倍比稀释后，加到已长成单层的MA104细胞培养板中，100μL/孔，每个稀释度药液做4个复孔，同时设正常细胞对照。将培养板置37℃，5％CO2培养箱中培养，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况(CPE)，确定细胞不出现明显病变的最低稀释倍数(最大无毒浓度)，按Reed-Muench法计算50％细胞毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0)。3.2对MA104细胞的体外抗病毒试验取已长成单层细胞的培养板，倒掉培养液，用细胞维持液冲洗细胞面3遍后，分别加入100TCID50的各肠道病毒液，每种毒株50μL/孔，置37℃，5％CO2培养箱中吸附1h后，再加入相应稀释度的实施例1-5样品100μL/孔，同时设正常细胞对照和病毒对照，并以利巴韦林为阳性对照。置37℃，5％CO2培养箱中培养，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，当病毒对照组细胞病变为++++时记录试验结果。按Reed-Muench计算50％抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI)。TI＝TC50/IC504结果4.1病毒毒力测定结果各肠道病毒在MA104细胞的TCID50测定结果见表1。表1各病毒TCID50测定结果表病毒株TCID50EV7110-3.18CoxB310-4.52CoxB410-7.19CoxB510-6.124.2对MA104细胞的毒性试验结果本发明实施例及利巴韦林对A104细胞的TC0和TC50测定结果见表2。表2对A104细胞的TC0和TC50测定结果表组别TC0(mg/mL)TC50(mg/mL)实施例17.169.78实施例25.428.05实施例36.188.82实施例45.658.26实施例56.459.06利巴韦林11.6216.484.3对MA104细胞的体外抗病毒试验结果本发明实施例1-5以及利巴韦林在体外对肠道病毒EV71株、CoxB3株、CoxB4株、CoxB5株致MA104细胞病变的抑制作用结果见表3。表3体外抗病毒试验结果表结果表明，本发明实施例1-5与利巴韦林在体外对肠道病毒EV71株、CoxB3株、CoxB4株、CoxB5株致A104细胞病变均具有明显的抑制作用，本发明实施例1-5对各肠道病毒的抑制作用比利巴韦林强，说明本发明能有效的抑制手足口病病毒。三、临床应用1、诊断标准以《中医药治疗手足口病临床技术指南(2012年版)》为诊断标准，诊断为手足口病患者。临床表现为：口腔粘膜出现分散状疱疹，米粒大小，疼痛明显；手掌、脚掌或臀部出现米粒大小疱疹，疱疹周围有炎性红晕，疱内液体较少；有些患儿先以发热起病，一般为38℃左右，有些患儿伴随有恶心、呕吐等反应。2、疗效标准根据《中药新药临床研究指导原则》，北京：中国医药科技出版社，作者：郑筱萸；制定疗效标准。临床痊愈：全身症状消失，皮疹愈合，实验室各项生化指标恢复正常；显效：全身症状好转，皮疹未完全愈合，实验室各项生化指标好转；有效：全身症状好转，皮疹未完全愈合，实验室各项生化指标基本无变化；无效：全身症状无好转或加重，实验室各项生化指标明显异常。3、给药方法(1)样品组：服用实施例1-5的产品，每次10ml，每天3次，连续服用6天；(2)对照组：按说明书服用利巴韦林口服液，每次5ml，每天3次，连续服用6天，加强对症治疗，做好口腔护理，合并感染者给予头孢类药物进行抗菌治疗。4、应用结果本发明治疗手足口病的中药组合物，曾用于治疗和观察72例患儿，同时以市售某公司生产的利巴韦林口服液做对照。将上述制备好的5种实施例样品以及对照样品，分别用于手足口病患儿(男40例，女32例，平均年龄2.5岁)。结果详见表4。表4临床应用效果表组别痊愈(％)显效(％)有效(％)无效(％)总有效率(％)实施例133.341.725.00100实施例250.033.316.70100实施例341.733.325.00100实施例450.025.025.00100实施例533.325.025.00100对照组25.033.325.016.783.3结果表明：采用本发明中药组合物，对手足口病的治疗总有效率达到100％，大于利巴韦林对照组，说明本发明中药组合物对手足口病有良好的疗效，能有效改善患者的临床症状，缩短病程，提高患者的生活质量。以下为几个典型病例：病例1：患儿付××，女，1岁，入院时体温38.2℃，手、足、臀部有疱疹，伴有疱疹性咽峡炎，疼痛明显，精神差，嗜睡，伴随恶心、呕吐。服用本发明实施例3，3天后患儿体温恢复正常，疼痛减轻，精神状态好转，恶心、呕吐消失，手、足、臀部的疱疹出现干瘪的迹象，再服用3天后，症状完全消失，痊愈。病例2：患儿谢××，男，5岁，入院时体温38.1℃，手、足、臀部有疱疹，口腔粘膜可见分散状疱疹，吞咽食物疼痛感明显，精神状态差、嗜睡、易惊、头痛，伴随恶心、呕吐。服用本发明实施例2，4天后患儿体温恢复正常，吞咽食品疼痛感减轻，精神状态好转，头痛现象消失，恶心、呕吐消失，手、足、臀部的疱疹部分消退，无新发皮疹，再服用2天后，症状完全消失，患儿康复。病例3：患儿王××，男，1岁，入院时体温38.3℃，手、足、臀部有疱疹，口腔可见粘膜疱疹，精神状态差、嗜睡、睡眠时偶有肢体抖动，伴随呕吐。服用本发明实施例1，4天后患儿体温恢复正常，精神状态好转，呕吐现象消失，手、足、臀部的疱疹出现干瘪的迹象，再服用2天后，症状全部消失，痊愈。病例4：患儿黄××，女，2岁，手、足、臀部有疱疹，口腔可见粘膜疱疹，吞咽食物有疼痛感，精神状态差、嗜睡、伴随恶心、呕吐。服用本发明实施例5，3天后患儿精神状态好转，呕吐现象消失，手、足、臀部的疱疹出现干瘪的迹象，再服用3天后，症状全部消失，痊愈。病例5：患儿林××，男，3岁，入院时体温38.2℃，手、足、臀部有疱疹，口腔粘膜可见分散状疱疹，吞咽食物有疼痛感，精神状态差、嗜睡、肢体偶有抖动、头痛，伴随恶心、呕吐。服用本发明实施例4，4天后患儿体温恢复正常，吞咽食品疼痛感减轻，精神状态好转，头痛现象消失，恶心、呕吐消失，手、足、臀部的疱疹部分消退，无新发皮疹，再服用2天后，症状完全消失，患儿康复。当前第1页1 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