本发明属于海洋生物技术领域，具体涉及一种海洋生物活性组合物及药用制剂。
背景技术：
20世纪60年代以来，人们对巨大的海洋生物资源进行了世界范围的大规模研究，掀起了海洋药物研究开发热潮。其中，抗肿瘤活性物质尤其引人瞩目，已经成为全世界普遍关注的研究热点。学者预言，最有前途的抗癌药物将来自海洋，海洋抗肿瘤活性物质一直是海洋药物研究的重点。
肿瘤(tumour)是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物(neogrowth)，因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物(neoplasm)。根据新生物的细胞特性及对机体的危害性程度，又将肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤两大类，而癌症即为恶性肿瘤的总称。要注意的是，癌症与癌是两个不同的概念，癌指的是上皮性的恶性肿瘤，如由大肠黏膜上皮形成的恶性肿瘤称为大肠黏膜上皮癌，简称大肠癌。由皮肤上皮形成的称皮肤上皮癌，简称皮肤癌等等。若医生说某某人患的是癌症，即表明患者长的是恶性肿瘤；若说某某人患的是胃癌，意思是患者的胃黏膜上皮形成的癌症，若说患者得的是胃肉瘤，则表明这种恶性肿瘤不是由黏膜上皮细胞所形成的，可能由平滑肌细胞恶变引起，或是属于胃的恶性淋巴瘤等。
牡蛎又称蚝、海蛎子等，是一种常见的海洋贝类动物，属软体动物门，瓣鳃纲(Lamellibranchia)，牡蛎科(Ostreidae)，牡蛎属。牡蛎肉质鲜嫩，营养丰富，是一种营养价值极高的食品。现代研究表明，牡蛎肉中含有丰富的糖原、蛋白质、氨基酸、人体必需的微量元素、维生素和较多的具有重要生理活性的不饱和脂肪酸。实践证明，牡蛎提取物可以治疗多种疾病，起到特殊的疗效。当前，国外除了将牡蛎作为海味直接食用外，也开发研制了大量以牡蛎提取物为主要成分的食品、保健品和药品，这些产品不仅具有相当的营养或治疗价值，而且也具有极高的经济和社会效益。目前有关牡蛎提取物的制备方法很多，如US66732公开了一种由牡蛎分泌液制备牡蛎提取物的方法；CN1024074C公开了一种全营养牡蛎精粉的生产方法；CN1067553C公开了一种由新鲜活牡蛎提取有效成分的方法；CN1132646A采用酶解工艺制备牡蛎成分；CN1486634A也公开了一种牡蛎提取物及其制备方法。
海带(Laminaria japonica)在我国产量极其丰富，其药用价值在《本草纲目》、《神农本草经》和《食物本草》等传统医书中都已有记载。现代科学研究证明，海带具有多方面的保健功能，如降血脂、降血糖、抗血栓、抗肿瘤、抗辐射等。海带的多种生物功能大多与海带中的生理活性多糖有关。目前，海带多糖的提取主要是先提取粗多糖，然后再进一步分离纯化，再进行活性检测。这种方法不确定因素较多，而且分离过程中容易导致活性成分丢失，且提取分离的海带多糖不一定具有抗氧化或抗肿瘤活性。中国专利CN201210017025.3提供了一种同时具有抗氧化和抗肿瘤活性的海带多糖及其提取分离方法，经试验证明，所得到的海带多糖具有更好的抗氧化和抗肿瘤活性，为制备抗氧化或抗肿瘤药物提供新的选择。
海马作为中药材使用在我国已具有悠久的历史，梁代陶弘景《本草经集注》中对海马已有记载“其性温味甘，归肝、肾经，具有温肾壮阳，消肿散结、妇人催生等功效，能够医治呼吸系统失调、性功能障碍、失眠、体乏、咽喉肿痛、皮肤病以及难产等疾症”时称“水马”。
近年来，海洋放线菌逐渐成为药物开发的重要源泉，由于其生活在高盐、高压、低温和低营养的特殊环境中，能产生很多结构独特、作用新颖的化合物，具有陆地微生物无法比拟的优势。从海洋放线菌中分离到新活性化合物的数量逐年增多，包括了很多活性很高的细胞毒化合物，其中thiocoraline、salinosporamideA和ECO-4601已经进入临床研究。因此，海洋放线菌作为一种细胞毒化合物的新来源，已经引起广泛的关注。
鲨鱼属于软骨鱼纲(Chondrichthyes)、鲨形总目(Selachomorpha)，约250多种。在自然界中鲨鱼是极少患恶性肿瘤的动物之一，其发病率为百万分之一。美国科学家曾做过这样的研究，将高剂量的强致癌物质黄曲霉素B1注射到鲨鱼体内，不能诱发癌症。
然而，目前未见牡蛎提取物、海带提取物、海藻提取物、海萝提取物、海马酶解提取物、海参提取物、海绵提取物、鲨鱼提取物与海洋放线菌发酵液联合应用的报道。
技术实现要素：
本发明提出一种海洋生物活性组合物，该组合物具有针对性强、疗效好、毒副作用小，抗肿瘤效果好。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种海洋生物活性组合物，由牡蛎提取物10～30份、海带提取物2～6份、海藻提取物4～8份、海萝提取物5～10份、海马酶解提取物10～16份、海参提取物10～16份、海绵提取物4～8份、鲨鱼提取物2～6份与海洋放线菌发酵液15～25份组成。
作为优选，本发明的一些实施例中，海带提取物为褐藻糖胶。
作为优选，本发明的一些实施例中，海洋放线菌为海洋放线菌AFN1007，来自中国专利200810123930.0。
作为优选，本发明的一些实施例中，海藻提取物为海藻多糖，海萝提取物为甲醇提取物，鲨鱼提取物为鲨鱼肝脏与软骨的提取物。
本发明的另一个目的是提供一种海洋生物活性组合物的药用制剂，由上述的组合物与药用载体、添加剂混合制成胶囊、颗粒剂、口服液、丸剂或冲剂。
本发明所述的牡蛎提取物采用已知公开的方法制备，如中国专利(ZL94101124.0)公开的牡蛎提取物及其制剂的制备方法制备：
(1)鲜活牡蛎去壳，水洗去杂；
(2)在1～5Kgf/cm3(公斤)的压力(表压)和40～110℃的温度下用水提取，提取次数为1～3次，优选2次，每次0.5～2小时，所用水为去离子水，牡蛎肉与水的重量比为1:1～3，优选为1:2。
(3)过滤，去除残渣；
(4)在真空中减压浓缩；
(5)在喷雾干燥机中进行喷雾干燥，即得本发明的牡蛎提取物。
海带多糖为海带中的主要成分，至今已发现海带中有3种主要多糖，即褐藻胶(algin)、褐藻糖胶(fucoidan)和海带淀粉(lami naran)。本发明中所述海带提取物至少包含褐藻糖胶。
本发明海马酶解提取物所用方法采用已知公开的方法制备，如中国专利201510067879.6公开一种海马胰蛋白酶酶解液，将质量比为100:5的海马粉末和胰蛋白酶置于烧杯中，并向烧杯中加入pH＝8.0的PBS缓冲溶液获得混合溶液，且海马粉末与PBS缓冲溶液的质量体积比为1:200，将混合溶液在50～60℃的条件下恒温水浴酶解6～8h，然后将混合溶液在100℃的条件下水浴至少10min，之后对混合溶液进行离心处理并取上清液，将上清液经0.45μm的滤膜过滤，滤后的液体即为海马胰蛋白酶酶解液(即是海马酶解提取物)。
海萝(Gloiopeltis furcata)，红藻门内枝藻科海萝属，为一年生红藻。在我国将海萝作为食用和药用及用于纺织工业已有悠久的历史。海萝对人口腔瘤KB细胞和HT229细胞具有选择性抑制活性。
鲨鱼的骨骼系统为缺少血管的软骨，占其体重的6％～8％。鲨鱼软骨是一种酸性粘多糖复合物，含蛋白质、氨基葡聚糖、硫酸软骨素等成分。其抗肿瘤成分主要是多糖和一些活性蛋白因子。鲨鱼肝脏中的抗肿瘤活性物质主要为角鲨烯，角鲨烯是一种抗肿瘤与治疗心血管病的生物活性物质。在体内可由醋酸酯形成，参与胆固醇的生物合成，促进生物氧化及机体的新陈代谢，同时还是萜类和其它甾类化合物的重要前体。
本发明的有益效果：
1、本发明中牡蛎提取物、海带提取物、海藻提取物、海萝提取物、海马酶解提取物、海参提取物、海绵提取物、鲨鱼提取物与海洋放线菌发酵液进行配伍之后，可以显著激活NK细胞的活性。NK细胞可以迅速自动识别和溶解多种肿瘤或被感染细胞。因此，它可有效杀伤癌细胞并阻止肿瘤的转移与扩散，再则，由于NK细胞可自动识别作用于癌细胞，它不需要抗体或事先与细胞作用，也无需依赖主要组织相容性复合体的识别。因而，对人体正常细胞没有任何毒副作用。
2、海带提取物单独进行抗肿瘤实验发现其实其抗肿瘤能力很弱，特别是已经进入癌症中期的细胞更无任何效果。但是，发明人发现将牡蛎提取物、海带提取物、海洋放线菌发酵液与海马酶解提取物按照配合混合后，能够有效抑制癌症中期细胞的生长，肝癌细胞QGY7703的生长抑制率达到了85％。在此基础上面，再与余下组分配合使用，更能够促进将癌症细胞的杀死。
具体实施方式
实施例1
一种海洋生物活性组合物，由牡蛎提取物20份、褐藻糖胶4份、海藻多糖6份、海萝提取物8份、海马酶解提取物12份、海参提取物12份、海绵提取物5份、鲨鱼提取物3份与20份海洋放线菌发酵液AFN1007组成。
实施例2
一种海洋生物活性组合物，由牡蛎提取物10份、褐藻糖胶6份、海藻多糖4份、海萝提取物10份、海马酶解提取物10份、海参提取物16份、海绵提取物8份、鲨鱼提取物2份与海洋放线菌发酵液15份组成。
实施例3
一种海洋生物活性组合物，由牡蛎提取物30份、褐藻糖胶2份、海藻多糖8份、海萝提取物5份、海马酶解提取物16份、海参提取物10份、海绵提取物4份、鲨鱼提取物6份与海洋放线菌发酵液25份组成。
实施例4
本研究依卫生部新药审批的有关规定，对本发明的海洋生物活性组合物进行了对小鼠肺癌模型的抑制作用试验。实验分为实施例1～3、对照组、阳性对照组5组。
1、受试药物：
实施例1～3的海洋生物活性组合物，临用前配置成水混悬液。
2、动物
2.1来源：C57小鼠，由中国医学科学院实验动物繁殖厂提供，合格证号：医动字第01-3004。
2.2体重：18～20克。
2.3性别：雌雄各半。
2.4各组动物数：每组10只。
2.5饲养条件：饲料由中国医学科学院动物繁殖厂提供，动物分笼饲养，每笼5只，雌雄分开。动物室内温度控制在20～26℃，湿度为40～60％。
3、实验方法：
3.1肿瘤模型的建立：从北京药物研究所引进荷瘤(Lewis肺癌)小鼠，取其肿瘤组织，匀浆制成单细胞悬液，计数肿瘤细胞为5×106/ml，每只小鼠右腑下接种0.2ml。
3.2实验分组：实验取移植瘤小鼠随机分组，共分5组，每组10只雌雄各半，分别为对照组(荷瘤对照)、阳性对照组(环磷酰胺腹腔注射)、实施例1～3组。
3.3给药方法：对照组从接种肿瘤第二天起灌胃给予生理盐水0.2ml/10g、阳性对照组一次性腹腔注射环磷酰胺(1ml/kg)、各实验组灌胃给予不同浓度组合物0.2ml/10g，连续给药12天。
3.4抑瘤观察：停止给药第二天，杀小鼠解剖取瘤称重，按下列公式计算抑瘤率：
肿瘤抑制率(％)＝(对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重×100％。
3.5NK细胞活性观察：用乳酸脱氢酶释放法检测各动物NK细胞活性，效应细胞为各组小鼠脾细胞，靶细胞为YAC-细胞，效靶比例为50∶1，每组细胞做三复孔，分别设靶细胞自然释放孔(Ks)，最大释放孔(Km)，实验孔(E)。用酶联免疫检测仪在490nm处，检测各孔光密度值(OD)，按下式计算NK活性：
NK活性(％)＝(E-KS/Km-Ks)*100％。
3.6淋巴细胞转换率观察：用MTT法无菌取各组动物脾脏制成细胞悬液，细胞浓度为1×107/ml，取96孔培养板，每组细胞做六复孔(0.2ml/孔)，其中三孔加ConA(终浓度5mg/ml)，置37℃，5％CO2培养68小时，取出，1000rpm，离心10min，每孔小心取出上清液100μl弃去，每孔加入MTT液(5mg/ml)10μl，继续培养4h后，加入酸性异丙醇，震荡混匀，用酶标仪在570nm处，读取各孔光密度值(OD)，按下式计算淋巴细胞刺激指数(SI)：
SI＝ConA刺激孔OD均值/细胞对照孔OD均值。
4、实验结果见表1
表1海洋生物活性组合物对小鼠Lewis肺癌的抗肿瘤作用
*P<0.05
本实验结果表明本发明药物可显著激活NK细胞活性，提高淋巴细胞转化率，有明显抗肿瘤作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。