一种载VEGF抗体的眼用温敏水凝胶植入剂及其制备方法与流程

本发明涉及一种医药制剂及其制备方法，特别是涉及一种载vegf抗体的眼用温敏水凝胶植入剂及其制备方法。

背景技术：

糖尿病视网膜病（diabeticretinopathy,dr）是糖尿病常见和严重的微血管并发症之一，是成人后天性致盲的主要原因。dr的特点是新生血管形成，视网膜毛细血管内皮细胞增生是新生血管形成的前提。目前治疗此类疾病的方法主要有激光光凝术、光动力疗法、玻璃体切割术等，但这些治疗方法都无法从根本上解决新生血管生成的问题。

近年来，随着“血管内皮生长因子(vegf)是新生血管形成的重要启动因子”这一理论出现并被验证，采用抗vegf单抗药物治疗新生血管性眼病取得了令人惊喜的效果。然而该方法的主要缺陷是单抗药物在眼内滞留时间不可控，其在玻璃体内的半衰期短（约3-5天），药物代谢快，需每4-6周进行1次重复注射，增加了由眼内注射这一有创操作引起的并发症发生机率。

温敏水凝胶，可以随着温度的变化，其体积或状态发生剧烈的变化，比如体积发生十倍以上变化，或体系从液态转变为固态、从固态转变为液态等，从而在靶部位释放出承载的药物。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种载vegf抗体的眼用温敏水凝胶植入剂及其制备方法，本发明使抗vegf单抗药物缓慢释放，且相对无创的方法，将抗vegf单抗药物与凝胶均匀混合后制成一种在体外时呈液态，注射入眼球后迅速转化为半固态的一种凝胶体系，使药物通过注射的方式到达眼后端，达到局部缓慢释放的作用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种载vegf抗体的眼用温敏水凝胶植入剂，所述植入剂用于眼部注射用温敏水凝胶，温敏性水凝胶的相变温度为34℃~35℃；温敏性水凝胶选自温敏性nipaam水凝胶，载vegf抗体；温敏性水凝胶溶液的质量浓度为10%~20%。

一种载vegf抗体的眼用温敏水凝胶植入剂制备方法，所述眼用温敏水凝胶植入剂包括vegf抗体的聚n-异丙基丙烯酰胺（nipaam）水凝胶缓释系统的制备，包括以下过程：

1）聚n-异丙基丙烯酰胺水凝胶的合成

取单体nipaam和交联剂n,n'-亚甲双丙烯酰胺(质量比为99∶1)溶解在4ml去离子水中，混合均匀，通氮气30min，加12mg引发剂过二硫酸铵，再加入20μl加聚剂四甲基乙二胺，25℃聚合6h，即得水凝胶；所得凝胶在室温下用去离子水浸泡3d，每隔一段时间更换去离子水以除去未反应的单体等；将得到的凝胶切成均匀的圆片，在真空干燥箱内60℃干燥至恒重；

2）vegf单抗的聚n-异丙基丙烯酰胺水凝胶缓释系统的制备

称取200mgnipaam水凝胶粉末置于1.5ml平衡盐溶液量筒中，快速搅拌2min，使粉末充分溶解成混合液，将混合液放入60°c水箱中水浴5min后冷却，成胶溶状态时加入vegf单抗33mg，后放入冰水中冰浴5min，得到可注射vegf单抗水凝胶缓释系统，即眼用温敏水凝胶植入剂。

本发明的优点与效果是：

本发明制剂不仅可以准确地定位于病发部位，减少副作用，而且可以减少疾病给病人带来的危害，水凝胶可以用于维持体内的血药浓度，对症状起到一个长时间治疗的作用。

本发明温敏性水凝胶的相变温度为34℃~35℃。这种制剂不仅可以减少注射的次数，减少病人对药物的依赖性，而且可减少血药浓度的波动，使血药浓度长时间稳定于治疗浓度，使其发挥缓释和局部起效的作用，从而提高药物的疗效，增加患者的顺应性。

附图说明

图1为pnipaam凝胶的平衡溶胀比随温度的变化关系图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。

本发明包括，1、聚n-异丙基丙烯酰胺水凝胶的合成；2、vegf抗体的聚n-异丙基丙烯酰胺（nipaam）水凝胶缓释系统的制备：称取200mgnipaam水凝胶粉末置于1.5ml平衡盐溶液（bss）量筒中，快速搅拌2min，使粉末充分溶解成混合液，将混合液放入60°c水箱中水浴5min后冷却，成胶溶状态时加入vegf抗体25mg，后放入冰水中冰浴5min，得到可注射凝胶状的vegf抗体水凝胶缓释系统。

一、vegf单抗的聚n-异丙基丙烯酰胺（nipaam）水凝胶缓释系统的制备

1、聚n-异丙基丙烯酰胺水凝胶的合成

取单体nipaam和交联剂bis(质量比为99∶1)溶解在4ml去离子水中，混合均匀，通n230min，加12mg引发剂aps，再加入20μl加聚剂temed，25℃聚合6h，即得水凝胶。所得凝胶在室温下用去离子水浸泡3d，每隔一段的时间更换去离子水以除去未反应的单体等。将得到的凝胶切成均匀的圆片，在真空干燥箱内60℃干燥至恒重。

2、vegf单抗的聚n-异丙基丙烯酰胺（nipaam）水凝胶缓释系统的制备

称取200mgnipaam水凝胶粉末置于1.5ml平衡盐溶液（bss）量筒中，快速搅拌2min，使粉末充分溶解成混合液，将混合液放入60°c水箱中水浴5min后冷却，成胶溶状态时加入vegf抗体33mg，后放入冰水中冰浴5min，得到可注射凝胶状的vegf抗体的水凝胶缓释系统。

二、平衡溶胀比的测定

准确称取干凝胶，置于某一特定温度下的去离子水中使其充分溶胀，用滤纸吸去凝胶表面的水，称重。

某一温度下的平衡溶胀比(sr)为:sr=ws/wd。

式中:ws为凝胶中水的质量(溶胀凝胶质量－干凝胶质量)，wd为干凝胶质量。

平衡溶胀比随温度的变化关系是评价凝胶温敏性能的重要参数。图1为pnipaam水凝胶在去离子水中平衡溶胀比随温度变化的关系曲线。可见，凝胶的平衡溶胀比随温度的升高呈下降趋势，表明凝胶具有明显的热缩温敏特性。当温度升高到33℃附近时，凝胶的平衡溶胀比急剧下降，表明凝胶发生了显著的体积相变，此温度被认为即是pnipaam凝胶的lcst。这是因为当温度低于lcst时，凝胶中的酰胺链(—conh—)能与水分子形成分子间氢键，导致胶的链伸展开来而溶胀;当温度高于lcst时，凝胶中酰胺链与水分子间的氢键及相邻酰胺链之间的分子内氢键断开，从而把水排出聚合物网络。可见图1pnipaam凝胶的平衡溶胀比随温度的变化关系图。

三、vegf抗体活性的检测

使用elisa试剂盒检测抗体的活性。参照试剂盒中说明书的方法进行。按公式计算载入水凝胶缓释系统后抗体活性的保存率：

抗体活性的保存率（%）=聚n-异丙基丙烯酰胺水凝胶中vegf抗体的od/同浓度vegf抗体水溶液的od×100。

结果如表1显示，与同浓度单抗的活性相比，水凝胶的抗体活性保存率在85%以上。表明，水凝胶较好地保留了vegf抗体的活性。

表1：vegf抗体载入水凝胶植入剂后的活性保存率

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