一种中药组合物及其制备方法和应用与流程

本发明属于中药组合物技术领域，尤其涉及一种中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术：

急性痛风性关节炎是一种代谢紊乱类疾病，其主要症状为患病关节的红、肿、热、痛现象。急性痛风性关节炎在发作的同时，还会诱发高血压、动脉粥样硬化以及肝肾损伤等重大疾病，严重危害着人类的健康。

急性痛风性关节炎的发病机制为，患者体内嘌呤代谢紊乱，从而造成尿酸积聚增多，过量的尿酸以尿酸钠结晶的形式沉积在关节、滑膜及周围组织，造成该部位的炎症反应。因此，可以将抗炎活性以及抑制黄嘌呤氧化酶的活性作为评价药物抗急性痛风性关节炎活性的两个指标。市售的治疗急性痛风性关节炎的药物主要有非甾体类抗炎药、黄嘌呤氧化酶抑制剂、促尿酸排泄药等，然而这些药均存在较大的毒副作用。因此，从高效、低毒、多靶点的中药中筛选出治疗急性痛风性关节炎效果较好的药物并组成组方可以达到较好的治疗目的。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的是为了解决现有的治疗急性痛风性关节炎的药物毒副作用大且效果不显著的问题，而提供一种中药组合物及其制备方法和应用。

本发明首先提供一种中药组合物，由以下重量份的中药原料制成：

黄柏9.5～12重量份；

苍术3～6重量份；

银杏叶4.5～6重量份。

优选的是，所述的中药组合物，由以下重量份的中药原料制成：

黄柏10～11.5重量份；

苍术3.5～5.5重量份；

银杏叶4.5～5.5重量份。

优选的，所述的中药组合物，由以下重量份的中药原料制成：黄柏10重量份、苍术5重量份、银杏叶5重量份。

本发明还提供了一种中药组合物的制备方法，包括：

a)将黄柏加入醇类溶剂中超声提取，得到黄柏提取液；

b)将苍术加入醇类溶剂中超声提取，得到苍术提取液；

c)将银杏叶加入醇类溶剂中超声提取，得到银杏叶提取液；

d)将a)、b)、c)中得到的黄柏提取液、苍术提取液和银杏叶提取物混合，得到中药组合物。

优选的，所述a)、b)、c)中的黄柏、苍术及银杏叶均需粉碎后进行提取。

优选的，所述a)、b)、c)中的醇类溶剂均为65％～75％的乙醇水溶液。

优选的，所述a)、b)、c)中的黄柏、苍术或银杏叶的体积与醇类溶剂的体积比均为1：(8～10)。

优选的，所述a)、b)、c)中，提取温度为25～50℃，提取时间为1～2h。

本发明还提供上述中药组合物在制备治疗急性痛风性关节炎药物中的应用。

本发明的药理作用如下：

黄柏为芸香科植物黄皮树的干燥树皮，其性味苦、寒，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮的功效。其现代药理作用主要为，抗炎、抗菌、抑制黄嘌呤氧化酶、抗痛风等。

苍术为菊科植物北苍术的干燥根茎，其性味辛、苦、温，具有燥湿徤脾，祛风散寒，明目的功效。同时还具有抗菌、抗炎、促排尿、抗痛风等现代药理作用。

银杏叶银杏科植物银杏的干燥叶，其性味干、苦、涩、平，具有活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂的功效。同时还具有抗炎、抑制黄嘌呤氧化酶等现代药理活性。

本发明的有益效果

本发明提供一种中药组合物及其制备方法和应用，该中药组合物由以下重量份的中药原料制成：黄柏9.5～12重量份；苍术3～6重量份；银杏叶4.5～6重量份。本发明将黄柏、苍术与银杏叶进行组方，黄柏与银杏叶具有较好的抗炎及抑制黄嘌呤氧化酶的活性，苍术具有较好的抗炎及促进尿酸排泄的活性。将上述几味中药进行配伍，相互作用，具有抗炎、抑制尿酸生成及促进尿酸排泄的作用，从多个角度达到治疗急性痛风性关节炎的作用，具有较好的效果，且组合物由于采用中药成分，毒副作用小。

附图说明

图1为本发明黄嘌呤氧化反应产物尿酸及内标物质5-氟尿嘧啶的质谱总离子流图。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明首先提供了一种中药组合物，由以下重量份的中药原料制成：

黄柏9.5～12重量份；

苍术3～6重量份；

银杏叶4.5～6重量份。

优选的是，所述的中药组合物由以下重量份的中药原料制成：

黄柏10～11.5重量份；

苍术3.5～5.5重量份；

银杏叶4.5～5.5重量份。

更优选的是，所述的中药组合物由以下重量份的中药原料制成：

黄柏10重量份；

苍术5重量份；

银杏叶5重量份。

本发明还提供了一种中药组合物的制备方法，包括：

a)将黄柏加入醇类溶剂中超声提取，得到黄柏提取液；

b)将苍术加入醇类溶剂中超声提取，得到苍术提取液；

c)将银杏叶加入醇类溶剂中超声提取，得到银杏叶提取液；

d)将a)、b)、c)中得到的黄柏提取液、苍术提取液和银杏叶提取物混合，得到中药组合物。

按照本发明，所述的黄柏、苍术和银杏叶在进行超生提取前，优选先进行粉碎，所述的a)、b)、c)中用醇类溶剂作为提取溶剂，所述的醇类溶剂为本领域技术人员熟知的醇类溶剂即可，并无特殊的限制，本发明中优选为乙醇，更优选为65％～75％的乙醇；所述醇类溶剂的体积与黄柏、苍术或银杏叶体积的比例均优选为(8～10)：1；所述提取温度优选为25～50℃，所述提取时间优选为1～2h。

按照本发明，本发明对原料黄柏、苍术和银杏叶的来源并没有特殊的限制，为市售即可。

本发明还提供了上述中药组合物在制备治疗急性痛风性关节炎药物中的应用。

为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种中药组合物及其制备方法进行详细描述。

以下实施例中所用的试剂均为市售。

实施例1

将10重量份的黄柏粉碎后，加入8倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1小时，得到黄柏提取液；

将3.5重量份的苍术粉碎后，加入8倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1小时，得到苍术提取液；

将5.5重量份的银杏叶粉碎后，加入8倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1小时，得到银杏叶提取液；

将上述黄柏提取液、苍术提取液和银杏叶提取液混合，得到中药组合物。

实施例2

将10重量份的黄柏粉碎后，加入10倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取2小时，得到黄柏提取液；

将5重量份的苍术粉碎后，加入10倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取2小时，得到苍术提取液；

将5重量份的银杏叶粉碎后，加入10倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取2小时，得到银杏叶提取液；

将上述黄柏提取液、苍术提取液和银杏叶提取液混合，得到中药组合物。

实施例3

将11.5重量份的黄柏粉碎后，加入9倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1.5小时，得到黄柏提取液；

将5.5重量份的苍术粉碎后，加入9倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1.5小时，得到苍术提取液；

将4.5重量份的银杏叶粉碎后，加入9倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1.5小时，得到银杏叶提取液；

将上述黄柏提取液、苍术提取液和银杏叶提取液混合，得到中药组合物。

对比例1

将8重量份的黄柏粉碎后，加入8倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1小时，得到黄柏提取液。

将8重量份的苍术粉碎后，加入8倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1小时，得到苍术提取液。

将4重量份的银杏叶粉碎后，加入8倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1小时，得到银杏叶提取液。

将上述黄柏提取液、苍术提取液和银杏叶提取液混合，得到中药组合物。

对比例2

将6.7重量份的黄柏粉碎后，加入10倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取2小时，得到黄柏提取液。

将6.7重量份的苍术粉碎后，加入10倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取2小时，得到苍术提取液。

将6.7重量份的银杏叶粉碎后，加入10倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取2小时，得到银杏叶提取液。

将上述黄柏提取液、苍术提取液和银杏叶提取液混合，得到中药组合物。

对比例3

将5重量份的黄柏粉碎后，加入9倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1.5小时，得到黄柏提取液。

将10重量份的苍术粉碎后，加入9倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1.5小时，得到苍术提取液。

将5重量份的银杏叶粉碎后，加入9倍体积的75％的乙醇，25～50℃，超声提取1.5小时，得到银杏叶提取液。

将上述黄柏提取液、苍术提取液和银杏叶提取液混合，得到中药组合物。

下面通过抗炎实验及体外抑制黄嘌呤氧化酶实验进一步说明本发明的效果：

1抗炎实验

本实验以尿酸钠结晶诱导的huvec损伤为模型结合mtt实验，以药物抑制huvec损伤的抑制率为指标，对药物的抗炎活性进行评价。

1.1实验材料与试剂

黄柏、苍术、银杏叶均购自吉林省长春市吉林大药房。huvec细胞株购买于。dmem(thermo)，青霉素，链霉素，胰蛋白酶，二甲基亚砜(dmso)，3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide(mtt)均购自美国sigma公司；胎牛血清(thermo)。96孔细胞培养板(greiner，德国)；酶标仪(tecan，澳大利亚)；二氧化碳培养箱(mco-175，sanyo)；光学倒置显微镜(xds-1b，重庆光学仪器厂)。

1.2msu溶液的制备方法

称取10mg的msu结晶，高压灭菌1h，加入100μl的dmso，再加dmem定容至10ml,超声30min至溶解，制成1mg/ml的msu储备液，用时以dmem稀释至相应浓度。

1.3huvec的体外培养

huvec经0.25％胰蛋白酶消化，用含10％胎牛血清的dmem培养液中和，3500r/min离心10min后，弃去上清液，加含10％胎牛血清的dmem培养液，移入细胞培养瓶中，放入37℃、5％co2培养箱中培养至对数生长期。

1.4huvec细胞活性检测

用0.25％的胰蛋白酶消化huvec，以8000/孔的密度，100μl接种到96孔板中，培养24h，弃去培养液。每孔加入50μl的msu溶液(空白组以50μl的dmem代替)，每组设置6个平行孔。当生药浓度为0.2mg/ml时，达到黄柏、苍术、银杏叶等中药的安全浓度。因此，每孔加入50μl的实施例1、2、3、4中的药液，使其终浓度为生药浓度0.2mg/ml(空白组及模型组以50μl的dmem代替)。放入培养箱中培养24h，弃去药液，每孔加入100μl的msu溶液，放入培养箱培养4h，弃去孔内溶液，加入150μl的dmso，放入酶标仪中，37℃低速震荡溶解10min，570nm处检测吸光度，进行统计分析。细胞存活率按以下公式得出：

ic％＝(试验孔吸光度均值/空白孔吸光度均值)×100％

1.5实验结果

表1不同配比复方及相同生药浓度的黄柏苍术药对与银杏叶单味药的抗炎活性(mean±sd，n＝6)

从表1中可以看出，三个对比例对尿酸钠引起的huvec细胞损伤的抑制作用较差，即抗炎作用较差，且组成复方的中药间并不存在明显的协同作用。与之相比，实施例1-3的中药组合物均具有较好的抗炎活性，且抑制率明显高于与复方中生药浓度相同的黄柏苍术药对及银杏叶单味药的抑制率的加和，因此可以说以这些比例组成组方后，银杏叶与黄柏苍术药对在抗炎方面产生了协同作用，具有一定的研发价值。

2体外抑制黄嘌呤氧化酶活性实验

黄嘌呤氧化酶氧化黄嘌呤生成尿酸是人体内尿酸产生最重要的途径，本节将加入药物后黄嘌呤氧化酶氧化黄嘌呤所生成尿酸的量，与不加药物时生成尿酸的量进行比较，对药物对黄嘌呤氧化酶的抑制率进行分析检测。

2.1实验材料与试剂

黄柏、苍术、银杏叶购自吉林省长春市吉林大药房。黄嘌呤氧化酶和tris购自美国sigma公司；5-氟尿嘧啶购自中国上海的aladdin公司。乙腈、甲酸均为色谱纯(美国fisher公司)；实验用水为milli-q超纯水。其它未提到的药品和试剂均为北京化学试剂公司产品。

2.2实验仪器与设备

uplc-q-tof/ms为waterssynaptg2四极杆飞行时间质谱仪配备acquityuplc系统(waters，美国)；超高效液相色谱-三级四极杆质谱仪(acquity-xevotq,waterscorp.,milford,ma,usa)；centrifuge5810r超速速冷冻离心机(eppendorf，德国)。

2.3黄嘌呤氧化酶抑制率的测定

终体积为200μl，20mu/ml的黄嘌呤氧化酶，150m的黄嘌呤，50mm的tris-hcl缓冲溶液(ph8.7)，5mg/ml生药浓度的中药提取液(且黄柏苍术与银杏叶的浓度与其占复方中的生药浓度相同)，在37摄氏度反应5min，用四倍量的冰乙腈终止反应，加入终浓度为4μm/l的5-氟尿嘧啶作为内标，过0.22μm滤膜，进行超高效液相色谱-三级四极杆质谱分析。

液相条件：watersacquityuplcbehc18色谱柱(4.6×150mmi.d.,5μm；美国)；流动相a为乙腈，b为含0.1％的甲酸的水溶液；流速：0.3ml/min；柱温：25℃；梯度：0-4min，10％a(90％b)-30％a(70％b)；4-7min，30％a(70％b)-80％a(20％b)；7-9min,80％a(20％b)-100％a(0％b)。

质谱条件：esi离子源，负离子扫描模式，毛细管电压3.0kv；脱溶剂气温度350℃；脱溶剂气流速650l/h；锥孔气流速50l/h；离子源温度120℃。抑制率(％)按下式计算：

i＝(a1-a2)/a1×100％

式中，i为药液对黄嘌呤氧化酶的抑制率；a1为未加药液的反应体系中尿酸相对内标物的峰面积；a2为有药液的反应体系中尿酸相对内标物的峰面积。黄嘌呤氧化反应产物尿酸及内标物质5-氟尿嘧啶的质谱总离子流图如图1所示。

2.4质谱方法优化

表2尿酸和内标物5-氟尿嘧啶的质谱条件

2.5实验结果

表3不同配比复方及相同生药浓度的黄柏苍术药对与银杏叶对黄嘌呤氧化酶的抑制率(mean±sd，n＝6)

从表3中可以看出，各对比例与实施例相比，抑制黄嘌呤氧化酶的活性较差，且组成复方的单位药间并不存在协同作用。而各实施例均对黄嘌呤氧化酶活性具有较好的抑制作用，且复方抑制率明显高于与复方中生药浓度相同的黄柏苍术药对及银杏叶单味药的抑制率的加和，因此可以说以这些比例组成组方后，银杏叶与黄柏苍术药对在抑制黄嘌呤氧化酶活性方面产生了协同作用，具有一定的研发价值。

通过上述实施例，本发明已经完全有效的达到了发明目的。熟悉该项技艺的人士应该明白本发明包括但不限于附图、附表和上述实施例中描述的内容。任何不偏离本发明的功能和原理的修改都将包括在权利要求书的范围中。