本发明涉及药物制剂领域，具体为一种稳定的卡泊芬净冻干组合物及其制备方法。
背景技术：
：卡泊芬净为一种半人工合成的棘白菌素类抗真菌化合物，可作为葡聚糖合成的抑制剂，非竞争性抑制真菌细胞壁的β(1，3)-d-葡聚糖的合成而发挥杀菌作用。2001年，获得fda的批准上市，具有如下结构：卡泊芬净结构中存在多个肽键，同时还含有多个羟基、氨基及酚羟基结构，天然地，其化学稳定性极差，易于因氧化、水解而降解产生杂质，为此，在长期存储过程中，卡泊芬净需要置于-70℃条件下方可维持6月左右相对稳定。为了解决卡泊芬净制剂放置稳定性的问题，现有技术多采用添加额外稳定剂或填充剂的方法。譬如，us2010/0137197公开了一种含卡泊芬净和玻璃化转变温度为90℃以上的非还原性糖的冻干干组合物，其稳定性要明显好于科赛斯(cancidas)，能够在5℃下保存更长的时间，甚至是在室温下进行保存。cn1132624c则公开了一种含有蔗糖、甘露醇的卡泊芬净注射液组合物，cn10216648a公开了含有卡泊芬净、山梨醇和甘露醇的卡泊芬净冻干组合物，cn102614493a公开了一种含有稳定剂如海藻糖或蔗糖的卡泊芬净组合物，以及cn103386117a中的含有糖类保护和氨基酸的卡泊芬净冻干组合物，等等。技术实现要素：本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物含有卡泊芬净或其可药用盐，缓冲盐和叔丁醇/c1-c3醇溶液组成，该药物组合物中水分含量不高于1％(质量百分含量，w/w％)，具体实施方案中，含水量可以小于或等于0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0％或更低。在实施方案中，前述药物组合物中卡泊芬净或其可药用盐的浓度为3mg/ml～200mg/ml，可以为3mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、45mg/ml、50mg/ml、55mg/ml、60mg/ml、65mg/ml、70mg/ml、75mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、120mg/ml、150mg/ml、200mg/ml，进一步地，为了避免药物组合物中卡泊芬净或其可药用盐在放置过程中自然析出现象，卡泊芬净或其可药用盐的浓度为10mg/ml～80mg/ml。进一步地，所述c1-c3醇为本领域技术人员所熟知的，选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或正丁醇中的至少一种，优选为甲醇、乙醇或其组合。本发明所述c1-c3醇为无水溶剂，其含水量不高于0.05％。在一些实施方案中，所述c1-c3醇与叔丁醇的体积比(v/v)为95:5～60:40，保证卡泊芬净或其可药用盐的最大溶解度，其体积比可以为95:5、90:10、85:15、80:20、75:25，70:30、65:35、60:40，进一步地，所述溶剂体积比为90:10～80:20。在一些实施方案中，所述药物组合物含有25mg/ml的卡泊芬净或其可药用盐、2mg/ml缓冲盐和甲醇/乙醇/叔丁醇＝70:20:10的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有40mg/ml的卡泊芬净或其可药用盐、2mg/ml缓冲盐和甲醇/乙醇/叔丁醇＝75:5:20的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有25mg/ml的卡泊芬净或其可药用盐、4mg/ml缓冲盐和甲醇/乙醇/叔丁醇＝60:20:20的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有60mg/ml的卡泊芬净或其可药用盐、6mg/ml缓冲盐和甲醇/乙醇/叔丁醇＝80:10:10的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有100mg/ml的卡泊芬净或其可药用盐、10mg/ml缓冲盐和甲醇/乙醇/叔丁醇＝85:5:10的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有150mg/ml的卡泊芬净或其可药用盐、10mg/ml缓冲盐和甲醇/叔丁醇＝80:20的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有50mg/ml的卡泊芬净或其可药用盐、5mg/ml缓冲盐和乙醇/叔丁醇＝80:20的溶液。进一步地，本发明所述缓冲盐为醋酸钠，药物组合物中醋酸钠的浓度为0.5～20mg/ml，在实施方案中醋酸钠的浓度可以为0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10mg/ml，更进一步为1～10mg/ml。在实施方案中，本发明所述药物组合物ph＝5～7，可以为5.0、5.2、5.4、5.6、5.8、6.0、6.2、6.4、6.6、6.8、7.0。在一些实施方案中，所述药物组合物含有40mg/ml的醋酸卡泊芬净、2mg/ml醋酸钠和甲醇/乙醇/叔丁醇＝75:5:20的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有25mg/ml的醋酸卡泊芬净、4mg/ml醋酸钠和甲醇/乙醇/叔丁醇＝60:20:20的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有60mg/ml的醋酸卡泊芬净、6mg/ml醋酸钠和甲醇/乙醇/叔丁醇＝80:10:10的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有100mg/ml的醋酸卡泊芬净、10mg/ml醋酸钠和甲醇/乙醇/叔丁醇＝85:5:10的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有150mg/ml的醋酸卡泊芬净、10mg/ml醋酸钠和甲醇/叔丁醇＝80:20的溶液。在一些实施方案中，所述药物组合物含有50mg/ml的醋酸卡泊芬净、5mg/ml醋酸钠和乙醇/叔丁醇＝80:20的溶液。进一步地，本发明所述药物组合物中还含有冻干保护剂或冻干支撑剂，譬如，蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、麦芽糖等糖类/多元醇；葡聚糖、白蛋白等聚合物；甘氨酸、肌氨酸、丙氨酸、谷氨酸钠、l-丝氨酸等氨基酸。醋酸卡泊芬净结构中存在多种羟基、氨基和苯酚基团，其对热和潮湿具有高度不稳定性。通过放置稳定性实验，利用lc-mc、nmr等检测手段，大体可以确认杂质3-7为卡泊芬净在高湿或高温条件下降解产物，杂质5和6我们推测为两分子卡泊芬净之间通过氢键形成的二聚体化合物，杂质3、4和7化学结构如下：取前述药物组合物作为供试品，于2～8℃放置72小时(h)，取样测定。所述药物组合物展现优异的稳定性，便于醋酸卡泊芬净于2～8℃放置的长期储存。在一些实施方案中，药物组合物于2～8℃放置72h(相对于3天)，其中杂质3的含量小于0.1％，可以为0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；杂质4的含量小于0.40％，可以为0.40、0.39、0.38、0.37、0.36、0.35、0.34、0.33、0.32、0.31、0.30、0.29、0.25、0.22、0.21、0.18、0.16、0.14、0.12、0.10、0.08、0.06、0.04、0.02或更低；杂质5的含量小于0.2％，可以为0.20、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.10、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02或更低；杂质6的含量小于0.1％，可以为0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；杂质7的含量小于0.1％，可以为0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低。本发明还提供了一种冻干组合物，该冻干组合物由前述药物组合物经冷冻干燥获得。制备冻干组合物步骤包括：a)将卡泊芬净或其可药用盐溶于叔丁醇溶液中，逐渐加入缓冲盐，调节ph＝5～7；b)用0.22um微孔滤膜过滤,以形成冻干前溶液；c)随后将步骤a)所得组合物(或称为冻干前溶液)冷冻干燥。进一步地，所述步骤c)冷冻干燥分为如下三个阶段：i)预冻期：将冻干前溶液保持在-20℃～-10℃至少1h，冻结的样品的冰晶在垂直方向呈现烟囱状，在药品表面没有冻结浓缩层，而且整个药品的结构均一性很好；ii)升华期：开启真空泵，将冷冻溶液缓慢调节温度值-50℃～-40℃的第一冷冻干燥温度，保持温度至少10-50h，期间维持真空为150～200μbar(毫巴)；iii)干燥期：将冷冻干燥温度缓慢调节至-30℃～-10℃，保持温度约5-20h，至冰线消失，保持真空度为150～200μbar(毫巴)，以形成冻干组合物。进一步地，前述所得冻干组合物中含有杂质3的含量小于0.1％，可以为0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；杂质4的含量小于0.40％，可以为0.40、0.39、0.38、0.37、0.36、0.35、0.34、0.33、0.32、0.31、0.30、0.29、0.25、0.22、0.21、0.18、0.16、0.14、0.12、0.10、0.08、0.06、0.04、0.02或更低；杂质5的含量小于0.2％，可以为0.2、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；杂质6的含量小于0.2％，可以为0.2、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；杂质7的含量小于0.1％，可以为0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低。更进一步地，所述冻干组合物中总杂含量小于1.5％，可以为1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1或更小。同时，本发明所述冻干组合物中残留溶剂叔丁醇含量小于0.05％，可以为0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％，完全符合ichq3c残留溶剂指导原则。本发明所述冻干组合物中水分含量不高于1％，可以小于或等于0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0％或更低，冻干组合物中水分含量低有利于放置过程中稳定性，减少降解杂质的产生。取冻干组合物适量，精密称定；于-20℃放置6月后，取样测定考察冻干组合物稳定性情况，结果表明：冻干组合物展现优异的稳定性，便于长期储存。在一些实施方案中，药物组合物于-20℃放置6月，其中杂质3的含量小于0.1％，可以为0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；杂质4的含量小于0.40％，可以为0.40、0.39、0.38、0.37、0.36、0.35、0.34、0.33、0.32、0.31、0.30、0.29、0.25、0.22、0.21、0.18、0.16、0.14、0.12、0.10、0.08、0.06、0.04、0.02或更低；杂质5的含量小于0.3％，可以为0.3、0.28、0.26、0.24、0.22、0.20、0.18、0.16、0.14、0.12、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；杂质6的含量小于0.2％，可以为0.2、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低；杂质7的含量小于0.2％，可以为0.2、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12、0.11、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01％或更低。本文所用的术语“卡泊芬净”意指卡泊芬净游离碱。“卡泊芬净可药用盐”为卡泊芬净与有机酸的酸加成盐，进一步地，卡泊芬净可药用盐为醋酸卡泊芬净，又称为卡泊芬净二乙酸盐。本发明所述醋酸卡泊芬净通过wo2012146099所述方法获得，所用其他试剂均可通过外购方式获得。本发明所用醋酸卡泊芬净原料药质量如下：本发明所述“纯度或有关物质”通过hplc方法测定，其检测方法参照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录vd)：色谱柱waterssymmetry-c18柱；以高氯酸与氯化钠混合溶液/乙腈为流动相，梯度洗脱。本发明水分测定方法：中国药典2010年版二部附录ⅷm第一法a操作方法：注入适量无水甲醇于滴定瓶中，用卡尔费休氏试液滴定至终点。迅速称取约0.1g的供试品，将样品注入滴定瓶，使样品在甲醇中充分溶解后，开始测定，需做平行样。按以下公式计算本品水分：式中：v为供试品消耗费休氏试液的体积，ml；f为每1ml费休氏试液相当于水的质量，mg/ml；w为供试品的质量，mg。本发明残留溶剂检测方法：中国药典2010年版二部附录ⅷp第二法测定。色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定液升温程序：起始柱温为40℃，维持5分钟，以每分钟20℃的速率升温至100℃，维持2分钟，以每分钟80℃的速率升温至180℃，维持2分钟载气：载气为氮气；流速：4.0ml/min；分流比：10:1；进样口温度：160℃按以下公式以外标法计算残留溶剂的量：式中：ai—供试溶液中待测溶剂峰面积mi—供试品称重as—对照溶液中待测溶剂峰面积ms—待测溶剂对照品称重具体实施方式以下将结合实施例更详细地解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。实施例1：制备醋酸卡泊芬净组合物处方制备工艺：1)取2g蔗糖，1.3g甘露醇，2.5g醋酸卡泊芬净(批号；801)加入甲醇/乙醇(70ml/20ml)的混合溶液中，搅拌溶解后；2)加入适量醋酸钠调节溶液ph＝6.1，再加入叔丁醇10ml。实施例2：制备醋酸卡泊芬净组合物处方制备工艺：1)取3.1g蔗糖，2g甘露醇，4.0g醋酸卡泊芬净(批号；801)加入甲醇/乙醇(75ml/5ml)的混合溶液中，搅拌溶解后；2)加入适量醋酸钠调节溶液ph＝5.9，再加入叔丁醇20ml。实施例3：制备醋酸卡泊芬净组合物处方制备工艺：1)取4.7g蔗糖，3.1g甘露醇，6.0g醋酸卡泊芬净(批号；801)加入甲醇/乙醇(80ml/20ml)的混合溶液中，搅拌溶解后；2)加入适量醋酸钠调节溶液ph＝6.5。实施例4：制备醋酸卡泊芬净组合物处方制备工艺：1)取7.8g蔗糖，5.2g甘露醇，10.0g醋酸卡泊芬净(批号；801)加入甲醇/乙醇(55ml/45ml)的混合溶液中，搅拌溶解后；2)加入适量醋酸钠调节溶液ph＝6.2。实施例5：制备醋酸卡泊芬净组合物处方制备工艺：1)取11.6g蔗糖，7.7g甘露醇，15.0g醋酸卡泊芬净(批号；901)加入甲醇(80ml)中，搅拌溶解后；2)加入适量醋酸钠调节溶液ph＝5～7，再加入叔丁醇20ml。实施例6：制备醋酸卡泊芬净组合物处方制备工艺：1)取3.9g蔗糖，2.6g甘露醇，5.0g醋酸卡泊芬净(批号；901)加入乙醇(80ml)中，搅拌溶解后；2)加入适量醋酸钠调节溶液ph＝6.0，再加入叔丁醇20ml。实施例7：制备醋酸卡泊芬净组合物处方醋酸卡泊芬净(按卡泊芬净碱计，下同)50mg/ml醋酸钠10mg/ml制备工艺：1)取5.0g醋酸卡泊芬净(批号；901)加入水(80ml)中，搅拌溶解后；2)加入适量醋酸钠调节溶液ph＝6.0。实施例8：按照cn103315969的对比例3制备组合物处方醋酸卡泊芬净(按卡泊芬净碱计，下同)50mg/ml蔗糖40mg/ml甘露醇26mg/ml制备工艺：取甘露醇0.5g，蔗糖0.75g溶于20ml水中，之后加入1.17g醋酸卡泊芬净(批号；901)，用1m的氢氧化钠、盐酸调节ph6.2。实施例9：按照cn103315969的对比例2制备组合物处方制备工艺：海藻糖1.20g溶于3ml水中，之后加入7.5μl的冰醋酸，用1m的氢氧化钠调至ph5.1，再加入0.223g醋酸卡泊芬净(批号；901)，轻轻搅拌溶解，并用1m的氢氧化钠、盐酸调至ph6.0，加水定容到5ml，0.22μm膜过滤即得。实施例10：2～8℃放置稳定性试验将前述实施例1-9药物组合物作为供试品，于2～8℃放置3天稳定性数据如下：表1于2～8℃放置3天稳定性结论：在叔丁醇/c1-3醇溶液体系中，各个处方在2～8℃条件下都非常稳定，放置3d后卡泊芬净含量没有明显的降低，而含水溶液体系中的处方在2～8℃条件下稳定性差，组合物中水会促使卡泊芬净的降解产生杂质3,4，会影响后续冻干组合物的质量。实施例11：将实施例1-9所得药物组合物制备成冻干组合物制备工艺：i)分别将实施例1-9的药物组合物(冻干前溶剂)保持在-20℃～-10℃至少1h，冻结的样品的冰晶在垂直方向呈现烟囱状，在表面没有形成冻结浓缩层，而且整个药品的结构均一性很好；ii)开启真空泵，将冷冻溶液缓慢调节温度值-50℃～-40℃的第一冷冻干燥温度，保持温度至少10-50h，期间维持真空为150～200μbar(毫巴)；iii)将冷冻干燥温度缓慢调节至-30℃～-10℃，保持温度约5-20h，至冰线消失，保持真空度为150～200μbar(毫巴)，以形成冻干组合物。表2实施例1-9冻干组合物有关物质实施例12：将实施例1-9冻干组合物放置于-20℃、2～8℃考察稳定性，具体稳定性数据如下：表3于-20℃条件放置稳定性数据表4于2-8℃条件放置稳定性数据结论：叔丁醇冻干体系利于各处方在2～8℃条件下比较稳定，放置6月后卡泊芬净含量没有明显的降低，仍然可接受范围内。进一步地，叔丁醇冻干体系中乙醇或甲醇比例较高时，在本发明所述冻干步骤i)中较难固化，在药品表面会出现冻结浓缩层，均一性不好，影响后续冻干步骤，且所得冻干组合物结构不均一，会出现稍许结块，如实施例3或4样品结构不均一、有结块现象，稳定性数值差于比其它样品。实施例13：实施例1-9冻干组合物的复溶时间分别将实施例1-9冻干组合物用0.9％生理盐水勾兑稀释，考察冻干组合物的复溶时间。表5结论：在制备醋酸卡泊芬净冻干组合物过程中，用含有10％以下叔丁醇溶液进行冻干，所得样品中易于出现塌陷或结块现象，直接影响所得冻干组合物复溶时间。在没有冻干保护剂或填充剂情况下，利用水进行冻干所得冻干组合物多呈饼状，其复溶时间较长，且所得冻干组合物中含水量较高，长期稳定性会较差。另外，冻干组合物中含水高时，即便含甘露醇，复溶时间也较长。实施例14：冻干工艺考察将实施例2所述处方进行冻干实验，考察最优冻干参数表6预冻期升华期干燥期实验例1-20℃-50℃，180μbar-30℃，150μbar实验例2-10℃-40℃，200μbar-20℃，150μbar实验例3-40℃-50℃，180μbar-30℃，180μbar实验例4-60℃-50℃，180μbar-20℃，150μbar表7注：通常冻干粉针的疏松状优于结块状，结块状优于皱缩状。结论：冻干过程中压力和温度对冻干组合物的外观和质量有较大的影响，当预冻期稳定过低，冻干前溶剂就会因快速冻干而在药品表面形成冻结浓缩层，且内部结构冰晶尺寸不一，均一性不好，影响冻干组合物的成型效果，冻干粉结构不均一、表面不平整。当前第1页12