一种治疗脂肪肝的药物组合物及制备方法与用途与流程

本发明涉及一种治疗脂肪肝的药物组合物及其制备方法和用途，属中药领域。

背景技术：

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，nafld)是一种与胰岛素抵抗(insulinresistance，ir)和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤，其病理学改变与酒精性肝病(alcoholicfattyliverdisease，ald)相似，但患者无过量饮酒史，疾病谱包括非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholicfattyliver，nafl)、非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis，nash)及其相关肝硬化和肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，hcc)。随着生活水平的提高，生活方式及饮食结构的改变，nafld发病率不断提升，已经逐渐成为全球重要公共健康问题之一。

调查数据显示，在西方国家nafld是慢性肝病最常见病因，总体流行率在25％左右，在肥胖人群和2型糖尿病患者中比例则增加至70％。在我国的流行病学调查也不乐观，nafld发病率高达20.7％，近年来其患病率、发病率是在人群当中不断增高，且发病年龄也出现低龄化趋势。目前，在中国肥胖和代谢综合征的流行，nafld已经取代了慢性乙型肝炎成为第一大慢性肝脏疾病。就nafld的危害来讲，其与酒精性肝病、病毒性肝病相似，可以通过肝脏炎症，进而发生肝硬化、肝癌，甚至肝功能衰竭。但相对来说，nafld发生肝硬化、肝细胞癌的几率相对较低；此外，从脂肪性肝炎到肝硬化、肝癌这样一个过程来讲，nafld比病毒性肝炎所需要的时间长。但是在欧美发达国家，特别是在美国来讲，nafld引起的肝脏移植排位已经排在第二，仅次于慢性丙型肝炎；而在hcc病因当中，nafld增长率迅速上升，目前似乎已经取代了酒精性肝病，成为第二大原因。因此针对nafld的发病机制和药物治疗的研究具有非常重要的意义。

目前针对nafld治疗尚无特异性的手段和药物。治疗主要包括基础治疗和药物治疗。基础治疗是改善生活方式，如控制饮食，加强运动锻炼从而降低体重。药物治疗包括有五大类：(1)改善胰岛素抵抗药物：常用药物为胰岛素增敏剂，包括以二甲双胍为代表的双胍类药物及以罗格列酮、吡格列酮为代表的噻唑烷二酮类；(2)降脂药：以贝特类和他汀类为代表，他汀类主要用于降tc和ldl-c，贝特类主要用于以tg升高为主的高脂血症；(3)保肝抗炎药：甘草类制剂通过其类固醇作用发挥其强大保肝抗炎作用，多烯磷脂酰胆碱胶囊通过特异性地与肝细胞膜结合，稳定、保护、修复肝细胞膜，促进肝细胞再生，如熊去氧胆酸，通过阻止细胞凋亡和抑制炎性反应起作用；(4)抗氧化剂：如维生素e，通过抑制脂质过氧化和自由基的抗氧化剂水平降低，达到延缓nafld进展到nash的进程；(5)微生态制剂：肠道细菌过度生长可产生内源性酒精、释放内毒素、刺激炎症细胞因子产生参与nafld的损伤。但是这些药物都有一定的副作用：如噻唑烷二酮类及降脂药物有一定的肝损伤作用，且降脂药物停药可反弹，并且不能有效改善肝内脂质沉积；双胍类有引起乳酸性酸中毒的风险等。所以目前尚没有一种药物获批用于nafld的治疗。

单纯依靠保肝抗炎药物、降脂药、改善胰岛素抵抗药物治疗nafld的效果并不理想，且疗效单一，存在不同的毒性和不良反应。与西医相较，中医药具有多途径、多角度、多层次、多靶点综合药理作用的特点，中药治疗nafld有明显的优势，主要在于中药便于指定个体化治疗方案，比单纯的降脂、保肝治疗方案更加有效。可用于治疗nafld的中药复方或者单位中药种类多，安全程度高，且在防治nafld方面疗效稳定持久，毒副作用小，价格低廉。

目前治疗脂肪肝的中药报道较多，如：钟燕春，中医药治疗脂肪肝进展，辽宁中医药大学学报，2008年2月第10卷第2期，根据中医对脂肪肝的病因病机、辩证分型治疗，公开了多种不同的处方，目前中医药治疗本病还存在许多问题，如中医诊断、辨证分型、判断标准及疗效判定标准不统一，客观指标不明确，远期疗效观察少，缺乏大样本、多中心的严格随机对照研究，在治疗机制和药理作用环节方面研究很少，需要不断完善并确定统一脂肪肝治疗的辨证分型、诊断标准及疗效判定标准以及量化客观指标，对中医药作用机理进行广泛而科学的研究，为临床治疗本病提供可靠有效的证据。专利申请号：cn201310305337.9，发明名称：一种治疗脂肪肝的中药组合物及其制备方法，该发明公开了一种治疗脂肪肝的中药组合物及其制备方法，由如下原料药按一定的重量配比制成：麦芽、茯苓、白术、何首乌、泽泻、黄精、黄芪、丹参、虎杖、荷叶、赤芍、苍术、寄生、巴戟天、川楝子、当归、柴胡、决明子、法半夏、黄连、牡丹皮、青皮、枳实、党参、陈皮、郁金、甘草、三棱、莪术，该组方具有疏肝理气、活血化瘀、消食化积的功能，该申请公开的处方原料用量多，不利于临床使用和工业化大生产。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种新的治疗脂肪肝的中药药物组合物。本发明的另一目的是提供了该药物组合物的其制备方法和用途。

本发明治疗脂肪肝的药物组合物，它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

淫羊藿10-12.5份、黄芪15-20份、茯苓5-7.5份、白术5-7.5份、泽泻7.5-10份、陈皮7.5-10份、半夏7.5-10份、生山楂15-20份、丹参15-20份。

优选地，它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

淫羊藿10份、黄芪15份、茯苓7.5份、白术7.5份、泽泻10份、陈皮10份、半夏7.5份、生山楂15份、丹参15份。

其中，所述药物组合物是由所述原料药的原生药粉或者水或有机溶剂提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。

优选地，所述制剂为口服制剂。进一步优选地，所述口服制剂为所述的制剂是颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液。

本发明还提供了前述药物组合物的制备方法，它包括如下操作步骤：

(1)称取各重量配比的原料；

(2)打粉、或加入水或有机溶剂提取，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

本发明还提供了前述药物组合物在制备治疗脂肪肝的药物中的用途。其中，所述的药物是治疗非酒精性脂肪肝的药物。

本发明还提供了所述的药物组合物在制备预防肝纤维化的药物中的用途。

本发明还提供了前述药物组合物在制备具有温阳健脾，祛湿化痰的药物中的用途。

肥胖阳虚、痰湿阻滞型非酒精性脂肪肝是临床常见证型，发病人群广、病源基数大，严重威胁人民群众的身体健康，中医临床尚缺乏直接针对该证型的可靠药物。依据该证型的病因病机特点，提出“脾虚湿滞，痰瘀互结”的病机学说，以“温阳健脾，祛痰散瘀”为基本治则。本发明药物原料组方中黄芪补益脾气助脾升清阳；淫羊藿温阳化气，补肾壮阳，祛风除湿；白术、茯苓，白术甘温补中，补脾燥湿，益气生血，和中消滞；茯苓甘淡渗利，健脾补中，利水渗湿，二药伍用，一健一渗，水湿则有出路，故脾可健、湿可除；薏苡仁利水渗湿，健脾；泽泻利水渗湿；陈皮、半夏，陈皮理气健脾，和胃化痰，半夏燥湿化痰，消痞散结，健脾止呕，二者均入脾经，两药参合，相互促进，故脾可健、湿可去、痰自消，气机通畅；生山楂性味酸甘，长于消积化滞，主治肉食积滞，长于行气散瘀止痛；丹参活血祛瘀。首重益气健脾，温煦脾阳，兼以祛痰散瘀。

本发明药物组合物，配伍精当，各药味相辅相成，对脂肪肝的疗效明确，毒副作用小，为临床治疗脂肪肝提供了一种新的选择。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1.油红o染色结果。a.中药高剂量组，b.中剂量组，c.低剂量组，d.阳性药组，e.模型组，f.空白组

图2.qpcr结果。a.tlr4，b.nf-κb，c.tgf-β1，d.smad3

具体实施方式

实施例1：本发明药物的制备

取淫羊藿10g、黄芪15g、茯苓7.5g、白术7.5g、泽泻10g、陈皮10g、半夏7.5g、生山楂15g、丹参15g，加入10倍量水，浸泡过夜，补足吸水量，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，即得。

用法与用量：口服，一日一剂，一日3次。

实施例2：本发明药物颗粒剂的制备

取淫羊藿10g、黄芪15g、茯苓7.5g、白术7.5g、泽泻10g、陈皮10g、半夏7.5g、生山楂15g、丹参15g，加入10倍量水，浸泡过夜，补足吸水量，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩成相对密度为1.25(60℃)的浸膏；浸膏与3倍量糊精混合，制备软材，摇摆式制粒机制粒，60℃干燥0.5h，整粒，筛除细小颗粒，包装，即得。

实施例3：本发明药物片剂的制备

取淫羊藿10g、黄芪15g、茯苓7.5g、白术7.5g、泽泻10g、陈皮10g、半夏7.5g、生山楂15g、丹参15g，加入10倍量水，浸泡过夜，补足吸水量，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩成相对密度为1.25(60℃)的浸膏；浸膏与3倍量糊精混合，制备软材，摇摆式制粒机制粒，60℃干燥0.5h，单冲压片机压片，制备大小为0.3g的片剂，即得。

以下通过具体实验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明药物含药血清对非酒精性脂肪性肝病的细胞药效学及其机制研究

1.实验材料

1.1仪器与试药

co2培养箱(美国nuare公司)，超净工作台(济南卓奥)，倒置显微镜(日本olympus公司)，台式低速离心机(美国thermo公司)，超声细胞破碎仪(南京星辰科技有限公司)，酶标仪(美国thermo公司)，美国thermo公司(浙江赛德)，abi7500实时荧光定量pcr仪(abi7500)。

dmem培养基(美国gibco公司)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，胰酶(美国gibco公司)，油酸(美国mp公司)，油红o(美国sigma公司)，甘油三酯(tg)测定试剂盒(南京建成生物科技有限公司)，m-mlvfriststandcdnasynthesiskit(omega公司)，sybrgreenpcrmastermix试剂盒(appliedbiosystems公司)，tirzol(ambion公司)，肝癌细胞株hepg2(来源于成都中医药大学附属医院中心实验室细胞库)。多烯磷脂酰胆碱胶囊(228mg*24粒，赛诺菲制药有限公司)，购于成都中医药大学附属医院。

1.2实验动物

清洁级雄性wistar大鼠70只，体重200±20g，由四川简阳达硕生物公司提供，动物合格证号：scxk(川)2008-011。

2.实验方法

2.1本发明药物含药血清的制备

雄性wistar大鼠70只随机分为5组，即中药高剂量、中药中剂量、中药低剂量、阳性对照组(多烯磷脂酰胆碱胶囊组)、空白组，每组14只。根据人与大鼠体表面积折算法，给予本发明药物(实施例1制备)高、中、低剂量组分别灌胃18.8g/kg、9.4g/kg、4.7g/kg，阳性对照组122.14mg/kg，每日药量分两次灌胃，间隔8h，空白组给予等体积蒸馏水，连续7天。末次给药1小时后，大鼠腹主动脉取血，静置，离心，得含药血清。

2.2hepg2细胞培养与分组

将hepg2细胞以1×10⁵个/孔接种于12孔培养板中成对数生长期的细胞进行试验。待细胞长至70-80％，弃掉原有培养液，加适量pbs缓冲液洗两遍。

实验分6组：

空白组：加入普通培养基培养；

模型组：加入含0.25mm油酸的培养基。

阳性药物组：在含0.25mm油酸的培养液中加入10％的阳性药物含药血清。

中药高、中、低剂量组：在含0.25mm油酸的培养液中加入10％的中药高、中、低剂量的含药血清。

2.3油红o染色

按实验分组对细胞进行培养24h，吸弃培养基，pbs清洗3次，4％多聚甲醛固定30min，pbs清洗2次，加入60％异丙醇同步化液，油红o工作液避光孵育30min，60％异丙醇进行分色约30s至背景色全无，ddh2o洗3min，苏木素复染3-5min，ddh2o洗3次，每次2min，ddh2o液封，于倒置显微镜下观察细胞脂滴情况，取不同倍数不同视野拍照。

2.4细胞内tg/蛋白含量的测定

按实验分组对细胞进行处理，吸弃培养基，pbs清洗3次，加入200μl0.25％胰酶消化，吸掉胰酶，加入适量含10％fbs的dmem重悬细胞，离心，加入1ml细胞裂解液于超声细胞破碎仪下破碎，置于冰上孵育20min，离心取上清液。按照bca蛋白定量试剂盒说明书测定细胞内蛋白含量，按照甘油三酯试剂盒说明书测定细胞内tg含量。

根据公式计算：细胞内甘油三酯含量(mmol/gprot)＝(样本od值－空白od值)/(标准od值－空白od值)×校准品浓度(2.26mmol/l)÷待测样本蛋白浓度(gprot/l)

2.5qpcr法检测hepg2细胞中目的基因(tlr4、nf-κb、tgf-β1和smad3)在mrna水平的表达

收集孔板中各组细胞培养液，离心后收集上清液，采用trizol试剂提取rna，严格按照逆转录试剂盒说明书和sybrrgreenpcrmastermix试剂盒说明书检测细胞中tlr4、nf-κb、tgf-β1、smad3在mrna水平的表达量。

3.统计学处理

采用spss21.0软件对数据进行处理，实验结果以均值±标准差表示，数据符合正态分布、方差齐性，故采用独立样本t检验比较空白组与模型组的均数，p＜0.05表示有统计学意义。

4.实验结果

4.1各组细胞药物干预24h后hepg2细胞油红o染色结果

空白组细胞边缘清晰，胞浆丰富，核膜完整，细胞核被染成蓝色，细胞内未见明显红色脂滴；模型组细胞内出现很多大小不等的红色脂滴，脂肪变严重部分甚至融合成片；阳性药组、中药高、中、低剂量组中细胞核被染成蓝色，细胞内出现不同程度的红色脂滴颗粒。与模型组相比较，中药低中高剂量及阳性药组细胞内红色脂滴颗粒减少。

4.2细胞内tg/蛋白含量结果

与空白组比较，模型组细胞tg含量明显升高，p＜0.01，具有显著性统计学意义。

与模型组相比，中药高中低剂量组细胞中tg含量有所降低，p＜0.05，具有统计学意义，而阳性药组细胞中tg含量明显降低，p＜0.01，具有显著性统计学意义。

表1tg/蛋白含量

注：与空白组比较*p＜0.05，**p＜0.01；与模型组相比较^#p＜0.05，^##p＜0.01

4.3qpcr法检测hepg2细胞中目的基因(tlr4、nf-κb、tgf-β1和smad3)在mrna水平的表达结果

和空白组相比，模型组目的基因tlr4、nf-κb、tgf-β1、smad3在mrna水平的表达量明显上调。

和模型组相比，中药高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性药组tlr4、nf-κb、tgf-β1、smad3在mrna水平的表达量均明显下调。

5.结论

用含药血清处理nafld细胞24小时后，油红o染色、tg/蛋白含量、qpcr测定结果示：和模型组相比较，中药组能够降低nafld细胞中的tg含量，可能是通过下调目的基因tlr4、nf-κb在mrna水平的表达量发挥作用从而治疗nafld。且中药组同时能下调细胞中tgf-β1、smad3的mrna表达量，达到预防肝纤维化的作用。

本发明药物组合物，配伍精当，各药味相辅相成，对脂肪肝的疗效明确，且可用于预防肝纤维化，毒副作用小，为临床治疗脂肪肝提供了一种新的选择。