一种防治绝经后骨质疏松症的中药组合物及其制备方法与流程

本发明属于中药制剂领域，具体涉及一种防治绝经后骨质疏松症的中药组合物及其制备方法。

背景技术：

绝经后骨质疏松症是中老年女性的常见慢性疾病，据全国十三个省市的流行病学调查结果，女性绝经后，59岁以上多患有此病症，尤其值得关注的事实是，骨质疏松所致骨折等并发症已经成为中老年女性生活质量下降和死亡的重要原因。中药学的第一部专著《神农本草经》就有中药“坚骨”“强骨”之论。时至现代，补肾中成药为治疗骨质疏松症所常用。由于绝经后骨质疏松症患者的病情、病程、体质等的不同，临床用药应依据辨证结果而发挥疗效。

目前，防治绝经后骨质疏松症的中药，主要功效为补益肝肾、或补益脾肾、补肾壮阳等。本研究发现，绝经后骨质疏松症患者以肾虚为本，多兼有气虚、血瘀之候，如倦怠乏力、自汗少气、腰背酸痛等。故临床实践需增补此类中药组方，提高绝经后骨质疏松症的疗效。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种防治绝经后骨质疏松症的中药组合物及其制备方法，该中药组合物可以补肾填精、益气活血、壮骨强筋，主治绝经后骨质疏松症，以及其他继发性骨质疏松症。

本发明的目的是这样实现的：一种防治绝经后骨质疏松症的中药组合物，其特征在于该中药组合物由以下质量份数的组分组成：淫羊藿15-20份，冻干鹿茸5-10份，黄芪15-20份，红花5-10份，生地15-20份，牡蛎5-10份，所述淫羊藿为君药，冻干鹿茸、黄芪、红花为臣药，生地为佐药，牡蛎为使药。

优选的，该中药组合物由以下质量份数的组分组成：淫羊藿18份，冻干鹿茸8份，黄芪18份，红花8份，生地18份，牡蛎7份。

优选的，该中药组合物由以下质量份数的组分组成：淫羊藿20份，冻干鹿茸5份，黄芪20份，红花10份，生地15份，牡蛎5份。

优选的，该中药组合物由以下质量份数的组分组成：淫羊藿20份，冻干鹿茸10份，黄芪15份，红花5份，生地20份，牡蛎10份。

该中药组合物可制成各种药学治疗学上可接受的口服制剂。

所述口服制剂为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂。

一种防治绝经后骨质疏松症的中药组合物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：取冻干鹿茸、牡蛎，粉碎为极细粉，200目过筛，混匀，取淫羊藿、黄芪、生地、红花加水煎煮三次，滤过，滤液合并，静置；取上清液减压浓缩成稠膏，与上述药粉及辅料适量混匀，制成各种所需剂型。

与现有技术相比，本发明的优点在于。

1.本处方为具有补肾益气活血功效的中药复方。

本处方以淫羊藿为君，《本草经疏》称淫羊藿“益肾肝则筋骨自坚”，并能“通气行血”；以冻干鹿茸、黄芪、红花为臣，《中药大辞典》记载鹿茸有“壮元阳、补气血、益精髓、强筋骨”之效；黄芪为益气之要药，使“气能生精”，肾精充足，则骨壮髓荣，故《日华子本草》曰：“助气壮筋骨，长肉补血”；红花能行经络之中瘀血，见于《本草纲目》：“活血，润燥，止痛，散肿，通经”；生地佐之，制鹿茸、淫羊藿之偏胜，又滋补肾阴，如《本草汇言》：“生地，为补肾要药，益阴上品，故凉血补血有功，血得补，则筋受荣，肾得之而骨强力壮”；牡蛎为使，入足少阴肾经，富含钙类，《神农本草经》记载：“久服强骨节”。如此，鹿茸、牡蛎，源出一山一水，动静相合；淫羊藿、生地，一阳一阴，阴阳互制；黄芪、红花，一气一血，气血益精；动物药、植物药、矿物药合为一方，取天地之精华，共奏补肾壮骨、益气生精、活血止痛之效。

2.本处方中鹿茸的加工方法。

鹿茸的传统加工方法为热轧茸。由于鹿茸中含有多种活性物质，如促成骨、促造血、促神经因子等，多属蛋白或多肽类物质，热轧茸方法可破坏此类物质，从而失去生物活性。故采取冷冻干燥方法进行加工，可以有效避免具有生物活性的蛋白或多肽类物质丢失。

3.本处方中牡蛎的加工方法。

牡蛎含80%～95%的碳酸钙、磷酸钙及硫酸钙，并含镁、铝、硅及氧化铁等。

本处方所用牡蛎为球磨机粉碎，多呈纳米级、微米级极细粉，加之200目过筛，更加有利于促进胃肠道吸收。

附图说明

图1为本发明各组分配伍交叉实验24hbmscs增殖比较图。

图2为本发明各组分配伍交叉实验48hbmscs增殖比较图。

图3为本发明各组分配伍交叉实验72hbmscs增殖比较图。

图4为本发明各组分配伍交叉实验9dalp蛋白活性表达图。

图5为本发明各组分配伍交叉实验12dalp蛋白活性表达图。

具体实施方式

实施例1。

取冻干鹿茸100g、牡蛎100g，粉碎为极细粉，200目过筛，混匀。取淫羊藿200g、黄芪200g、生地200g、红花100g加水煎煮三次，滤过，滤液合并，静置；取上清液减压浓缩成稠膏，与上述药粉及辅料适量混匀，制成颗粒，干燥，压制成2000片，包糖衣或薄膜衣，即得。

成人剂量：每次4片（每片含生药0.5g），每日2-3次，口服。

实施例2。

1.本发明对绝经后骨质疏松症的疗效。

（1）显著提高骨密度。

骨密度全称是骨骼矿物质密度，是骨骼强度的一个重要指标，是骨质疏松症诊断与评价疗效的金标准。

①去卵巢绝经后骨质疏松症大鼠模型制备。

采用一次性摘除大鼠双侧卵巢法建立骨质疏松症动物模型。给予模型组大鼠10%水合氯醛注射液（3ml/kg体重），肌肉注射麻醉，于腰背部脊柱两侧做纵行切口暴露卵巢组织，丝线结扎其周围组织后，将其完整切除，然后逐层缝合伤口。假手术组以同样的方式手术暴露双侧卵巢，但不摘除。正常组不进行手术。

②实验药物。

补肾益气活血方（成人每日剂量/60kg体重）：淫羊藿20g、冻干鹿茸10g、生地20g，黄芪20g、红花10g、牡蛎10g。

大鼠等效剂量给药计算公式（g/kg）

=成人每日剂量（60kg体重）÷60kg×6.25。

③给药方案。

正常组、假手术组及模型空白组大鼠给予0.9%生理盐水灌胃，其余各组给予相应药物灌胃，容积为0.875ml/100g体重。

每日上午9时给药1次共8周。

④取材。

各组大鼠按对应药物治疗8w，最后一次灌胃后，禁食24h，称重后按3ml/kg//的剂量给予10%水合醛腹腔注射麻醉，用碘伏消毒手术部位，开腹后用5ml注射器抽取腹主动脉血液，低温离心机3000r/min离心15min，取血清，-20℃冷藏保存。取出大鼠左后肢股骨，并以生理盐水浸润的纱布包裹之后再用锡纸包裹，-70℃冻存，待后续dax检测骨密度。

⑤检测指标及结果。

如表1所示，与正常组相比较，模型空白组左后肢股骨骨密度显著降低（p＜0.01），假手术组密度未见明显变化（p＞0.05）；与模型空白组相比较，各治疗组骨密度均有不同程度的升高，阳性药物福善美组与补肾益气活血组比较，两者间无显著差异（p＞0.05）。

注：与正常组比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01；与假手术组比较：^△p＜0.05，^△△p＜0.01；

与模型空白组相比较：^☆p＜0.05,^☆☆p＜0.01；与福善美组比较：^◇p＜0.05，^◇◇p＜0.01。下表同此。

结果表明，去卵巢大鼠出现骨密度下降的骨质疏松，模型建立成功。补肾益气活血组骨密度值明显增高。

（2）显著促进骨形成。

alp（alkalinephosphatase）即碱性磷酸酶，为成骨细胞活性的标志物；opg（osteoclastogenesisinhibitoryfactor）即骨保护素，又称破骨细胞抑制因子，是一种生长因子受体，属于肿瘤坏死因子（tnf）受体家族。alp、opg是比较公认的标志骨形成的骨代谢评价指标。

去卵巢绝经后骨质疏松症大鼠模型制备、实验药物、给药方案同前。

取材：各组大鼠按对应药物治疗8周，最后一次灌胃后，禁食24小时，称重后按3ml/kg的剂量给予10%水合醛腹腔注射麻醉，用碘伏消毒手术部位，开腹后用5ml注射器抽取腹主动脉血液，低温离心机3000r/min离心15min，取血清，-20℃冷藏保存待测alp、opg。

检测指标及结果。

2.1骨形成指标血清alp测定。

如表2所示，与正常组相比较，假手术组血清alp含量未见明显差异（p＞0.05），模型空白组血清alp含量明显减少（p＜0.01）；与假手术组相比较，模型空白组alp含量明显减少（p＜0.01）；与模型空白组相比较，各用药组血清alp含量均明显增加（p＜0.01）。

2.2骨保护素（opg）测定。

如表3所示，与正常组相比较，假手术组血清opg未见明显差异（p＞0.05）；模型空白组血清opg明显减少（p＜0.01）；与模型空白组相比较，各用药组血清opg均明显增加（p＜0.01），福善美组与补肾益气活血组血清opg未见明显差异（p＞0.05）。

结果表明，去卵巢大鼠出现血清alp、opg含量明显减少，呈明显骨形成减低；补肾益气活血组可明显提高alp、opg含量，从而促进骨形成。

（3）显著抑制骨吸收。

tracp(tartrateresistantacidphosphatase)即抗酒石酸酸性磷酸酶，为骨吸收和破骨细胞活性的良好标志物,测定血清tracp有助于了解生理条件和各种病理条件下的骨代谢状况。

去卵巢绝经后骨质疏松症大鼠模型制备、实验药物、给药方案、取材同前。

骨吸收指标血清tracp测定。

如表4所示：与正常组相比较，假手术组血清tracp含量未见明显变化（p＞0.05），模型空白组血清tracp含量明显升高（p＜0.01）；与假手术组相比较，模型空白组tracp含量明显升高（p＜0.01）；与模型空白组相比较，各用药组血清tracp含量明显降低（p＜0.01）。福善美组与补肾益气活血组血清tracp含量未见明显差异（p＞0.05）。

结果表明，去卵巢大鼠出现血清tracp含量明显升高，呈明显骨吸收增强；补肾益气活血组可明显降低tracp含量，从而抑制骨吸收。

2.本发明有效成分组分配伍对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。

本发明有效成分及标准品来源。

鹿茸冻干粉（辽宁清原鹿场）、黄芪甲苷（辽宁北方药检科技开发有限公司产品，批号201314）、淫羊藿苷（辽宁北方药检科技开发有限公司，产品批号200415）、地黄苷a（北京盈泽纳新化工技术研究院，产品批号xj0706la14）、羟基红花黄色素a（辽宁北方药检科技开发有限公司，产品批号201308）。

本发明有效成分组分配伍方案。

采用正交设计方案：5因素3水平正交设计l18(3⁵)。按正交设计方案，进行五因素三水平药物干预，实验分为20组，正常对照组（dmem+10ml/dl胎牛血清含100u/ml青、链霉素）、成骨转化对照组（简称转化液组）（成分：dmem+10ml/dl胎牛血清含100u/ml青、链霉素+1×10^-7mol/l地塞米松+50g/l维生素c+10mmol/lb-甘油磷酸钠）、正常组+中药正交组分配伍组（1-18组）。

大鼠骨髓间充质细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells，bmscs）馈赠自辽宁中医药大学基础医学院实验室。

（1）补肾益气活血方有效成分组分配伍可明显促进bmscs增殖。

mtt法测定24、48、72hbmscs增殖分化情况。

各组bmscs24h增殖比较：与正常组比较，第1、3、4、7、8、9、10、11、13组bmscs增殖未见显著差异（p＞0.05），其余各组增殖情况均有显著上升（第5、6、15组p＜0.05；其余组p＜0.01）；与转化液组比较，给药各组均有显著差异（p＜0.01）；各中药正交组分配伍组组间比较发现，第18组bmscs增殖显著高于其他各组（vs第17组p＜0.05；p＜0.01）。见图1。

各组bmscs48h增殖比较：与正常组比较，第1、3、5、7、8、9、11、12、13组bmscs增殖未见显著差异（p＞0.05），其余各组增殖情况均有显著上升（vs第2、6、10、14、15组p＜0.05；p＜0.01）；与转化液组比较，第17、18组未见显著差异（p＞0.05），其余各组均有显著差异（vs第4、16组p＜0.05，p＜0.01）；各中药正交组分配伍组组间比较发现，第17、18组bmscs增殖显著高于其他各组（p＜0.01）。见图2。

各组bmscs72h增殖比较：与正常组比较，转化液组、第15、16、17组bmscs增殖未见显著差异（p＞0.05），其余各组增殖情况均有显著上升（vs第10、12、13、18组p＜0.05；p＜0.01）；与转化液组比较，第10、12、13、15、16、17组未见显著差异（p＞0.05），其余各组均有显著差异（vs第5、6、7、11组p＜0.05，p＜0.01）；各中药正交组分配伍组组间比较，第16、17、18组bmscs增殖显著高于其他各组。见图3。

bmscs增殖时效变化总结：正常组、转化液组及16、17、18组，均于48h到达增殖峰值（24hvs48hp＜0.01，48hvs72hp＜0.01）。

表5正常组、转化液组及16、17、18组bmscs24、48、72h增殖变化。

16、17、18组的补肾益气活血方组分配伍：16组为淫羊藿苷高剂量，鹿茸低剂量，黄芪甲苷、羟基红花a中剂量，地黄苷a高剂量。17组为淫羊藿苷高剂量，鹿茸中剂量，黄芪甲苷、羟基红花a高剂量，地黄苷a低剂量。18组为淫羊藿苷高剂量，鹿茸高剂量，黄芪甲苷、羟基红花a低剂量，地黄苷a中剂量。

表6bmscs增殖时效与16、17、18组组分配伍量效关系。

（2）补肾益气活血方有效成分组分配伍可明显促进bmscs成骨分化。

bmscs成骨分化是骨形成的基础。在定量指标方面，成骨细胞标志蛋白alp增高。

各组细胞9天、12天alp蛋白活性表达情况（elisa法）各组细胞9dalp蛋白活性表达比较：与正常组比较，各组alp蛋白活性均显著增高（vs第2组p＜0.05，p＜0.01）；与转化液组比较，各组均有显著差异（p＜0.01）；各中药正交组分配伍组间比较，第16、18组alp蛋白活性表达最高（p＜0.01）。见图4。

各组细胞12dalp蛋白活性表达情况：与正常组比较，第2组未见显著变化（p＞0.05），其余各组alp蛋白活性均显著增高（vs第3组p＜0.05，p＜0.01）；与转化液组比较，第16、18组未见显著差异（p＞0.05），其余各组均有显著差异（p＜0.01）；各中药正交组分配伍组间比较发现，第16、18组alp蛋白活性表达高于其余各组（p＜0.01）。见图5。

如表7所示，正常组、转化液组及16、18组9dalp活性表达均高于6d（p＜0.01）；正常组、转化液组及16、18组12dalp活性表达均高9d（p＜0.01）。

表7alp蛋白活性（成骨分化）时效与16、18组组分配伍量效关系。

综上所述，根据体内、体外实验结果，补肾益气活血方及其组分配伍具有促进骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化，促进骨形成，提高骨密度，改善骨代谢的作用，从而发挥防治绝经后骨质疏松症的功效。从本方有效成分组分配伍分析，淫羊藿为本方君药，剂量略高；益气活血的黄芪甲苷、羟基红花a、鹿茸配伍剂量比相近，为本方臣药；地黄苷a为本方佐药。补肾益气活血方组分配伍确有疗效基础，可为组分配伍中药研发提供实验依据。

实施例3。

淫羊藿18份，冻干鹿茸8份，黄芪18份，红花8份，生地18份，牡蛎7份，加入适量的辅料，制成颗粒剂。

实施例4。

淫羊藿20份，冻干鹿茸5份，黄芪20份，红花10份，生地15份，牡蛎5份，加入适量的辅料，制成丸剂。

实施例5。

淫羊藿20份，冻干鹿茸10份，黄芪15份，红花5份，生地20份，牡蛎10份，加入适量的辅料，制成胶囊剂。