阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在肿瘤治疗中的应用的制作方法

本发明涉及肿瘤治疗技术领域，具体而言，涉及阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在肿瘤治疗中的应用。

背景技术：

目前，恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要疾病。人表皮生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor-2,her-2)阳性的恶性肿瘤浸润性强，患者无病生存期短，预后差。

her2阳性乳腺癌占全部乳腺癌的20％～30％，在乳腺癌所有的分子分型中，her2阳性早期乳腺癌的至远处转移时间和总生存时间均较短。her2阳性是胃癌常见的分子分型，据统计约有20％的胃癌呈her2阳性，该分型较其他胃癌分型恶性程度高。因此，针对her2阳性恶性肿瘤的治疗和研究备受研究者关注。曲妥珠单抗(赫赛汀、herceptin)是一种针对her2原癌基因产物的人/鼠嵌合单抗，能特异地作用于her2受体过度表达的癌细胞并且起到杀伤作用。虽然曲妥珠单抗能有效提高her2阳性乳腺癌、胃癌的疗效，但是令人遗憾的是，仅有约30％的her2阳性乳腺癌、胃癌患者效果明显，且大部分初始接受曲妥珠单抗治疗有效的病人常在1年内产生耐药，加上其费用高昂，这极大的限制了曲妥珠单抗的临床应用。因此，寻找针对her2阳性恶性肿瘤新的治疗模式，增加曲妥珠单抗的疗效，具有重要的临床意义。

鉴于此，特提出本发明。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供阿司匹林与曲妥珠单抗联合在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供阿司匹林与曲妥珠单抗协同在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在制备用于抑制肿瘤细胞增殖的抑制剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在制备用于促进肿瘤细胞凋亡的促进剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种用于治疗肿瘤的药物组合。

本发明的另一目的在于提供一种治疗肿瘤的方法。

本发明是这样实现的：

阿司匹林与曲妥珠单抗联合在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

阿司匹林与曲妥珠单抗协同在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在制备用于抑制肿瘤细胞增殖的抑制剂中的应用。

阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在制备用于促进肿瘤细胞凋亡的促进剂中的应用。

一种用于治疗肿瘤的药物组合，其包括曲妥珠单抗，以及用于与该曲妥珠单抗联合或协同施用的阿司匹林。

一种治疗肿瘤的方法，其包括：向患有肿瘤的患者施用曲妥珠单抗，并联合或协同施用阿司匹林。

本发明具有以下有益效果：

本发明的研究首次发现了阿司匹林的新用途，其有助于增加曲妥珠单抗的疗效，即相对于单独地施用曲妥珠单抗，将阿司匹林与曲妥珠单抗联合用药，可明显地抑制her2阳性肿瘤细胞增殖以及促进her2阳性肿瘤细胞的凋亡，联合用药的抗her2阳性肿瘤的效果好于单独地施用曲妥珠单抗的效果。因此，本发明提供的阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用，不仅为阿司匹林在肿瘤尤其是her2阳性肿瘤的抗癌效应提供一定的理论依据，同时也为肿瘤尤其是her2阳性肿瘤(例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌)的治疗提供了一种新的思路和治疗手段。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例2提供的阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性乳腺癌细胞增殖的影响结果；

图2为本发明实施例2提供的阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性胃癌细胞增殖的影响结果；

图3为本发明实施例3提供的阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性乳腺癌细胞凋亡的影响结果；

图4为本发明实施例3的阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性胃癌细胞凋亡的影响结果。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在肿瘤治疗中的应用进行具体说明。

阿司匹林作为一种解热镇痛药，已应用于临床上百年，它以出色的抗凝和保护心脏作用成为心血管疾病一线和基础治疗用药。

有关阿司匹林在肿瘤方面的抗癌作用还不完全清楚。对于阿司匹林与曲妥珠单抗联合用于her2阳性肿瘤研究的报道更是没有。

本发明的研究首次发现，相对于单独地施用曲妥珠单抗，将阿司匹林与曲妥珠单抗联合用药，可明显地抑制her2阳性肿瘤(例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌)细胞增殖以及促进her2阳性肿瘤(例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌)细胞的凋亡，阿司匹林与曲妥珠单抗联合用药的抗her2阳性肿瘤例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌的效果好于单独地施用曲妥珠单抗或阿司匹林的效果。本发明首次发现了阿司匹林的新用途，将其与曲妥珠单抗联合使用，阿司匹林有助于增加曲妥珠单抗的疗效。

基于此，一方面，本发明提供了阿司匹林与曲妥珠单抗联合在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述肿瘤为her2阳性肿瘤。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述her2阳性肿瘤为her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60：(1-2)。

另一方面，本发明提供了阿司匹林与曲妥珠单抗协同在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述肿瘤为her2阳性肿瘤。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述her2阳性肿瘤为her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60：(1-2)。

另一方面，本发明提供了阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在制备用于抑制肿瘤细胞增殖的抑制剂中的应用。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述肿瘤细胞为her2阳性肿瘤细胞。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述her2阳性肿瘤细胞为her2阳性乳腺癌细胞或her2阳性胃癌细胞。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60：(1-2)。

另一方面，本发明提供了阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在制备用于促进肿瘤细胞凋亡的促进剂中的应用。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述肿瘤细胞为her2阳性肿瘤细胞。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述her2阳性肿瘤细胞为her2阳性乳腺癌细胞或her2阳性胃癌细胞。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60：(1-2)。

另一方面，本发明提供了一种用于治疗肿瘤的药物组合，其包括曲妥珠单抗，以及用于与上述曲妥珠单抗联合或协同施用的阿司匹林。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述肿瘤为her2阳性肿瘤。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述her2阳性肿瘤为her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60：(1-2)。

另一方面，本发明提供了一种治疗肿瘤的方法，其包括：向患有肿瘤的患者施用曲妥珠单抗，并联合或协同施用阿司匹林。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述肿瘤为her2阳性肿瘤。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述her2阳性肿瘤为her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60：(1-2)。

本发明提供的阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用，不仅为阿司匹林在肿瘤尤其是her2阳性肿瘤的抗癌效应提供一定的理论依据，同时也为肿瘤尤其是her2阳性肿瘤(例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌)的治疗提供了一种新的思路和治疗手段。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

细胞系和主要试剂

her2阳性乳腺癌细胞系skbr3、her2阳性胃癌细胞系sgc7901均源自于中科院上海细胞库，由中国人民解放军兰州总医院实验中心保存。skbr3细胞和sgc7901细胞均使用dmem培养液(含10％胎牛血清)在37℃、5％co2孵箱内培养。阿司匹林(acetylsalicylicacid)、mtt(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)均购于sigma公司。注射用曲妥珠单抗购于罗氏公司。阿司匹林溶于二甲基亚砜(dmso)，曲妥珠单抗溶于无菌注射用水。

实施例1

本实施例提供了一种用于治疗肿瘤的药物组合，该药物组合包括曲妥珠单抗，以及用于与曲妥珠单抗联合或协同施用的阿司匹林。

本实施例提供的药物组合对肿瘤尤其是her2阳性肿瘤例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌具有较好的治疗效果。

实施例2

1阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性乳腺癌细胞skbr3增殖的影响

mtt法检测细胞增殖

将正常生长的skbr3细胞传代后接种于96孔细胞培养板，每孔200μl体积，细胞数为2×10³个，培养过夜后分别加入含有5mm阿司匹林(5mmaspirin)、15μg/ml曲妥珠单抗(15μg/mltrastuzumab)、30μg/ml曲妥珠单抗(30μg/mltrastuzumab)以及两药联合(5mmaspirin+15μg/mltrastuzumab，即阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60:1)、(5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab，即阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60:2)的培养液继续培养，以加入等体积注射用水或dmso的培养液作为对照组(即control组)，于2d后检测细胞增殖情况。将mtt配置浓度为5mg/ml，每孔加入20μl后继续培养4h，之后弃培养液，每孔加入150μl的dmso，在酶标仪上振荡约5min，490nm检测吸光度(od)值，绘制柱状图表示细胞生长情况，结果如图1所示(图中：纵坐标表示细胞增殖率，横坐标代表不同的用药组)。每组3复孔，并重复3次，结果以(平均值±标准差)表示。

图1的结果显示，control组细胞相对增殖率为(100±6.13)％，5mm阿司匹林组细胞相对增殖率为(79.6±4.51)％，15μg/ml曲妥珠单抗组细胞相对增殖率为(69.2±2.23)％，30μg/ml曲妥珠单抗组细胞相对增殖率为(48.2±5.80)％，5mmaspirin+15μg/mltrastuzumab组细胞相对增殖率为(46.1±7.01)％，5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab组细胞相对增殖率为(21.5±2.89)％。统计分析显示，与control组相比，5mm阿司匹林组、15μg/ml曲妥珠单抗组、30μg/ml曲妥珠单抗组和两药联合组的细胞增殖受到抑制，差异具有统计学意义(p<0.05)；不论与5mm阿司匹林组、15μg/ml曲妥珠单抗组、30μg/ml曲妥珠单抗组相比，两药联合组的细胞增殖明显受到抑制，差异具有统计学意义(p<0.05)，且两个不同浓度的两药联合组的增殖率低于单药组。由此说明，阿司匹林联合曲妥珠单抗能够明显抑制skbr3细胞增殖，且抑制效果好于单独使用曲妥珠单抗的情况，阿司匹林能够促进或增加或放大或协同曲妥珠单抗对her2阳性乳腺癌细胞的抑制作用。

2阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性胃癌细胞sgc7901增殖的影响

mtt法检测细胞增殖

将正常生长的sgc7901细胞传代后接种于96孔细胞培养板，每孔200μl体积，细胞数为2×10³个，培养过夜后分别加入含有5mm阿司匹林(5mmaspirin)、15μg/ml曲妥珠单抗(15μg/mltrastuzumab)、30μg/ml曲妥珠单抗(30μg/mltrastuzumab)以及两药联合(5mmaspirin+15μg/mltrastuzumab，即阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60:1)、(5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab，即阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60:2)的培养液继续培养，以加入等体积注射用水或dmso的培养液作为对照组(即control组)，于2d后检测细胞增殖情况。将mtt配置浓度为5mg/ml，每孔加入20μl后继续培养4h，之后弃培养液，每孔加入150μl的dmso，在酶标仪上振荡约5min，490nm检测吸光度(od)值，绘制柱状图表示细胞生长情况，结果如图2所示(图中：纵坐标表示细胞增殖率，横坐标代表不同的用药组)。每组3复孔，并重复3次，结果以(平均值±标准差)表示。

图2的结果显示，control组细胞相对增殖率为(100±1.72)％，5mm阿司匹林组细胞相对增殖率为(80.3±5.66)％，15μg/ml曲妥珠单抗组细胞相对增殖率为(76.0±3.11)％，30μg/ml曲妥珠单抗组细胞相对增殖率为(57.3±3.54)％，5mmaspirin+15μg/mltrastuzumab组细胞相对增殖率为(47.5±6.20)％，5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab组细胞相对增殖率为(26.5±1.66)％。统计分析显示，与control组相比，5mm阿司匹林组、15μg/ml曲妥珠单抗组、30μg/ml曲妥珠单抗组和两药联合组的细胞增殖受到抑制，差异具有统计学意义(p<0.05)；不论与5mm阿司匹林组、15μg/ml曲妥珠单抗组、30μg/ml曲妥珠单抗组相比，两药联合组的细胞增殖明显受到抑制，差异具有统计学意义(p<0.05)。由此可见，相较于单独使用曲妥珠单抗的情况，将阿司匹林与曲妥珠单抗联合使用其对sgc7901细胞增殖的抑制效果更好，阿司匹林能够促进或增加或放大或协同曲妥珠单抗对her2阳性胃癌细胞的抑制作用。

实施例3

阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性乳腺癌细胞skbr3细胞凋亡的影响

流式细胞仪法检测细胞凋亡

将正常生长的skbr3细胞传代后接种于培养皿中，待细胞密度达到80％左右时分别加入含有5mm阿司匹林(5mmaspirin)、30μg/ml曲妥珠单抗(30μg/mltrastuzumab)以及两药联合(5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab，即阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60:2)的培养液继续培养，以加入等体积注射用水或dmso的培养液作为对照组(即control组)，于72h后处理细胞。将细胞消化后重悬，调整细胞数为1×10⁶个/ml，用pbs洗2-3次后加入500μl缓冲液悬浮细胞，再分别加入10μl膜连蛋白v-异硫氰酸荧光素(annexinv-fitc)和10μlpi混匀，室温避光孵育染色15min，上流式细胞仪进行双色荧光细胞流式计数。结果如图3所示(图中：a为阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性乳腺癌细胞凋亡的流式细胞检测结果；b为司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性乳腺癌细胞凋亡的影响结果柱状图，图b中：纵坐标为细胞凋亡率，横坐标为不同的用药组)。

图3的结果显示，control组细胞凋亡率为(13.5±3.20)％，5mm阿司匹林组细胞凋亡率为(27.3±3.47)％，30μg/ml曲妥珠单抗组细胞凋亡率为(35.3±2.80)％，5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab组细胞凋亡率为(56.2±3.95)％。统计分析显示，与control组相比，5mm阿司匹林组、30μg/ml曲妥珠单抗组和两药联合组的细胞凋亡增加，差异具有统计学意义(p<0.05)；不论与5mm阿司匹林组或30μg/ml曲妥珠单抗组相比，两药联合组的细胞凋亡明显增加，差异具有统计学意义(p<0.05)。由此说明，相较于单独使用曲妥珠单抗的情况，将阿司匹林与曲妥珠单抗联合使用其对skbr3细胞凋亡的促进效果更好，这表明，阿司匹林能够增强或促进或放大或协同曲妥珠单抗对her2阳性乳腺癌细胞促凋亡的作用。

实施例4

阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性胃癌细胞sgc7901细胞凋亡的影响

流式细胞仪法检测细胞凋亡

将正常生长的sgc7901细胞传代后接种于培养皿中，待细胞密度达到80％左右时分别加入含有5mm阿司匹林(5mmaspirin)、30μg/ml曲妥珠单抗(30μg/mltrastuzumab)以及两药联合(5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab，即阿司匹林与曲妥珠单抗的质量比为60:2)的培养液继续培养，以加入等体积注射用水或dmso的培养液作为对照组(即control组)，于72h后处理细胞。将细胞消化后重悬，调整细胞数为1×10⁶个/ml，用pbs洗2-3次后加入500μl缓冲液悬浮细胞，再分别加入10μl膜连蛋白v-异硫氰酸荧光素(annexinv-fitc)和10μlpi混匀，室温避光孵育染色15min，上流式细胞仪进行双色荧光细胞流式计数。结果如图4所示(图中：a为阿司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性胃癌细胞凋亡的流式细胞检测结果；b为司匹林联合曲妥珠单抗对her2阳性胃癌细胞凋亡的影响结果柱状图，图b中：纵坐标为细胞凋亡率，横坐标为不同的用药组)。

图4的结果显示，control组细胞凋亡率为(11.8±1.22)％，5mm阿司匹林组细胞凋亡率为(28.7±1.53)％，30μg/ml曲妥珠单抗组细胞凋亡率为(32.0±2.22)％，5mmaspirin+30μg/mltrastuzumab组细胞凋亡率为(71.5±2.54)％。统计分析显示，与control组相比，5mm阿司匹林组、30μg/ml曲妥珠单抗组和两药联合组的细胞凋亡增加，差异具有统计学意义(p<0.05)；不论与5mm阿司匹林组或30μg/ml曲妥珠单抗组相比，两药联合组的细胞凋亡明显增加，差异具有统计学意义(p<0.05)。由此说明，相较于单独使用曲妥珠单抗的情况，将阿司匹林与曲妥珠单抗联合使用其对sgc7901细胞凋亡的促进效果更好，这表明，阿司匹林能够增强或促进或放大或协同曲妥珠单抗对her2阳性胃癌细胞促凋亡的作用。

以上结果说明，阿司匹林能够增强或促进或放大或协同曲妥珠单抗对肿瘤尤其是her2阳性肿瘤的抑制增殖或促进凋亡的效果，这一发现出乎意料，让本领域技术人员吃惊。

实施例4

本实施例提供了一种治疗肿瘤的方法，其包括：向患有肿瘤的患者施用曲妥珠单抗，并联合或协同施用阿司匹林。

本实施例提供的治疗肿瘤的方法对肿瘤尤其是her2阳性肿瘤(例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌)具有较好的治疗效果。

阿司匹林通常作为一种非抗肿瘤药物进行使用，但本发明的研究显示，其能够放大或协同或增强传统抗肿瘤药物(例如曲妥珠单抗)的疗效，首次发现并证实了阿司匹林的新用途，该结果令人惊讶，超出本领域技术人员的意料。因此，阿司匹林能够与曲妥珠单抗联合或协同用于制备治疗肿瘤尤其是her2阳性肿瘤(例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌)的药物中。将阿司匹林与曲妥珠单抗联合使用，作为一种全新的治疗模式用于her2阳性肿瘤的治疗具备以下优势：

首先，这种新模式增加了单独使用曲妥珠单抗的疗效。

例如，单独使用曲妥珠单抗的her2阳性乳腺癌细胞的增殖率仅为(48.2±5.80)％，曲妥珠单抗联合阿司匹林使用后，her2阳性乳腺癌细胞的增殖率降低至(21.5±2.89)％，降低比例达55.4％；单独使用曲妥珠单抗对her2阳性乳腺癌细胞的凋亡率仅为(35.3±2.80)％，曲妥珠单抗联合阿司匹林使用后细胞凋亡率达到(56.2±3.95)％，增加比例达58.9％。这种联合使用在her2阳性胃癌细胞中得到了相似的结果。由此曲妥珠单抗联合阿司匹林使用对her2阳性乳腺癌、胃癌细胞抑制增殖、促进凋亡作用非常明显，这一效果是本领域技术人员不能预料得到的。

其次，这种新模式可以降低患者的毒副反应。

将联合阿司匹林作为一种抗肿瘤治疗新模式不仅可以增加传统抗肿瘤药物的疗效，更重要的是降低患者化疗毒副反应。这种治疗模式不同于临床上两种抗肿瘤药物的简单联合，由于阿司匹林不是抗肿瘤药物，因此也没有抗肿瘤药物剧烈的毒副反应。这种新的模式可以降低患者的毒副反应，减轻患者的痛苦，避免医患纠纷，实现以人为本的治疗目的。

再有，这种新模式可降低医疗成本，节约医疗资源。

曲妥珠单抗有着高昂的药费，1位患者使用曲妥珠单抗的总费用在15万左右。但是，对于部分患者来说，即使付出了费用采用了这种方式治疗，也存在曲妥珠单抗反应性差的问题，不能达到好的治疗效果。阿司匹林费用低廉，容易获得，而且阿司匹林在增加曲妥珠单抗的疗效的同时又不增加额外药费。本发明的研究对her2阳性肿瘤患者而言减轻了治疗费用负担，节约社会医疗资源。

总之，本发明的研究表明，阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同可用于制备治疗肿瘤尤其是her2阳性肿瘤例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌的药物中，并且阿司匹林与曲妥珠单抗联合或协同可用于制备抑制肿瘤细胞增殖的抑制剂或促进肿瘤细胞凋亡的促进剂中。这不仅为阿司匹林在肿瘤方面尤其her2阳性肿瘤的抗癌效应提供一定的理论依据，同时也为对肿瘤尤其her2阳性肿瘤例如her2阳性乳腺癌或her2阳性胃癌的治疗提供了一种新的思路和治疗手段。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。