本发明属于动物药品
技术领域：
，具体涉及一种用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂的制备方法。
背景技术：
：禽流感是禽流行性感冒的简称，它是由甲型流感病毒引起的禽类感染病，主要发生在鸡、火鸡、珍珠鸟以及其它禽类，特别是迁徙类水禽如野鸭、天鹅等。按病原体类型的不同，禽流感可分为高致病性、低致病性和非致病性禽流感三大类：非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生抗病毒体；低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，食量减少，产蛋量下降，出现零星死亡；高致病性禽流感最为严重，发病率和死亡率均高，感染的家禽常常“全军覆没”。禽流感病毒潜伏期从几小时到数天不等，最后可长达21天。禽流感由于其高致病性和高传播率，禽流感在世界各地的侵袭日趋频繁，不但给这些国家的家禽养殖业带来沉重的打击，同时也严重威胁着人类的健康和生命。世界卫生组织已将禽流感列为a类动物疫病。目前，如果发现禽类患有高致病性禽流感时，基本还是采取严格的隔离封锁和全群扑杀的综合措施，这样虽然能够抑制病毒的传播，但无疑会对禽类养殖业造成巨大的经济损失。目前，用于抗流感的药物主要有神经氨酸酶抑制剂，如：扎那米韦及奥司米韦等；离子通道阻滞剂，如金刚烷胺和金刚乙胺，它们被认为是治疗和预防流感病毒地首选药物；以及核苷类药物：三氮唑核苷，即利巴韦林亦称病毒唑。对于禽流感病的防治，临床上西医主要通过注射或者喂服抗生素、抗病毒或者激素类药物，虽然有一定防治效果，但由于该类化学药物副作用较大，易在家禽体内产生药物残留，限制了其在临床上的应用。现在市场上也有预防治疗禽流感的中成药物，其中药物中的原料药组成成分较多，造成制备工艺复杂，且成品药在服用后吸收较慢，对病毒抑制作用不明显，治疗效果不理想，此外，现有中成药中基本上是通过与饲料混合或与水混饮来治疗禽流感，而且长时间服用对禽类肝脏、肾脏有一定的损害，这也会给禽类养殖业带来相应的损失。但这些药物都存在一定的局限性：（1）现有的药物在服用后吸收较慢，对病毒抑制作用不明显，治疗效率较低。（2）现有的用于禽流感的药物，基本上是通过与饲料混合或与水混饮来治疗禽流感，由于这些药物基本由化学物质组成，易在家禽体内产生药物残留，长时间服用对禽类肝脏、肾脏有一定的损害，使得家禽容易产生一定的抗药性。所以，一种可以有效预防、治疗禽流感，更安全、来源更广泛的制剂是人们迫切需要的。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题：针对目前现有的用于禽流感的药物基本由化学物质组成，易在畜禽体内产生药物残留，长时间服用对禽类肝脏、肾脏有损害的问题，提供一种用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂的制备方法。为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：一种用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：（1）将黄芩根进行切片，在温度50~60℃下真空干燥，粉碎，得粉碎物，按质量比1：3~4，将粉碎物、石油醚回流脱脂，抽滤，得滤渣，按质量比1：20~30，将滤渣、蒸馏水进行混合，浸泡5~6h，超声提取，减压过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，加入滤液质量3~4倍的乙醇，在温度2~4℃下沉化，离心，得沉淀物，将沉淀物在温度50~60℃下烘干，得烘干物；（2）按质量比1：5~7，将烘干物、壳聚糖溶液进行混合，经微孔滤膜过滤，再进行喷雾干燥，得干燥物，按质量比1：5~6，将干燥物溶于生理盐水中，并搅拌均匀，得搅拌液，备用；（3）按质量比1：5~6，将枯草芽孢杆菌接种于营养液中，在温度35~37℃下摇床培养20~24h，再二次活化，得活化液a，按质量比1：1：5~6，将嗜酸乳杆菌、粪肠球菌分别接入液体培养基中，再在温度32~37℃、厌氧条件下培养，再二次活化，合并，得合并液，按质量比1：2，将活化液a、合并液进行混合，得混合液；（4）按质量比1：1：10~15，将艾叶、苍术、水进行混合，浸泡20~24h，回流提取，过滤，分离滤液、滤渣，向滤渣中加入滤渣质量5~6倍的水，并在温度70~80℃下回流提取1~2h，过滤，合并滤液，得滤液a，按质量比1~2：7~8，将混合液接种至滤液a中，搅拌均匀，得搅拌混合液，按质量比1：1，将搅拌混合液、步骤（2）备用的搅拌液一同装入喷瓶中，即得用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂。所述步骤（2）中壳聚糖溶液壳聚糖溶液是按质量比1：7~10，将壳聚糖、0.2mol/l乙酸溶液进行混合，在温度45~50℃为水浴锅以200~300r/min的速率进行搅拌6~8h，即得壳聚糖溶液。所述步骤（3）中营养液是按重量份数计，取40~50份水、10~15份蛋白胨、5~6份氯化钠、3~5份牛肉浸出粉进行混合均匀，高温灭菌，即得营养液。所述步骤（3）中液体培养基是按重量份数计，取70~80份水、20~30份葡萄糖、10~15份蛋白胨、10~15份牛肉膏、5~6份酵母提取物、5~6份乙酸钠、2~3份柠檬酸二铵、1~2份吐温80、0.5~0.8份硫酸镁、0.25~0.5份硫酸镁进行混合均匀，高温灭菌，即得液体培养基。本发明与其他方法相比，有益技术效果是：（1）本发明从山茶根中提取一种活性成分，其能够提高细胞表面黏附分子的表达和促进淋巴细胞再循环，发挥免疫增强和免疫调节作用，与壳聚糖结合，由于壳聚糖其表面带正电荷，能够与带负电的鼻腔黏膜产生强烈的静电作用，进而不易被鼻部纤毛清除，从而为活性成分穿透鼻腔细胞膜提供更长的时间，并且其吸入鼻腔后在鼻腔湿润的环境下遇水膨胀，在鼻腔内形成一层黏膜状物质，可以阻止外界中的病毒物质与鼻腔内的受体结合，加上中草药益生菌制剂，其中各种益生菌菌液能够形成生物膜屏障以及中草药中艾叶是抗菌抗病毒的药物，提取液对呼吸系统疾病有一定的防治作用，从而改善呼吸道黏膜屏障、黏膜的发育和损伤的修复，维护畜禽呼吸道黏膜健康，因此本发明一方面保护局部鼻腔、上呼吸道粘膜细胞不受禽流感病毒的侵袭，阻断其感染的关键，从而达到预防畜禽禽流感的目的，另一方面也能够进一步增强畜禽的免疫功能，促进畜禽的健康生长。（2）本发明中中草药益生菌制剂不仅仅能够对呼吸道黏膜进行保护，同时还能作为消毒剂对畜禽环境进行改善，利用了益生菌及其代谢产物对致病菌和条件致病菌的拮抗作用，达到消毒的目的，由于中草药和益生菌具有协同增效作用，从而进一步减弱禽流感扩散传播的能力，且本发明通过喷雾的方式来防治禽流感，避免长期服用带来的肝脏和肾脏的损害。具体实施方式壳聚糖溶液壳聚糖溶液是按质量比1：7~10，将壳聚糖、0.2mol/l乙酸溶液进行混合，在温度45~50℃为水浴锅以200~300r/min的速率进行搅拌6~8h，即得壳聚糖溶液。营养液是按重量份数计，取40~50份水、10~15份蛋白胨、5~6份氯化钠、3~5份牛肉浸出粉进行混合均匀，高温灭菌，即得营养液。液体培养基是按重量份数计，取70~80份水、20~30份葡萄糖、10~15份蛋白胨、10~15份牛肉膏、5~6份酵母提取物、5~6份乙酸钠、2~3份柠檬酸二铵、1~2份吐温80、0.5~0.8份硫酸镁、0.25~0.5份硫酸镁进行混合均匀，高温灭菌，即得液体培养基。二次活化是指再放入活化液中在温度28~32℃下进行培养20~24h，活化液是按重量份数计，取70~80份水、20~30份水、10~15份酵母浸粉、5~6份葡萄糖、0.5~1份半胱氨酸盐酸盐、0.4~0.8份碳酸氢钠、0.08~0.1份磷酸氢二钾、0.08~0.1份氯化钠、0.008~0.01份硫酸镁、0.008~0.01份氯化钙进行混合均匀，高温灭菌，即得活化液。一种用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：（1）将山茶根进行切片，在温度50~60℃下真空干燥20~24h，粉碎，得粉碎物，按质量比1：3~4，将粉碎物、石油醚在温度70~80℃下回流脱脂1~2h，抽滤，得滤渣，按质量比1：20~30，将滤渣、蒸馏水进行混合，浸泡5~6h，再在温度40~60℃、超声功率600~1200w条件下超声提取10~50min，减压过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，加入滤液质量3~4倍的乙醇，在温度2~4℃下沉化20~24h，以3000~4000r/min离心8~10min，得沉淀物，将沉淀物在温度50~60℃下烘干，得烘干物；（2）按质量比1：5~7，将烘干物、壳聚糖溶液进行混合，经微孔滤膜过滤，再以进口温度120~160℃，进料速度3~7ml/min进行喷雾干燥，得干燥物，按质量比1：5~6，将干燥物溶于生理盐水中，并以200~300r/min搅拌均匀，得搅拌液，备用；（3）按质量比1：5~6，将枯草芽孢杆菌接种于营养液中，在温度35~37℃、140~200r/min的条件下摇床培养20~24h，再二次活化20~24h，得活化液a，按质量比1：1：5~6，将嗜酸乳杆菌、粪肠球菌分别接入液体培养基中，再在温度32~37℃、厌氧条件下培养48h，再二次活化20~24h，得嗜酸乳杆菌活化液、粪肠球菌活化液，按质量比1：1，将嗜酸乳杆菌活化液、粪肠球菌活化液进行合并，得合并液，按质量比1：2，将活化液a、合并液进行混合，得混合液；（4）按质量比1：1：10~15，将艾叶、苍术、水进行混合，浸泡20~24h，在温度70~80℃回流提取1~2h，过滤，分离滤液、滤渣，向滤渣中加入滤渣质量5~6倍的水，并在温度70~80℃下回流提取1~2h，过滤，合并滤液，得滤液a，按质量比1~2：7~8，将混合液接种至滤液a中，搅拌均匀，得搅拌混合液，按质量比1：1，将搅拌混合液、步骤（2）备用的搅拌液一同装入喷瓶中，即得用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂。实施例1壳聚糖溶液壳聚糖溶液是按质量比1：7，将壳聚糖、0.2mol/l乙酸溶液进行混合，在温度45℃为水浴锅以200r/min的速率进行搅拌6h，即得壳聚糖溶液。营养液是按重量份数计，取40份水、10份蛋白胨、5份氯化钠、3份牛肉浸出粉进行混合均匀，高温灭菌，即得营养液。液体培养基是按重量份数计，取70份水、20份葡萄糖、10份蛋白胨、10份牛肉膏、5份酵母提取物、5份乙酸钠、2份柠檬酸二铵、1份吐温80、0.5份硫酸镁、0.25份硫酸镁进行混合均匀，高温灭菌，即得液体培养基。二次活化是指再放入活化液中在温度28℃下进行培养20h，活化液是按重量份数计，取70份水、20份水、10份酵母浸粉、5份葡萄糖、0.5份半胱氨酸盐酸盐、0.4份碳酸氢钠、0.08份磷酸氢二钾、0.08份氯化钠、0.008份硫酸镁、0.008份氯化钙进行混合均匀，高温灭菌，即得活化液。一种用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：（1）将山茶根进行切片，在温度50℃下真空干燥20h，粉碎，得粉碎物，按质量比1：3，将粉碎物、石油醚在温度70℃下回流脱脂1h，抽滤，得滤渣，按质量比1：20，将滤渣、蒸馏水进行混合，浸泡5h，再在温度40℃、超声功率600w条件下超声提取10min，减压过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，加入滤液质量3倍的乙醇，在温度2℃下沉化20h，以3000r/min离心8min，得沉淀物，将沉淀物在温度50℃下烘干，得烘干物；（2）按质量比1：5，将烘干物、壳聚糖溶液进行混合，经微孔滤膜过滤，再以进口温度120℃，进料速度3ml/min进行喷雾干燥，得干燥物，按质量比1：5，将干燥物溶于生理盐水中，并以200r/min搅拌均匀，得搅拌液，备用；（3）按质量比1：5，将枯草芽孢杆菌接种于营养液中，在温度35℃、140r/min的条件下摇床培养20h，再二次活化20h，得活化液a，按质量比1：1：5，将嗜酸乳杆菌、粪肠球菌分别接入液体培养基中，再在温度32℃、厌氧条件下培养48h，再二次活化20h，得嗜酸乳杆菌活化液、粪肠球菌活化液，按质量比1：1，将嗜酸乳杆菌活化液、粪肠球菌活化液进行合并，得合并液，按质量比1：2，将活化液a、合并液进行混合，得混合液；（4）按质量比1：1：10，将艾叶、苍术、水进行混合，浸泡20h，在温度70℃回流提取1h，过滤，分离滤液、滤渣，向滤渣中加入滤渣质量5倍的水，并在温度70℃下回流提取1h，过滤，合并滤液，得滤液a，按质量比1：7，将混合液接种至滤液a中，搅拌均匀，得搅拌混合液，按质量比1：1，将搅拌混合液、步骤（2）备用的搅拌液一同装入喷瓶中，即得用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂。实施例2壳聚糖溶液壳聚糖溶液是按质量比1：8，将壳聚糖、0.2mol/l乙酸溶液进行混合，在温度47℃为水浴锅以250r/min的速率进行搅拌7h，即得壳聚糖溶液。营养液是按重量份数计，取45份水、12份蛋白胨、5份氯化钠、4份牛肉浸出粉进行混合均匀，高温灭菌，即得营养液。液体培养基是按重量份数计，取75份水、25份葡萄糖、12份蛋白胨、12份牛肉膏、5份酵母提取物、5份乙酸钠、2份柠檬酸二铵、1份吐温80、0.7份硫酸镁、0.3份硫酸镁进行混合均匀，高温灭菌，即得液体培养基。二次活化是指再放入活化液中在温度30℃下进行培养22h，活化液是按重量份数计，取75份水、25份水、12份酵母浸粉、5份葡萄糖、0.7份半胱氨酸盐酸盐、0.5份碳酸氢钠、0.09份磷酸氢二钾、0.09份氯化钠、0.009份硫酸镁、0.009份氯化钙进行混合均匀，高温灭菌，即得活化液。一种用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：（1）将山茶根进行切片，在温度55℃下真空干燥22h，粉碎，得粉碎物，按质量比1：3，将粉碎物、石油醚在温度75℃下回流脱脂1h，抽滤，得滤渣，按质量比1：22，将滤渣、蒸馏水进行混合，浸泡5h，再在温度45℃、超声功率800w条件下超声提取15min，减压过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，加入滤液质量3倍的乙醇，在温度3℃下沉化22h，以3500r/min离心9min，得沉淀物，将沉淀物在温度55℃下烘干，得烘干物；（2）按质量比1：6，将烘干物、壳聚糖溶液进行混合，经微孔滤膜过滤，再以进口温度140℃，进料速度5ml/min进行喷雾干燥，得干燥物，按质量比1：5，将干燥物溶于生理盐水中，并以250r/min搅拌均匀，得搅拌液，备用；（3）按质量比1：5，将枯草芽孢杆菌接种于营养液中，在温度36℃、160r/min的条件下摇床培养22h，再二次活化22h，得活化液a，按质量比1：1：5，将嗜酸乳杆菌、粪肠球菌分别接入液体培养基中，再在温度35℃、厌氧条件下培养48h，再二次活化22h，得嗜酸乳杆菌活化液、粪肠球菌活化液，按质量比1：1，将嗜酸乳杆菌活化液、粪肠球菌活化液进行合并，得合并液，按质量比1：2，将活化液a、合并液进行混合，得混合液；（4）按质量比1：1：12，将艾叶、苍术、水进行混合，浸泡22h，在温度75℃回流提取1h，过滤，分离滤液、滤渣，向滤渣中加入滤渣质量5倍的水，并在温度75℃下回流提取1h，过滤，合并滤液，得滤液a，按质量比1：7，将混合液接种至滤液a中，搅拌均匀，得搅拌混合液，按质量比1：1，将搅拌混合液、步骤（2）备用的搅拌液一同装入喷瓶中，即得用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂。实施例3壳聚糖溶液壳聚糖溶液是按质量比1：10，将壳聚糖、0.2mol/l乙酸溶液进行混合，在温度50℃为水浴锅以300r/min的速率进行搅拌8h，即得壳聚糖溶液。营养液是按重量份数计，取50份水、15份蛋白胨、6份氯化钠、5份牛肉浸出粉进行混合均匀，高温灭菌，即得营养液。液体培养基是按重量份数计，取80份水、30份葡萄糖、15份蛋白胨、15份牛肉膏、6份酵母提取物、6份乙酸钠、3份柠檬酸二铵、2份吐温80、0.8份硫酸镁、0.5份硫酸镁进行混合均匀，高温灭菌，即得液体培养基。二次活化是指再放入活化液中在温度32℃下进行培养24h，活化液是按重量份数计，取80份水、30份水、15份酵母浸粉、6份葡萄糖、1份半胱氨酸盐酸盐、0.8份碳酸氢钠、0.1份磷酸氢二钾、0.1份氯化钠、0.01份硫酸镁、0.01份氯化钙进行混合均匀，高温灭菌，即得活化液。一种用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：（1）将山茶根进行切片，在温度60℃下真空干燥24h，粉碎，得粉碎物，按质量比1：4，将粉碎物、石油醚在温度80℃下回流脱脂2h，抽滤，得滤渣，按质量比1：30，将滤渣、蒸馏水进行混合，浸泡6h，再在温度60℃、超声功率1200w条件下超声提取50min，减压过滤，得滤液，将滤液进行减压浓缩，加入滤液质量4倍的乙醇，在温度4℃下沉化24h，以4000r/min离心10min，得沉淀物，将沉淀物在温度60℃下烘干，得烘干物；（2）按质量比1：7，将烘干物、壳聚糖溶液进行混合，经微孔滤膜过滤，再以进口温度160℃，进料速度7ml/min进行喷雾干燥，得干燥物，按质量比1：6，将干燥物溶于生理盐水中，并以300r/min搅拌均匀，得搅拌液，备用；（3）按质量比1：，将枯草芽孢杆菌接种于营养液中，在温度37℃、200r/min的条件下摇床培养24h，再二次活化24h，得活化液a，按质量比1：1：6，将嗜酸乳杆菌、粪肠球菌分别接入液体培养基中，再在温度37℃、厌氧条件下培养48h，再二次活化24h，得嗜酸乳杆菌活化液、粪肠球菌活化液，按质量比1：1，将嗜酸乳杆菌活化液、粪肠球菌活化液进行合并，得合并液，按质量比1：2，将活化液a、合并液进行混合，得混合液；（4）按质量比1：1：15，将艾叶、苍术、水进行混合，浸泡24h，在温度80℃回流提取2h，过滤，分离滤液、滤渣，向滤渣中加入滤渣质量6倍的水，并在温度80℃下回流提取2h，过滤，合并滤液，得滤液a，按质量比2：8，将混合液接种至滤液a中，搅拌均匀，得搅拌混合液，按质量比1：1，将搅拌混合液、步骤（2）备用的搅拌液一同装入喷瓶中，即得用于预防畜禽禽流感的喷雾药剂。对比例：广州某生物科技有限公司生产的预防禽流感的制剂方法：将2000只患有禽流感的肉鸡群，肉鸡群平均年龄为1~2个月，随机分为4组，每组500只。各使用由实施例制备的喷雾药剂和对比例制备的药物，对比例的药物按照其说明使用。实施例制备的喷雾剂，要以每只鸡全身喷洒上药剂为准，圈舍内着重喷洒鸡群聚集处，每日喷洒3次。治疗禽流感的药物的具体检测情况如表1表1检测项目实施例1实施例2实施例3对比例痊愈290301339127好转100112153180无效110138193总有效率（%）7882.688.261.5注：痊愈：患病症状完全消失；好转：各个方面的患病症状有所改善；无效：各个方面的患病症状均无明显改善，病情加重甚至死亡；总有效率：（治愈+好转）/500。试验结束后，检测痊愈肉鸡体内的药物残留量。检测项目实施例1实施例2实施例3对比例残留量（μm）0000.54±0.01由上可知，本发明所制备的治疗禽流感的制剂可以有效的解决禽流感的问题，且治愈有效率高，药物残留量低，制备方法简单易操作，是一种安全且高效的禽流感喷雾的制备方法，值得推广和使用。当前第1页12