用于皮肤保湿或皮肤美白的、含五环三萜咖啡酸酯的组合物的制作方法

本发明涉及用于皮肤保湿或皮肤美白的组合物，所述组合物含有作为活性成分的五环三萜咖啡酸酯。
背景技术：
：已知木槿皮提取物具有抗老化、皮肤美白及皮肤保湿效果。包含在木槿皮提取物中的五环三萜咖啡酸酯已知有抑制脂质过氧化作用及对癌细胞的毒性作用。然而，当将五环三萜咖啡酸酯用于例如在美容组合物中时，并不知晓其皮肤保湿或皮肤美白效果。本发明的发明人已对五环三萜咖啡酸酯的皮肤保湿及皮肤美白效果进行研究并完成本发明。[相关领域参考文献][专利文件]韩国专利公开号10-2010-0059302。韩国专利公开号10-2001-0010240。中国专利公开号cn103342730a。日本专利公开号2007-051101。技术实现要素：[技术问题]本发明的发明人研究五环三萜咖啡酸酯并发现该五环三萜咖啡酸酯具有皮肤保湿及皮肤美白效果。在一方面中，本发明针对提供用于皮肤保湿或皮肤美白的组合物，所述组合物含有作为活性成分的五环三萜咖啡酸酯。[技术方案]在一方面中，本发明提供用于皮肤保湿的组合物，所述组合物含有作为活性成分的五环三萜咖啡酸酯的如下物质中的一种或多种：3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯(3β,23,28-trihydroxy-12-oleanene23-caffeate)、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯(3β,23,28-trihydroxy-12-oleanene3β-caffeate)、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物。在一方面中，本发明提供用于皮肤美白的组合物，所述组合物含有作为活性成分的五环三萜咖啡酸酯的如下物质中的一种或多种：3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物。在本发明的一方面中，该活性成分为3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物。在本发明的一方面中，该活性成分为3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物。在本发明的一方面中，所包含的该活性成分的量占该组合物总重的0.0001wt％-1wt％。在本发明的一方面中，该组合物含有3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物。在本发明的一方面中，该组合物含有重量比为1:0.5-1.5的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物。在本发明的一方面中，用于皮肤保湿的该组合物进一步含有神经酰胺。在本发明的一方面中，该组合物为皮肤外用组合物。在本发明的一方面中，该组合物为美容组合物。[有益效果]根据本发明一方面的组合物具有优异的皮肤保湿效果。根据本发明一方面的组合物具有优异的皮肤美白效果。根据本发明一方面的组合物在施用至皮肤时具有优异的促进玻尿酸合成酶表达的效果。根据本发明一方面的组合物在施用至皮肤时具有优异的促进半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14表达的效果。根据本发明一方面的组合物在施用至皮肤时具有优异的减少黑色素含量的效果。【附图说明】图1及图2显示在本发明的测试实施例1中has及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14表达的评估结果。图3显示本发明的测试实施例2中获得的免疫荧光显微影像。图4显示本发明的测试实施例3中皮肤美白效果的评估结果。【具体实施方式】以下详述本发明。在一方面中，本发明提供用于皮肤保湿的组合物，所述组合物含有作为活性成分的五环三萜咖啡酸酯的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物中的一种或多种。在一方面中，本发明提供用于受试者的皮肤保湿方法，该方法包括：将有效量的五环三萜咖啡酸酯的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物中的一种或多种施用于需要皮肤保湿的受试者的步骤。在一方面，本发明提供五环三萜咖啡酸酯的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物中的一种或多种在制备用于皮肤保湿的组合物中的用途。在一方面，本发明提供用于皮肤保湿的五环三萜咖啡酸酯的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物中的一种或多种。在一方面中，本发明提供皮肤美白的组合物，所述组合物含有作为活性成分的五环三萜咖啡酸酯的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物中的一种或多种。在一方面中，本发明提供用于受试者的皮肤美白方法，该方法包括：将有效量的五环三萜咖啡酸酯的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物中的一种或多种施用于需要皮肤保湿的受试者的步骤。在一方面中，本发明提供五环三萜咖啡酸酯的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物中的一种或多种在制备用于皮肤美白的组合物中的用途。在一方面中，本发明提供用于皮肤美白的五环三萜咖啡酸酯的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物中的一种或多种。在本发明的一方面中，该3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯可由化学式1表示。该化学式1的化合物的cas编号为226406-74-2。[化学式1]在本发明的一方面中，该3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯可由化学式2表示。该化学式2的化合物的cas编号为226406-72-0。[化学式2]在本发明的一方面中，该3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯可由化学式3表示，其中r1为-oh并且r2由化学式4表示。[化学式3][化学式4]在本发明的一方面中，在由化学式3表示的该3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯中，r1可由化学式4表示且r2可为-oh。在本发明中，该化学式1的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯或该化学式2的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯可来源于木槿皮。在本发明中，该“木槿皮”是指干燥的木槿(hibiscussyriacusl.)根皮或茎皮，其锦葵(malvaceae)科中的落叶灌木。在春天阳光下剥离及干燥该根皮或茎皮。其味甜且涩并具有中性特性。其作用在肝脏、脾脏、大肠及小肠。其清除热及毒素、除湿并止痒。此外，其帮助血液循环及止血。其被应用于肠出血、痢疾、脱肛、白带、疥疮、运动员脚、痔疮等。每日3-9g以水煮浓或用酒(liquor)冲泡后作为输液或外用。在本发明中，该“异构体”不仅包含光学异构体(例如，基本上纯的对映异构体、基本上纯的非对映异构体或其混合物)而且包含构象异构体(即仅在一个或多个化学键结角度不同的异构体)、结构异构体(尤其为互变异构体)或几何异构体(例如顺式-反式异构体)。在本发明中，“基本上纯的”意指，举例而言，当与对映异构体或非对映异构体关联使用时，作为该对映异构体或该非对映异构体实施例的特定化合物系依以下量存在：约90％(w/w)或以上，尤其为约95％或以上，更尤其为约97％或以上或约98％或以上，进一步更尤其为约99％或以上，甚至更尤其为约99.5％或以上。在本发明中，该“水合物”指与水结合的化合物。其以广义使用，包含在水与该化合物之间缺少化学键的包合物。在本发明中，该“溶剂合物”是指在溶质分子或离子与溶剂分子或离子之间形成的高级(higher-order)化合物。在本发明的一方面中，该活性成分可为3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物。在本发明的一方面中，该活性成分可为3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物。在本发明的一方面中，所含有的该活性成分的量可占该组合物的总重的0.0001wt％-1wt％。具体而言，用于皮肤保湿的该组合物或用于皮肤美白的该组合物可含有占该组合物的总重的以下量的该活性成分：0.0001wt％或以上，0.0003wt％或以上，0.0004wt％或以上、0.0005wt％或以上、0.0006wt％或以上、0.0007wt％或以上、0.0008wt％或以上、0.001wt％或以上、0.0012wt％或以上、0.0015wt％或以上、0.002wt％或以上、0.005wt％或以上、0.01wt％或以上、0.05wt％或以上、0.1wt％或以上、0.2wt％或以上、0.3wt％或以上、0.4wt％或以上、0.5wt％或以上、或0.7wt％或以上。而且，用于皮肤保湿的该组合物或用于皮肤美白的该组合物可含有占该组合物的总重的以下量的该活性成分：1wt％或以下、0.5wt％或以下、0.1wt％或以下、0.05wt％或以下、0.01wt％或以下、0.005wt％或以下、0.004wt％或以下、0.003wt％或以下、0.002wt％或以下、0.001wt％或以下、0.0008wt％或以下、或0.0005wt％或以下。当该活性成分的含量在上述范围内时，获得优异的皮肤保湿或皮肤美白效果。在本发明的一方面中，该组合物可含有3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物，及3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯、其盐、其异构体、其水合物或其溶剂合物。在本发明的一方面中，该3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯及该3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯可以重量比1:0.5-1.5包含于其中。具体而言，可含有重量比为1:0.6-1.4、1:0.8-1.3、1:0.9-1.2、1:0.9-1.1或1:1的3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯及该3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯。当该3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯及该3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯的重量比在上述范围内时，获得优异的皮肤保湿或皮肤美白效果。在本发明的一方面中，该组合物用于皮肤保湿可进一步含有神经酰胺。在本发明中，该神经酰胺可为选自于由天然神经酰胺及类神经酰胺所组成的群组中的一种或多种。该天然神经酰胺为天然存在的神经酰胺且包含神经酰胺1、神经酰胺2、神经酰胺3、神经酰胺4、神经酰胺5、神经酰胺6、神经酰胺7、神经酰胺8等。该类神经酰胺包含神经酰胺104、神经酰胺102等。在本发明中，该类神经酰胺统称具有层状结构的该天然神经酰胺的化合物。在本发明的一方面中，可包含重量比为1:0.1-1.5的作为该活性成分的五环三萜咖啡酸酯及该神经酰胺。具体而言，该五环三萜咖啡酸酯及该神经酰胺的该重量比可为1:0.15-1、1:0.18-0.9、1:0.19-0.8、1:0.2-0.5或1:0.2。该五环三萜咖啡酸酯及该神经酰胺的重量比在上述范围内时，获得优异的皮肤保湿或皮肤美白效果。在本发明的一方面中，该组合物可为皮肤外用组合物。该皮肤外用组合物可被用作为治疗皮肤干燥或美白皮肤的药学组合物。该皮肤外用组合物为包含任何可由皮肤外部施用组合物的泛称，且多种制剂的化妆品及药品可被包括在其中。该皮肤外用组合物可为，举例而言，用于皮肤保湿或皮肤美白的皮肤外用组合物，但不特别限于此。在本发明的一方面中，该组合物可为美容组合物。该美容组合物的制剂并未特别受限且可依目的适当选择。举例而言，其可被制成选自于由以下所组成的一种或多种制剂：柔肤水(softeninglotion)(护肤水(skinlotion)或乳液(milklotion))、润肤水(nourishinglotion)、精华液(essence)、润肤霜(nourishingcream)、按摩霜(massagecream)、面膜(pack)、胶(gel)、眼霜(eyecream)、眼部精华液(eyeessence)、洁肤霜(cleansingcream)、洁肤泡沫(cleansingfoam)、洁肤水(cleansingwater)、粉末(powder)、美体水(bodylotion)、美体霜(bodycream)、美体油(bodyoil)及美体精华液(bodyessence)，但不限于此。该活性成分的含量不特别受限但可为占该组合物的总重的0.0001wt％-10wt％。当该活性成分的含量满足上述条件，可达到优异效果而无副作用。该美容组合物可进一步含有美容上可接受的赋形剂作为稀释剂、分散剂或载体，使该组合物可被均匀地施用在皮肤上。具体而言，该组合物可为水包油(o/w)乳化液且该乳化液可含有作为赋形剂的至少80wt％的水。然而，不限于此，也可使用任何已知美容上可接受的赋形剂。而且，该美容组合物可含有多种该领域中使用的美容佐剂，诸如脂质、有机溶剂、硅、增稠剂、润滑剂、防晒剂、消泡剂、保湿剂、香料、防腐剂、表面活性剂、填料、螯合剂、阳离子、阴离子、非离子或两性聚合物或其混合物、推进剂、碱化或酸化剂、染料、颜料或纳米颜料(尤其为制备用于通过物理阻隔uv辐射来补充防晒效果的颜料或纳米颜料)或其他常用于美容(尤其用于防晒组合物)的成分。该有机溶剂可为低级醇或多元醇，例如乙醇、异丙醇、丙二醇、甘油、山梨醇等。该脂质可为油、蜡或其混合物、脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪醇、矿脂、石蜡、羊毛脂、氢化羊毛脂或乙酰化羊毛脂。该油可为植物、矿物或合成油且尤其可选自氢化棕榈油、氢化蓖麻油、液体矿脂、液态石蜡、沛希灵油(purcellinoil)，挥发性或不挥发性硅油及异烷烃。以下将通过实施例详述本发明。然而，以下实施例仅用于说明目的，而本发明范围不限于实施例。实施例1-4及比较实施例1将购自kunwhapharmaceutica的、由木槿皮获得的木槿皮提取物用于比较实施例1。将3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯(ptce1)用于实施例1且将3β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯(ptce2)用于实施例2。比较实施例1的提取方法a.将干燥的木槿皮以70％乙醇于50℃提取3小时。b.该提取物使用1.2μm过滤器分离且用于比较实施例1(木槿皮提取物：he)。使用表1的实施例1至2的物质来进行皮肤保湿及皮肤美白测试。[表1]实施例13β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯23-咖啡酸酯，10ppm实施例23β,23,28-三羟基-12-齐墩果烯3β-咖啡酸酯，10ppm实施例35ppm实施例1+5ppm实施例2实施例410ppm实施例1+2ppm神经酰胺pc104(macrocare)测试实施例1：皮肤保湿评估(以实时pcr量化玻尿酸合成酶2(has2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14)has2(透明质酸合成酶2)为产生透明质酸(hyaluronan)或玻尿酸(ha)的基因。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14为参与角质形成细胞最后分化且对于皮肤屏障的形成很重要的蛋白质。在皮肤保湿中，ha填充皮肤而半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14藉由强化皮肤屏障防止水份散失。其还涉及丝聚蛋白(filaggrin)分解及天然保湿因子(nmfs)的产生。比较实施例1及实施例1至3调查has2及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14的表达水平。a.细胞培养hacat细胞系在37℃下，5％co2培养箱内，含10％fbs及链霉素的dmem培养基中培养角质形成细胞(keratinocyte)。在汇合度达到90％后继代培养该细胞。b.实时pcr在a中培养的该hacat细胞以每孔1x104个细胞种在12孔板上。在培养24小时后，以实施例1至3及比较实施例1处理细胞。24小时后，收获该细胞用以提取rna。使用invitrogen的trizol预备的该rna使用invitrogen的superscriptiii进行rt-pcr。使用该获得的cdna及taqman探针进行实时qpcr。使用icycler软件通过测量sybrgreeni荧光变化来分析mrna相对水平。使用由lifetechnologies得到的has2及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14引物(has2：hs00193435_m1，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14：hs00201637_m1)。使用gapdh(甘油醛3-磷酸脱氢酶)作为内标准来校正该基因的量化的表达水平。has及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14基因的表达水平分别示于图1及2。如图1及图2可见，经实施例1至3处理的组显示优异的皮肤保湿效果，因为相较于未经处理组，has及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14基因的表达水平较高。尤其实施例3显示最高的has及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14基因表达水平。此外，相较于比较实施例1的木槿皮提取物(he)，经实施例1-3处理的组显示显著增加的has及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶14基因表达。测试实施例2：皮肤保湿的评估实施例1及实施例4的皮肤保湿效果通过丝聚蛋白的免疫荧光染色及显像来评估，已知丝聚蛋白为重要的皮肤保湿因子。人造皮肤(amorereskintm)的表面经2ppm神经酰胺pc104、实施例1及实施例4处理4天然后进行免疫荧光染色。如下进行该免疫荧光染色。免疫荧光染色的方法i.将人造皮肤浸在oct溶液中(最佳切割温度，tissuetek)且储存在-70℃。ii.使用低温切片机(cryotome)将该人造皮肤制成10-μm厚区段且固定在载玻片(slide)上。iii.用pap笔在该人造皮肤上画线。iv.于室温干燥该载玻片至少8小时。v.以pbs清洗该人造皮肤区段并溶解在oct溶液中。vi.该人造皮肤区段经阻断液(含1％bsa的pbs)处理30分钟。vii.该区段经抗-丝聚蛋白抗体(ab24584,abcam)处理2小时。viii.该区段经以1:200稀释于阻断液的texasred抗-兔抗体(t6391,lifetechnologies)处理1小时。ix.以dapi(4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole))染色该区段5分钟。x.以pbs清洗该区段3次。xi.去除pbs后，加入固定液(mountingsolution)并盖上盖玻片，使该人造皮肤区段固化。xii.在lsm510显微镜下观察该区段。结果显示于图3中。在图3的原始影像中，该丝聚蛋白显示为蓝色。在图3的灰阶影像中，该原始影像中的蓝色区域被转换成白色区域。因此，该丝聚蛋白在图3的灰阶影像中显示为白色。由图3可见，在实施例1及4中，显示为白色的该丝聚蛋白明显增加。因此，因为在实施例1及4中该丝聚蛋白增加而确认皮肤保湿效果有改善。测试实施例3:皮肤美白评估(使用b16黑色素瘤细胞的黑色素试验)b16黑色素瘤细胞以每孔1.5x105个细胞种在12孔板上并培养24小时。以实施例1至3、比较实施例1或正对照处理后，将该细胞培养6天，每3天更换一次新鲜培养基。在经该测试物质处理后，该细胞经dpbs清洗，接着在加入2nnaoh(10％dmso)后于60℃裂解1小时。该细胞培养及该细胞裂解物移入96孔板中而在475nm测量吸亮度。然后，由合成黑色素标准曲线计算黑色素含量。将计算出的各测试组的黑色素含量归一化成总蛋白量然后与对照组比较。结果示于图4中。由图4可见，相较于比较实施例1及正对照组，实施例1至3显示优异的皮肤美白效果。以下通过制剂实施例详述本发明。然而，以下实施例仅用于说明目的，而本发明范围不限于实施例。[制剂实施例1]柔肤水(护肤水)[表2]成分含量(wt％)实施例1、实施例2或实施例30.001甘油3.0丁二醇2.0丙二醇2.0羧乙烯聚合物(carboxyvinylpolymer)0.1peg-12壬基苯基醚(nonylphenylether)0.2聚山梨醇酯800.4乙醇10.0三乙醇胺0.1防腐剂、颜料及香料适量纯水余量[制剂实施例2]润肤露(乳液)[表3][制剂实施例3]润肤霜[表4][制剂实施例4]按摩霜[表5][制剂实施例5]面膜[表6]成分含量(wt％)实施例1、实施例2或实施例30.001甘油4.0聚乙烯醇15.0玻尿酸5.0β-葡聚醣7.0尿囊素(allantoin)0.1壬基苯基醚0.4聚山梨醇酯601.2乙醇6.0防腐剂、颜料及香料适量纯水余量[制剂实施例6]软膏[表7]虽然已显示并描述例示实施例，但是本领域技术人员将可理解在不背离所附权利要求限定的本说明书精神及范围的情况下可对形式及细节进行各种改变。当前第1页12