丝胶蛋白微囊及一步法制备方法与流程

本发明属于医药及美容护肤领域，具体地涉及一种丝胶蛋白微囊的一步法制备方法。

背景技术：

蚕丝蛋白来源广泛、价优，且具有极佳的生物相容性及生物可降解性，在组织工程、再生医学及药物递送领域受到越来越多的关注。丝胶蛋白是蚕丝蛋白中的一种，具有多样的功能基团，利于与带电荷的分子结合，可用于制备多种药物载体(Lamboni,L.；Gauthier,M.；Yang,G.；Wang,Q.,Biotechnol.Adv.2015,33(8),1855-1867.)。此外，研究表明丝胶蛋白展示出活性氧清除、抗酪氨酸酶、抗弹性蛋白酶及免疫调节活性，有望用于化妆品及皮肤用品中抗衰老及对抗皮肤炎症等方面(Chlapanidas,T.；Faragò,S.；Lucconi,G.；Perteghella,S.；Galuzzi,M.；Mantelli,M.；Avanzini,M.A.；Tosca,M.C.；Marazzi,M.；Vigo,D.；Torre,M.L.；Faustini,M.,Int.J.Biol.Macromol.2013,58(Supplement C),47-56)。丝胶蛋白凝胶可以降低皮肤电阻抗，提高羟脯氨酸水平，提升上层皮肤平滑度，是良好的保湿剂(Padamwar,M.N.；Pawar,A.P.；Daithankar,A.V.；Mahadik,K.R.,J.Cosmet.Dermatol.2005,4(4),250-257)。基于上述优势，丝胶蛋白在制药、生物医学、化妆品、食品行业均有广泛的应用。

中空结构的载体在药物传递、生物反应器、生物传感器等领域具有广泛的应用。其中，微囊类载体受到了越来越多的关注(ZL201410066374.3；Du,B.；Wang,J.；Zhou,Z.；Tang,H.；Li,X.；Liu,Y.；Zhang,Q.Chem.Commun.,2014,50,4423-4426.)。尽管基于丝胶蛋白的药物载体有微纳米粒子、膜、凝胶等多种形式，然而对丝胶蛋白微囊的研究相对较少。Liu等取一定比例的丝胶蛋白溶液和CaCl2溶液混合，调节pH到7.4，放置于37℃恒温培养箱中孵育24小时，制备不同形状的丝胶蛋白微囊，用于药物载体(Liu,Z.；Cai,Y.；Jia,Y.；Liu,L.；Kong,X.；Kundu,S.C.；Yao,J.,Macromol.Rapid Commun.2014,35(19),1668-1672,Yang,Y.；Cai,Y.；Sun,N.；Li,R.；Li,W.；Kundu,S.C.；Kong,X.；Yao,J.,Colloids Surf.B Biointerfaces 2017,151(Supplement C),102-111.)，然而制备过程耗时较长。尽管多种方法用于制备蛋白质微囊，然而高效快捷、环境友好的制备仍极具挑战。

1,3-丁二醇具有良好的保湿性及一定的抗菌性能，常用于药物制剂及化妆品，主要包括局部药物制剂、低刺激皮肤护理用品等(Aizawa,A.；Ito,A.；Masui,Y.；Ito,M.,J.Dermatol.2014,41(9),815-816.)。将其用于微囊类载体的加工制备还未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种丝胶蛋白微囊。

本发明的第二个目的是提供一种丝胶蛋白微囊的一步法制备方法。

本发明的第三个目的是提供一种丝胶蛋白微囊的应用。

本发明的技术方案概述如下：

一种丝胶蛋白微囊的一步法制备方法，其特征在于包括如下步骤：

将丝胶蛋白粉与1,3-丁二醇混合，使丝胶蛋白粉的浓度为1-100mg/mL，搅拌条件下，120℃保持15-120min，水洗，得到丝胶蛋白微囊。

上述方法制备的丝胶蛋白微囊。

上述丝胶蛋白微囊在制备载功效组份微囊中的应用。

所述功效组份为蛋白或多糖。

本发明的丝胶蛋白微囊是一种中空微囊，经一步法合成，无需交联剂，可负载生物大分子类药物或其他功效组份。制备工艺普适性强，易于操作，省时节能，适合于规模化生产，而且所用材料具有良好的生物相容性、生物可降解性。本发明更适合在功效组份载体、靶向递送及护肤美容领域中应用。

附图说明

图1为实施例1制备的丝胶蛋白微囊的光镜照片。

图2为实施例1制备的丝胶蛋白微囊在FITC-dextran 2000KDa溶液中的共聚焦显微镜照片。

图3为实施例1制备的丝胶蛋白微囊在FITC-BSA溶液中的共聚焦显微镜照片。

图4为实施例4制备的丝胶蛋白微囊的光镜照片。

图5为实施例5制备的丝胶蛋白微囊的光镜照片。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，本发明的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，但并不对本发明作任何限制。

实施例1

一种丝胶蛋白微囊的一步法制备方法，包括如下步骤：

将1g丝胶蛋白粉与100mL 1,3-丁二醇混合，搅拌条件下，120℃保持30min，水洗三次，得到丝胶蛋白微囊悬液。

将上述丝胶蛋白微囊悬液滴在玻璃片上，光镜下拍照，见图1。

实施例2

将0.5mL实施例1制备的丝胶蛋白微囊悬液放入容器中，加入0.5mL质量浓度为2mg/mL的FITC标记的葡聚糖水溶液(葡聚糖分子量为2000kDa，简称：FITC-dextran 2000K Da)，混合得混合液，30min后置于共聚焦显微镜下拍照(见图2)。微囊内部有与外部溶液相同强度的荧光信号，可知分子量为2000kDa的葡聚糖可以通过丝胶蛋白微囊壁的孔洞，进入微囊内部，所得丝胶蛋白微囊可以用于葡聚糖的包载。

实施例3

将0.5mL实施例1制备的丝胶蛋白微囊悬液放入容器中，加入0.5mL质量浓度为2mg/mL的FITC标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)水溶液，混合得混合液，30min后置于共聚焦显微镜下拍照(见图3)。大部分微囊内部有与外部溶液相同强度的荧光信号，可知BSA可以通过丝胶蛋白微囊壁的孔洞，进入微囊内部，所得丝胶蛋白微囊可以用于BSA的包载。

此外，由于本领域公知，模型药物葡聚糖是多糖的代表，模型药物BSA是蛋白的代表，本发明的丝胶蛋白微囊可以作为多糖类药物及蛋白类药物的载体。

实施例4

一种丝胶蛋白微囊的一步法制备方法，包括如下步骤：

将30mg丝胶蛋白粉与30mL 1,3-丁二醇混合，搅拌条件下，120℃保持15min，水洗三次，得到丝胶蛋白微囊悬液。

将上述丝胶蛋白微囊悬液滴在玻璃片上，光镜下拍照，见图4，其形态与实施例1的形态相似。

实施例5

一种丝胶蛋白微囊的一步法制备方法，包括如下步骤：

将1g丝胶蛋白粉与100mL 1,3-丁二醇混合，搅拌条件下，120℃保持120min，水洗三次，得到丝胶蛋白微囊悬液。

将上述丝胶蛋白微囊悬液滴在玻璃片上，光镜下拍照，见图5，其形态与实施例1的形态相似。

实施例6

一种丝胶蛋白微囊的一步法制备方法，包括如下步骤：

将1g丝胶蛋白粉与10mL 1,3-丁二醇混合，搅拌条件下，120℃保持30min，水洗三次，得到丝胶蛋白微囊悬液。

将上述丝胶蛋白微囊悬液滴在玻璃片上，光镜下拍照，其形态与实施例1的形态相似。