本发明属于阴道栓剂领域，涉及一种阴道膨胀栓及其制备方法，具体涉及一种两性霉素b阴道膨胀栓及其制备方法。
背景技术：
阴道炎是常见的妇科疾病，严重影响女性正常的工作生活。真菌性阴道炎是由白色念珠菌引起的，念珠菌又称假丝酵母菌，是真菌中最常见的条件致病菌。目前常用的给药剂型包括栓剂、片剂、软膏、凝胶类半固体制剂、洗剂和喷雾剂等溶液剂。栓剂可直接作用于患处，提高局部药物浓度，降低全身毒副作用，是理想的给药方式。
现已报道多种治疗念珠菌的阴道膨胀栓。cn103784390a公开了一种塞克硝唑阴道膨胀栓及其制备方法和检测方法，所述膨胀栓包括塞克硝唑、基质和膨胀载体。cn103735493a公开了一种黄藤素阴道膨胀栓及其制备方法和检测方法，该膨胀栓包括微粉化的黄藤素及基质形成的含药基质和膨胀载体。但所述栓剂容易引起真菌抗药性，从而降低疗效。两性霉素b属一种多烯类光谱抗真菌抗生素，与真菌细胞膜磷脂双分子层上的甾醇发生交互作用，导致细胞膜产生水溶性孔道，细胞膜通透性改变，使得细胞内容物流失而造成菌体死亡。在临床应用方面，两性霉素b的耐药菌株少见，与其他常用的唑类药物相比，白色念珠菌对两性霉素b的敏感度更高，因此，两性霉素b可有效治疗真菌性阴道炎。cn105616353a公开了一种用于阴道给药的温敏型两性霉素b纳米凝胶泡沫剂，由抗真菌药物两性霉素b、稳定剂磷脂和温敏性基质材料泊洛沙姆组成。现有报道将两性霉素b以泡腾片用于治疗真菌性阴道炎，但泡腾片本身面临崩解超限，黏冲和产品不稳定的问题，限制药效发挥，严重影响疗效。
因此，提供一种疗效稳定，能有效对抗真菌性阴道炎的两性霉素b栓剂在阴道膨胀栓领域具有重要意义和广阔应用前景。
技术实现要素：
针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供一种两性霉素b阴道膨胀栓及其制备方法。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种两性霉素b阴道膨胀栓，所述膨胀栓包括两性霉素b、乳酸链球菌素、基质和可膨胀的膨胀载体，所述膨胀栓各成分的重量份数为：
本发明发现，两性霉素b与乳酸链球菌素协同增效，乳酸链球菌素本身具有杀菌作用，是天然的防腐剂，无毒副作用，在防止栓剂腐败变质的同时，可以促进两性霉素b的杀菌作用，协同抗菌，提高两性霉素b的生物利用度。
所述两性霉素b为10-25份，例如可以是10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份、20份、21份、22份、23份、24份或25份。
所述乳酸链球菌素为0.5-5份，例如可以是0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份或5份。
所述基质为120-280份，例如可以是120份、125份、130份、140份、150份、160份、170份、180份、190份、200份、210份、220份、230份、240份、250份、260份、270份、275份或280份。
所述膨胀载体为100-200份，例如可以是100份、105份、110份、120份、130份、140份、150份、160份、170份、180份、190份、195份或200份。
优选地，所述膨胀栓还包括乳杆菌。
本发明中，所述两性霉素b在本发明所述的重量份数配比下不影响嗜酸乳杆菌、拉曼乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和保加利亚乳杆菌的活性，但可以杀灭阴道内有害菌。
优选地，所述乳杆菌占所述膨胀栓的重量份数为1-10份，例如可以是1份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份或10份，优选为3-8份。
优选地，所述乳杆菌包括嗜酸乳杆菌、拉曼乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和保加利亚乳杆菌组成。
优选地，所述嗜酸乳杆菌、拉曼乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和保加利亚乳杆菌的重量比为(1-5):(3-8):(2-4):(5-10)，例如可以是1:3:2:5、3:5:3:8、4:5:3:7、5:7:4:6、2:6:3:9或3:4:4:7，优选为3:5:3:8。
本发明发现，在所述乳杆菌种类及组成配比下可以与乳酸链球菌素协同增效，调节阴道菌群，保持有益菌的优势地位，增强阴道免疫力与自愈能力，有效防治细菌性阴道炎。
优选地，所述基质包括合成脂肪酸酯、天然脂肪酸酯、类脂类基质、水溶性基质、氢化油或分馏油中的任意一种或至少两种的组合，所述组合例如可以是合成脂肪酸酯和天然脂肪酸酯的组合，类脂类基质和水溶性基质的组合，合成脂肪酸酯、类脂类基质和分馏油的组合，或类脂类基质、水溶性基质和氢化油的组合，优选为类脂类基质、水溶性基质和氢化油的组合。
优选地，所述类脂类基质、水溶性基质和氢化油的重量比为(1-5):(3-8):(1-4)，例如可以是1:3:1、2:5:3、3:4:2、4:6:3、5:8:4、3:5:2或2:7:3，优选为3:5:2。
本发明发现，所述基质包括为类脂类基质、水溶性基质和氢化油的组合，且所述组合的比例为3:5:2时理化性质最稳定，润湿与乳化效果最佳，促进两性霉素b的释放与药效发挥。
优选地，所述合成脂肪酸酯为混合脂肪酸甘油酯、硬脂酸丙二醇酯、硬化油、半合成脂肪酸甘油酯、半合成椰油酯、witepsol、半合成棕榈油酯或半合成山苍子酯中的任意一种或至少两种的混合物，所述混合物例如可以是混合脂肪酸甘油酯和硬化油，硬脂酸丙二醇酯和半合成脂肪酸甘油酯，或半合成椰油酯、witepsol和半合成山苍子酯。
优选地，所述天然脂肪酸酯为乌桕脂、香果脂、茴香脂、柯克姆脂或可可豆脂中任意一种或至少两种的混合物，所述混合物例如可以是乌桕脂和柯克姆脂，香果脂和柯克姆脂，或香果脂、茴香脂和可可豆脂。
优选地，所述类脂类基质为羊毛脂和/或羊毛醇，优选为羊毛醇。
优选地，所述水溶性基质为聚乙二醇400、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、甘油明胶、聚氧乙烯单硬脂酸酯或泊洛沙姆中的任意一种或至少两种的混合物，所述混合物例如可以是聚乙二醇400和聚乙二醇1500的组合，聚乙二醇4000和甘油明胶的组合，聚乙二醇6000和泊洛沙姆的组合，聚乙二醇6000、甘油明胶和聚氧乙烯单硬脂酸酯的组合，聚乙二醇400、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000和泊洛沙姆的组合，优选为聚乙二醇4000。
优选地，所述氢化油为氢化植物油、氢化花生油、氢化蓖麻油或氢化棉籽油中的任意一种或至少两种的混合物，所述混合物例如可以是氢化植物油和氢化蓖麻油的混合物，氢化花生油和氢化棉籽油的混合物，或氢化植物油、氢化花生油和氢化蓖麻油的混合物。
优选地，所述分馏油为分馏棕榈油和/或分馏椰子油。
优选地，所述基质还包括乳化剂和/或缓释剂。
优选地，所述基质按重量份数包括10-20重量份的乳化剂和30-50重量份的缓释剂。
所述乳化剂的重量份数为10-20份，例如可以是10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份或20份。
所述缓释剂的重量份数为30-50份，例如可以是30份、32份、34份、35份、36份、38份、39份、40份、42份、43份、44份、46份、47份、48份、49份或50份。
本发明发现，基质中包括乳化剂和缓释剂，并且所述乳化剂和缓释剂按照所述重量份数进行组合可以稳定药剂成分，控制释药速度，促进药效发挥，增加两性霉素b在基质中的分散均匀度，提高栓剂的生物利用度。
优选地，所述乳化剂包括硬脂酸、硬酯酸铝或单硬酯酸甘油酯中的任意一种或至少两种的组合，例如可以是硬脂酸和硬脂酸铝的组合，硬脂酸铝和单硬脂酸甘油酯的组合，或硬脂酸、硬脂酸铝和单硬脂酸甘油酯的组合，优选为硬脂酸和单硬酯酸甘油酯的组合，所述硬脂酸和单硬酯酸甘油酯的重量比为(3-6):(1-3)，例如可以是3:1、4:3、5:2、6:1、3:3或6:3。
优选地，所述缓释剂包括羟丙基纤维素、海藻酸钠、槐豆胶或月桂醇中的任意一种或至少两种的混合物，例如可以是羟丙基纤维素和海藻酸钠的混合物，槐豆胶和月桂醇的混合物，或海藻酸钠、槐豆胶和月桂醇的混合物，优选为羟丙基纤维素和海藻酸钠的组合，所述羟丙基纤维素和海藻酸钠的重量比为(2-6):1例如可以是2:1、3:1、4:1、5:1或6:1。
优选地，所述阴道膨胀栓，所述膨胀载体包括棉条、无纺布或弹性纤维中的任意一种或至少两种的组合，所述组合例如可以是棉条和无纺布，或棉条和弹性纤维，优选为棉条。
作为优选技术方案，所述阴道膨胀栓包括如下组分：
第二方面，本发明提供了一种制备如第一方面所述两性霉素b阴道膨胀栓的方法，包括如下步骤：
(1)含药基质的制备：
a)将乳化剂和缓释剂置于水浴中混合，制得油相；
b)将含有两性霉素b和乳酸链球菌素的混合液作为水相分散于步骤a)的油相中，获得预乳液；
c)将步骤(b)得到的预乳液进行快速膜乳化，过微孔膜，得到含药基质；
(2)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，附着定型，制得栓剂。
优选地，所述步骤b)中的混合液还包括乳杆菌。
优选地，所述过微孔膜的压力为0.1-2mpa，例如可以是0.1mpa、0.3mpa、0.5mpa、0.6mpa、0.7mpa、0.9mpa、1.0mpa、1.2mpa、1.4mpa、1.5mpa、1.6mpa、1.8mpa或2.0mpa。
优选地，所述过微孔膜的孔径为0.3-5μm，例如可以是0.3μm、0.5μm、0.7μm、1.0μm、1.2μm、1.4μm、1.6μm、1.8μm、2.0μm、2.3μm、2.5μm、2.7μm、3.0μm、3.2μm、3.5μm、3.7μm、4.0μm、4.3μm、4.5μm、4.7μm或5.0μm，优选为0.5-3μm。
本发明发现，微孔膜的孔径大小在所述范围内时，过膜后得到的药物基质的直径大小适宜，药物释放速度缓慢，延长局部给药时间，增加疗效。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明将两性霉素b用于栓剂剂型，避免对肠胃造成损伤，缓释给药延长药物作用时间，组合使用两性霉素b和乳酸链球菌素，协同增效，促进药效发挥，有效对抗真菌性、细菌性阴道炎，降低两性霉素b的副作用；
(2)本发明配合使用多种乳杆菌，调节阴道菌群环境，增强阴道自愈能力，在所述乳杆菌的组合配方下，有效增加阴道有益菌，调节ph，抑制致病菌的生长和繁殖，有效预防细菌性阴道炎；
(3)本发明所述基质的组合配方能有效维持栓剂的剂型与润泽度，在乳化剂和缓释剂的配合下，所述两性霉素b阴道膨胀栓成分稳定，药物释放速度适中，增加药物的生物利用度，并通过所述孔径范围的微孔膜，调节药物的释放速率，延长药物作用于患处的时间，可有效治疗阴道炎。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
实施例1
制备方法：
(1)含药基质的制备：
a)将乳化剂和缓释剂置于水浴中混合，制得油相；
b)将含有两性霉素b和乳酸链球菌素的混合液作为水相分散于步骤a)的油相中，获得预乳液；
c)将步骤(b)得到的预乳液进行快速膜乳化，0.1mpa过微孔膜，孔径为1.5μm，得到含药基质；
(2)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，附着定型，制得栓剂。
实施例2
制备方法：
(1)含药基质的制备：
a)将乳化剂和缓释剂置于水浴中混合，制得油相；
b)将含有两性霉素b和乳酸链球菌素的混合液作为水相分散于步骤a)的油相中，获得预乳液；
c)将步骤(b)得到的预乳液进行快速膜乳化，2mpa过微孔膜，孔径为0.3μm，得到含药基质；
(2)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，附着定型，制得栓剂。
实施例3
制备方法：
(1)含药基质的制备：
a)将乳化剂和缓释剂置于水浴中混合，制得油相；
b)将含有两性霉素b和乳酸链球菌素的混合液作为水相分散于步骤a)的油相中，获得预乳液；
c)将步骤(b)得到的预乳液进行快速膜乳化，1mpa过微孔膜，孔径为5μm，得到含药基质；
(2)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，附着定型，制得栓剂。
实施例4
制备方法：
(1)含药基质的制备：
a)将乳化剂和缓释剂置于水浴中混合，制得油相；
b)将含有两性霉素b和乳酸链球菌素的混合液作为水相分散于步骤a)的油相中，获得预乳液；
c)将步骤(b)得到的预乳液进行快速膜乳化，0.5mpa过微孔膜，孔径为0.5μm，得到含药基质；
(2)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，附着定型，制得栓剂。
实施例5
制备方法：
(1)含药基质的制备：
a)将乳化剂和缓释剂置于水浴中混合，制得油相；
b)将含有两性霉素b和乳酸链球菌素的混合液作为水相分散于步骤a)的油相中，获得预乳液；
c)将步骤(b)得到的预乳液进行快速膜乳化，1.5mpa过微孔膜，孔径为3μm，得到含药基质；
(2)将含药基质倒入栓模中，插入膨胀载体，附着定型，制得栓剂。
实施例6
制备方法同实施例1。
实施例7
制备方法同实施例1。
实施例8
制备方法同实施例1。
实施例9
制备方法同实施例1。
实施例10
制备方法同实施例1。
实施例11
制备方法同实施例1。
实施例12
制备方法同实施例1。
实施例13
制备方法同实施例1。
实施例14
制备方法同实施例1。
实施例15
制备方法同实施例1。
实施例16
制备方法同实施例1。
实施例17
制备方法同实施例1。
实施例18
制备方法同实施例1。
实施例19
制备方法同实施例1。
实施例20
制备方法同实施例1。
实施例21
制备方法同实施例1。
实施例22
制备方法同实施例1。
实施例23
制备方法同实施例1。
实施例24
与实施例1相比，过微孔膜压力为3mpa，其他组分与制备方法同实施例1。
实施例25
与实施例1相比，微孔膜孔径为0.1μm，其他组分与制备方法同实施例1。
实施例26
与实施例1相比，微孔膜孔径为3.5μm，其他组分与制备方法同实施例1。
对比例1
与实施例1相比，不添加两性霉素b，并且类脂类基质、水溶性基质和氢化油的重量份数调整到198g，其他的组分和制备方法同实施例1。
对比例2
与实施例1相比，不添加乳酸链球菌素，并且类脂类基质、水溶性基质和氢化油的重量份数调整到192g，其他的组分和制备方法同实施例1。
对比例3
与实施例1相比，两性霉素b添加量为5g，并且类脂类基质、水溶性基质和氢化油的重量份数调整到193g，其他的组分和制备方法同实施例1。
对比例4
与实施例1相比，两性霉素b添加量为30g，并且类脂类基质、水溶性基质和氢化油的重量份数调整到168g，其他的组分和制备方法同实施例1。
对比例5
与实施例1相比，乳酸链球菌素的添加量为10g，并且类脂类基质、水溶性基质和氢化油的重量份数调整到172g，其他的组分和制备方法同实施例1。
临床试验
一、研究方法
研究方案参照中华人民共和国卫生部新药临床指导原则有关“妇产科生殖道炎症局部用药的临床验证”内容而制定。
1.试验病例：收治患者共168例，均经妇科检查确诊细菌性阴道炎患者84例，真菌性阴道病患者84例，年龄均在18-62岁之间，排除妊娠和哺乳期患者；
2.诊断标准：
症状：外阴瘙痒、灼痛，或伴有尿频、尿急、尿痛；
妇科检查：细菌性阴道炎分泌物质匀，稀薄，有鱼腥味；念珠菌性外阴阴道病，有较多的白色豆渣样白带；
实验室检查：细菌性阴道炎在分泌物中显微镜下可发现线索细胞，真菌性阴道病，涂片检测，显微镜下找假菌丝，阳性率可达60％；
3.分组及给药：将84例细菌性阴道炎，随机分成治疗组69例和对照组15例；将84例真菌性阴道病患者，随机分成治疗组69例和对照组15例；以上治疗组分别给予实施例1-23的阴道膨胀栓，每组三人，对照组分别给与对比例1-5的阴道膨胀栓，每组三人；
4.观察项目
4.1治疗性观察
(1)症状；
(2)妇科检查：包括外阴、阴道、宫颈及阴道分泌物检查；
(3)实验室检查：对阴道分泌物检查，包括镜下、涂片；
(4)细菌培养；
4.2安全性观察
(1)一般体检项目；
(2)血、尿、便常规化验；
(3)心、肝、肾功能检查；
4.3不良反应观察
在用药期间出现的任何异常症状，体征，实验室检查，都应认真分析，仔细鉴别；
5.疗效评定标准：
痊愈：症状消失，妇科检查及实验室检查正常；
显效：症状明显减轻，妇科检查和实验室检查明显好转；
有效：症状有所减轻，妇科检查和实验室检查有所好转；
无效：治疗后较治疗前无变化；
6.治疗结果：患者均给药4个疗程后，治疗效果如表1所示。
表1
由表1可以看出，两性霉素b阴道膨胀栓对细菌性阴道炎和真菌性阴道炎都有很好的疗效。比较实施例1与对比例1-5可知，两性霉素b和乳酸链球菌素的组合配比对治疗阴道炎的重要作用，缺一不可，两者协同增效。比较实施例1与实施例6-11可知，乳杆菌的加入可有效调节阴道菌群，增加阴道自愈能力，且在本发明所述组成配比条件下，效果最佳。比较实施例1与实施例12-23可知，基质的选择与比例对两性霉素b阴道膨胀栓发挥药效的影响，在本发明所述的基质种类和配比下可以有效促进药物均匀分散，提高生物利用度。比较实施例1与实施23-26可知，微孔膜的孔径以及过膜压力都影响药物的定型与药效发挥。
综上，本发明的两性霉素b阴道膨胀栓，通过组合利用两性霉素b、乳酸链球菌素和乳杆菌等有效成分，使各组分间发挥协同作用，组合使用基质、乳化剂和缓释剂，提高药物分散度和生物利用度，有效治疗细菌性阴道炎和真菌性阴道炎。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。