本发明属于生物医药领域，涉及一种降血糖有效部位的提取纯化技术，具体是涉及一种中药血见愁中降血糖有效部位的提取纯化技术。
背景技术
中药来自植物、动物、矿物，是药物的重要组成部分。早在商代初期，人们就从中药中提取制备有效部位，用于防病治病，如中药煎汤内服或外用；明代《本草纲目》详细记载了用升华法等制备、纯化樟脑的过程；《白猿记》记述了从新鲜草乌中提取分离得到结晶形乌头碱的方法；《医学入门》中记载了用发酵法从五倍子中制备没食子酸的过程，这是世界上最早制备有机酸的记载。这些都说明了我国古代药学家在中药化学领域的突出贡献。据国外文献记载，1805年德国药师塞图尔从阿片中提取的吗啡碱，被认为是中药中第一个天然活性成分；20世纪50年代初，从印度民间草药萝芙木中发现了降压成分利血平；20世纪50年代末期，从长春花中得到了抗癌成分长春花碱；特别是紫杉醇的问世被誉为20世纪90年代国际上抗癌三大成就之一，是一种非常有发展前途的抗癌新药。近几十年来，随着先进的科学技术、分离分析方法的不断发展，各种色谱技术的广泛应用，中药化学成分的提取、分离和纯化技术也有了很大进步，亲水性成分、微量成分、类似结构的复杂混合物成分的分离已经不再困难；同时红外、核磁共振、质谱的等波谱新技术的问世，使结构鉴定工作趋向微量、快速和准确，研究中药化学成分的周期大大缩短。
据文献报道，目前我国有中草药资源8000多种，少数民族用药3000多种，其中绝大部分是植物药，少数为动物药和矿物药，如此丰富的资源为进一步开发中药有效成分提供了雄厚的物质基础。但是建国前，受整个国家的经济实力及科学技术综合发展水平等条件的限制，中药化学研究基本没有什么突破，更没有建立起中药化学制药工业。建国以来，尤其近一、二十年来，与其它各项科学事业一样，中药化学迎来了蓬勃发展的新时代。麻黄素、芦丁、西地兰等十几种中药产品的工业生产已经进行多年，甾体激素类药物的原料——薯芋皂苷元的工业生产及其资源开发研究更取得巨大的成就，不仅保证国内需要，还有大量出口。文献报道，目前已在涉及到的500多种药材中，发现了8000多种化合物。除原有的中国科学院上海药物研究所、昆明植物所、中国医学科学院药物研究所及药用植物资源开发所外，全国各地的医药院校、卫生部门几乎也都普遍设立了从事中药化学的研究机构。中药化学在中药现代化的进程中发挥着前所未有的作用，并成为医药高等院校的必修课程。近十年来，随着对外开放政策的贯彻执行，大大地推动了我国科学界与国外同行间的学术交流及人员交往，中药化学则是在药学及化学领域中与国外人员交往最为频繁、学术交流最为活跃的一个学科。这对提高我国研究水平，促进研究队伍的成长起到了重要作用。目前，我国中药化学研究工作的步伐已经大大加快，研究水平也有很大提高，加上我国丰富的资源，相信在21世纪一定能对人类的健康事业作出更大的贡献。
糖尿病是一种由于胰岛素分泌不足或外周组织对胰岛素不敏感引起的代谢性疾病，以持续的高血糖状态为特征，并可能引起各种组织、脏器（如眼、肾、心脏、血管、神经等）的长期损害、功能不全或衰竭。根据发病机制不同，糖尿病可以被分为ⅰ型糖尿病、ⅱ型糖尿病、妊娠糖尿病和其他类型糖尿病。据统计，2015年全球20-79岁的人中有约4.15亿人患糖尿病（患病率8.8%），另外有3.18亿人糖耐量受损（前期患病率6.7%）。中国是全球糖尿病患者第一大国，2015年病患人数高达1.096亿人，130万人死于糖尿病及其并发症。同时据idf预测，如果不加干预，2040年全球糖尿病患者将达6.42亿，糖尿病前期人群4.81亿，我国患者数量将上升至1.54亿。据统计，目前在糖尿病患者中存在“1/2定律”，即全球糖尿病患者中平均而言仅有50%得知自己已患病。根据2013年宁光教授发表在jama上的流行病学研究显示，我国糖尿病病患知晓率仅为30.1%。同时，中国成年人中“准糖尿病患者”人群可能高达50.1%。而在美国，根据2014年cdc的调查数据显示，成年人中“准糖人”的比例为37%。
目前尚未有完全根治糖尿病的办法，控制血糖是糖尿病治疗的核心。对于糖尿病患者而言，疾病的治疗是一个综合管理的过程，需要饮食、运动、药物、血糖监测和健康教育“五架马车”并驾齐驱。
血见愁（teucriumviscidum）是唇形科香科科属植物，《中药大辞典》称山藿香（teucriumviscidum）。辛、凉。有凉血散瘀，消肿解毒的功效。国内分布于江苏、江西、浙江、福建、台湾、湖南、广东、广西、四川、云南、西藏等地。全草入药，各地广泛用于风湿性关节炎、跌打损伤、肺脓疡、急性胃肠炎、消化不良、冻疮肿痛、翠丸陉肿、吐血、衄血、外伤出血、毒蛇咬伤、疗疮疖肿等症。据《岭南采药录》载：“凉血解毒，去瘀生新，理跌打，敷疮毒，治蛇伤，消肠风下血”。
国内外尚未见血见愁中降血糖有效部位提取纯化技术的相关文献或专利等报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种血见愁中降血糖有效部位的提取纯化技术。本发明是通过如下技术方案实现的：
本发明所用血见愁（teucriumviscidum）是唇形科香科科属植物，《中药大辞典》称山藿香（teucriumviscidum）。
一种降血糖有效部位的提取纯化技术，是通过如下步骤实现的:
（1）取血见愁，粉碎成粗粉，用水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，水用量为血见愁总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液a；提取后的药渣再用水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，水用量为血见愁总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液b；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液e；
（2）将步骤（1）得到的提取液a在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.20的浓缩液a，将步骤（1）得到的提取液b在80℃减压浓缩，浓缩至密度为1.20的浓缩液b，将浓缩液a与浓缩液b合并，得浓缩液c；将步骤（1）得到的提取液e在80℃减压浓缩，干燥，得提取物e；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液c中加入95%乙醇，使乙醇重量占比60%，放置24小时，滤过，滤液在50℃减压浓缩，浓缩至无乙醇，得浓缩液d；
（4）将步骤（3）得到的浓缩液d通过mci凝胶色谱柱吸附，用水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，水洗脱液弃去，再用体积比10:90、20:80、30:70的乙醇-水依次洗脱，合计洗脱量为15个色谱柱体积，洗脱液直接通过与mci凝胶色谱柱相同色谱柱体积的硅胶色谱柱干柱，收集通过硅胶色谱柱干柱的第3-12色谱柱体积的流出液，回收溶剂，低温干燥得提取物a；
（5）将步骤（4）得到的提取物a加提取物a重量3倍的体积比7:3乙酸乙酯-乙醇溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得提取物b；
（6）将步骤（2）得到的提取物e通过mci凝胶色谱柱吸附，用水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，水洗脱液弃去，再用体积比40:60的乙醇-水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，洗脱液直接通过与mci凝胶色谱柱相同色谱柱体积的硅胶色谱柱干柱，收集通过硅胶色谱柱干柱第3-4色谱柱体积的的流出液，回收溶剂，低温干燥，得提取物f；
（7）将步骤（5）得到的提取物b与步骤（6）得到的提取物f合并，即得降血糖有效部位。
一种降血糖有效部位的提取纯化技术，其特征在于所述的降血糖有效部位同时含有血见愁苷a、血见愁苷b、teuevin。
一种降血糖有效部位的提取纯化技术，其特征在于用该提取纯化技术得到的降血糖有效部位中血见愁苷a、血见愁苷b与teuevin的总含量占总有效部位的60%以上。
一种降血糖有效部位的提取纯化技术，其特征在于用该提取纯化技术得到的降血糖有效部位可以用于制备治疗糖尿病药物。
一种降血糖有效部位，其特征在于含有重量比例为3:1:8的血见愁苷a、血见愁苷b、teuevin。
一种降血糖有效部位，其特征在于降血糖有效部位中血见愁苷a、血见愁苷b与teuevin的总含量占总有效部位的60%以上。
本发明首次建立了血见愁中降血糖有效部位的提取纯化技术，采用mci凝胶-硅胶干柱相结合的方法，尤其是硅胶干柱用含水乙醇洗脱技术，实现了血见愁降血糖有效部位的成功提取纯化制备，该有效部位同时含有重量比例为3:1:8的血见愁苷a、血见愁苷b、teuevin。
具体实施方式
下面通过具体实验例和实施例对血见愁中降血糖有效部位的提取纯化技术做进一步说明，但不限于本发明。
实施例1：血见愁中降血糖有效部位的提取纯化
（1）取血见愁，粉碎成粗粉，用水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，水用量为血见愁总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液a；提取后的药渣再用水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，水用量为血见愁总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液b；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液e；
（2）将步骤（1）得到的提取液a在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.20的浓缩液a，将步骤（1）得到的提取液b在80℃减压浓缩，浓缩至密度为1.20的浓缩液b，将浓缩液a与浓缩液b合并，得浓缩液c；将步骤（1）得到的提取液e在80℃减压浓缩，干燥，得提取物e；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液c中加入95%乙醇，使乙醇重量占比60%，放置24小时，滤过，滤液在50℃减压浓缩，浓缩至无乙醇，得浓缩液d；
（4）将步骤（3）得到的浓缩液d通过mci凝胶色谱柱吸附，用水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，水洗脱液弃去，再用体积比10:90、20:80、30:70的乙醇-水依次洗脱，合计洗脱量为15个色谱柱体积，洗脱液直接通过与mci凝胶色谱柱相同色谱柱体积的硅胶色谱柱干柱，收集通过硅胶色谱柱干柱的第3-12色谱柱体积的流出液，回收溶剂，低温干燥得提取物a；
（5）将步骤（4）得到的提取物a加提取物a重量3倍的体积比7:3乙酸乙酯-乙醇溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得提取物b；
（6）将步骤（2）得到的提取物e通过mci凝胶色谱柱吸附，用水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，水洗脱液弃去，再用体积比40:60的乙醇-水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，洗脱液直接通过与mci凝胶色谱柱相同色谱柱体积的硅胶色谱柱干柱，收集通过硅胶色谱柱干柱第3-4色谱柱体积的的流出液，回收溶剂，低温干燥，得提取物f；
（7）将步骤（5）得到的提取物b与步骤（6）得到的提取物f合并，即得降血糖有效部位。
降血糖有效部位的成分分离及结构鉴定：
取降血糖有效部位，甲醇溶解，200-300目硅胶拌样，干燥，研匀，先经过硅胶柱色谱，再结合聚酰胺柱色谱、凝胶柱色谱，分离纯化，分别得到3个化合物，经过经理化常数、质谱及核磁共振色谱等光谱数据、化学反应等方法,分别确证为血见愁苷a(teuvissidea)、血见愁苷b(teuvissideb)、teuevin。经hplc检测，降血糖有效部位中血见愁苷a、血见愁苷b与teuevin的总含量占总有效部位的60%以上，且血见愁苷a、血见愁苷b、teuevin重量比例为3:1:8。
实施例2：血见愁中降血糖有效部位的提取纯化
（1）取血见愁，粉碎成粗粉，用水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，水用量为血见愁总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液a；提取后的药渣再用水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，水用量为血见愁总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液b；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液e；
（2）将步骤（1）得到的提取液a在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.20的浓缩液a，将步骤（1）得到的提取液b在80℃减压浓缩，浓缩至密度为1.20的浓缩液b，将浓缩液a与浓缩液b合并，得浓缩液c；将步骤（1）得到的提取液e在80℃减压浓缩，干燥，得提取物e；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液c中加入95%乙醇，使乙醇重量占比60%，放置24小时，滤过，滤液在50℃减压浓缩，浓缩至无乙醇，得浓缩液d；
（4）将步骤（3）得到的浓缩液d通过mci凝胶色谱柱吸附，用水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，水洗脱液弃去，再用体积比10:90、20:80、30:70的乙醇-水依次洗脱，合计洗脱量为15个色谱柱体积，洗脱液直接通过与mci凝胶色谱柱相同色谱柱体积的硅胶色谱柱干柱，收集通过硅胶色谱柱干柱的第3-12色谱柱体积的流出液，回收溶剂，低温干燥得提取物a；
（5）将步骤（4）得到的提取物a加提取物a重量3倍的体积比7:3乙酸乙酯-乙醇溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得提取物b；
（6）将步骤（2）得到的提取物e通过mci凝胶色谱柱吸附，用水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，水洗脱液弃去，再用体积比40:60的乙醇-水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，洗脱液直接通过与mci凝胶色谱柱相同色谱柱体积的硅胶色谱柱干柱，收集通过硅胶色谱柱干柱第3-4色谱柱体积的的流出液，回收溶剂，低温干燥，得提取物f；
（7）将步骤（5）得到的提取物b与步骤（6）得到的提取物f按重量比2:1合并，即得降血糖有效部位。
降血糖有效部位的成分分离及结构鉴定：
取降血糖有效部位，甲醇溶解，200-300目硅胶拌样，干燥，研匀，先经过硅胶柱色谱，再结合聚酰胺柱色谱、凝胶柱色谱，分离纯化，分别得到3个化合物，经过经理化常数、质谱及核磁共振色谱等光谱数据、化学反应等方法,分别确证为血见愁苷a(teuvissidea)、血见愁苷b(teuvissideb)、teuevin。经hplc检测，降血糖有效部位中血见愁苷a、血见愁苷b与teuevin的总含量占总有效部位的40%以上，且血见愁苷a、血见愁苷b、teuevin重量比例为2:1:5。
实施例3：血见愁中降血糖有效部位的提取纯化
（1）取血见愁，粉碎成粗粉，用水为溶剂提取3次，每次室温浸泡提取4小时，水用量为血见愁总重量的12倍，滤过，合并滤液得提取液a；提取后的药渣再用水为溶剂提取2次，每次加热回流提取1.5小时，水用量为血见愁总重量的10倍，滤过，合并滤液得提取液b；提取后的药渣再用70%乙醇为溶剂加热回流提取0.5小时，滤过，合并滤液得提取液e；
（2）将步骤（1）得到的提取液a在50℃减压浓缩，浓缩至密度为1.20的浓缩液a，将步骤（1）得到的提取液b在80℃减压浓缩，浓缩至密度为1.20的浓缩液b，将浓缩液a与浓缩液b合并，得浓缩液c；将步骤（1）得到的提取液e在80℃减压浓缩，干燥，得提取物e；
（3）将步骤（2）得到的浓缩液c中加入95%乙醇，使乙醇重量占比60%，放置24小时，滤过，滤液在50℃减压浓缩，浓缩至无乙醇，得浓缩液d；
（4）将步骤（3）得到的浓缩液d通过mci凝胶色谱柱吸附，用水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，水洗脱液弃去，再用体积比10:90、20:80、30:70的乙醇-水依次洗脱，合计洗脱量为15个色谱柱体积，洗脱液直接通过与mci凝胶色谱柱相同色谱柱体积的硅胶色谱柱干柱，收集通过硅胶色谱柱干柱的第3-12色谱柱体积的流出液，回收溶剂，低温干燥得提取物a；
（5）将步骤（4）得到的提取物a加提取物a重量3倍的体积比7:3乙酸乙酯-乙醇溶解，放置8小时，滤过，滤液回收溶剂，低温干燥，即得提取物b；
（6）将步骤（2）得到的提取物e通过mci凝胶色谱柱吸附，用水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，水洗脱液弃去，再用体积比40:60的乙醇-水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，洗脱液直接通过与mci凝胶色谱柱相同色谱柱体积的硅胶色谱柱干柱，收集通过硅胶色谱柱干柱第3-4色谱柱体积的的流出液，回收溶剂，低温干燥，得提取物f；
（7）将步骤（5）得到的提取物b与步骤（6）得到的提取物f按重量比1:2合并，即得降血糖有效部位。
降血糖有效部位的成分分离及结构鉴定：
取降血糖有效部位，甲醇溶解，200-300目硅胶拌样，干燥，研匀，先经过硅胶柱色谱，再结合聚酰胺柱色谱、凝胶柱色谱，分离纯化，分别得到3个化合物，经过经理化常数、质谱及核磁共振色谱等光谱数据、化学反应等方法,分别确证为血见愁苷a(teuvissidea)、血见愁苷b(teuvissideb)、teuevin。经hplc检测，降血糖有效部位中血见愁苷a、血见愁苷b与teuevin的总含量占总有效部位的70%以上，且血见愁苷a、血见愁苷b、teuevin重量比例为3:2:11。
实验例1：降血糖有效部位对链脲霉素糖尿病大鼠的治疗作用
链脲霉素糖尿病动物模型造模：将链脲霉素（stz）溶于0.1mol/l柠檬酸缓冲液(ph4.5)中，临用前配制。大鼠常用量为70mg/kg(ip)。一次足量给予动物链脲霉素，造成β细胞大量损伤，胰岛素合成和分泌减少，引起糖代谢紊乱，导致糖尿病。将stz溶液用0.1mol/l无菌枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液新鲜配制成2%溶液，调节ph至4.5，滤菌器过滤除菌。大鼠禁食10h按60mg/kg体重腹腔内或尾静脉一次性注射stz溶液，24h内随机血糖≥16.7mmol/l，稳定5d即可作为成功模型。
药物：实施例1降血糖有效部位、实施例2降血糖有效部位、实施例3降血糖有效部位。药物配制：研成粉末，各取5mg溶于30ml蒸馏水中，制成混悬液。
阳性药：降糖灵，山东省医药工业研究所制药厂出品。链脲霉素(streptozocin，stz)，规格：1g/瓶，sigma公司。
仪器：日本京都ii型glucocaro血糖仪，全自动生化测定仪，美国产12孔γ-放免测定仪。
试剂：京都血糖仪所用血糖电极片、全自动生化仪所用血脂试剂，天津德普公司(dpc)提供的胰岛素放免试剂盒。
动物：wistar大鼠，购于山东省实验动物中心。
链脲霉素糖尿病大鼠的试验：取wistar大鼠50只，雌雄各半，体重180-200g。稳定饲料1w，期间取血测空腹血糖2次，以3.7-5.3mmol/l为入选动物标准。其中10只作为正常对照备用。其余50只用链脲霉素(stz)造模，造模后7-10d复测空腹血糖，以大于14.0mmol/l作为模型成功大鼠。
将链脲霉素性糖尿病(stz--dm)大鼠50只随机分为造模、实施例1组、实施例2组、实施例3组、降糖灵共5组，每组各10只，并设正常对照组10只。实施例1组、实施例2组、实施例3组，均按1mg/kg给药，降糖灵组9mg/kg给药，连续口服葡萄糖耐量试验(1.5g/kg)，尾静脉取血分别测空腹、口服葡萄糖后30min，60min，90min，120min的血糖水平，计算空腹血糖及葡萄糖灌胃后60min血糖区线面积(auc)。
试验结果：实施例1降血糖有效部位对stz-dm大鼠空腹血糖升高有明显的降低作用，与造模组比较均有极显著差异。对stz-dm大鼠糖代谢有显著的改善作用，对葡萄糖引起的血糖升高有显著的降低作用，明显降低血糖区线面积，与造模组比较均有极显著差异。实施例2降血糖有效部位对stz-dm大鼠空腹血糖升高无明显的降低作用，与造模组比较均无显著差异。实施例3降血糖有效部位对stz-dm大鼠空腹血糖升高无明显的降低作用，与造模组比较均无显著差异。