治疗自身免疫性疾病的PantId的制作方法

文档序号:21364363发布日期:2020-07-04 04:39阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于治疗自身免疫性疾病或病症的pantid分子,其中自身反应性b细胞对免疫检查点受体、免疫检查点配体和/或免疫调节细胞因子有反应,所述分子包含:二、三、四或五个蛋白质、结构域或肽的分子嵌合体:

其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个是免疫检查点受体、检查点配体或免疫调节细胞因子中的一种;和

其中所述蛋白质、结构域或肽中的第二个是效应子。

2.根据权利要求1所述的pantid分子,其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个是免疫检查点受体。

3.根据权利要求2所述的pantid分子,其中所述免疫检查点受体是与配体结合并在白细胞或淋巴样组织相关细胞内引发信号传导的细胞内、跨膜或膜相关的蛋白。

4.根据权利要求3所述的pantid分子,其中白细胞或淋巴样组织相关细胞内的信号转导通过nf-κb、nfat、jak-stat、pi-3k、plc、pkc、camp-pka、cgmp-pkg、mapk、胱天蛋白酶、smad、rho家族gtp酶、酪氨酸激酶或磷酸酶、脂质激酶或磷酸酶途径;或通过t和b细胞、自然杀伤(nk)细胞、树突状细胞(dc)、自然杀伤t(nkt)细胞、粒细胞(嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞)、单核细胞、巨噬细胞或淋巴组织相关细胞中的其他信号传导途径,介导免疫调节作用。

5.根据权利要求2所述的pantid分子,其中所述免疫检查点受体是以下之一:pd-1(序列038);cd28(序列039);ctla-4(序列040);icos(序列041);btla(序列042);杀死免疫球蛋白受体(kir),包括:kir2dl1(序列043)、kir2dl2(序列044)、kir2dl3(序列045)、kir2dl4(序列046)、kir2dl5a(序列047)、kir2dl5b(序列048)、kir2ds1(序列049)、kir2ds2(序列050)、kir2ds3(序列051)、kir2ds4(序列052)、kir2ds5(序列053)、kir3dl2(序列054)、kir3dl3(序列055)和kir3ds1(序列056);lag-3(序列057);cd137(序列058);ox40(序列059);cd27(序列060);cd40(序列061);tim-3(序列062)和其他t细胞免疫球蛋白以及包含1-结构域的(tim)受体,包括tim-1(序列063)、tim-2(序列064)和tim-4(序列065);a2ar(序列066);或者任何包含itam(基于免疫受体酪氨酸的活化基序,序列067)、itim(基于免疫受体酪氨酸的抑制基序,序列068)或itsm(基于免疫受体酪氨酸的开关基序,序列069)基序、结构域或肽例如cd244(2b4,序列070)和tigit受体(序列071)的跨膜、外周膜、膜相关或胞质蛋白。

6.根据权利要求1所述的pantid分子,其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个包括免疫检查点配体。

7.根据权利要求6所述的pantid分子,其中所述免疫检查点配体是能够引发免疫检查点受体中信号传导的蛋白质、结构域或肽。

8.根据权利要求7所述的pantid分子,其中所述信号传导是反向信号传导,通过该反向信号传导,与检查点配体结合的检查点受体与表达配体的细胞信号传导相关联。

9.根据权利要求6所述的pantid分子,其中所述免疫检查点配体是源自以下任何一种的全部、部分或肽:pd-l1(序列072)和pd-l2(序列073);cd80(序列074)和cd86(序列075);b7rp1(序列076);b7-h3(序列b7-h3);b7-h4(序列b7-h4);hvem(序列079);任何等位基因的mhc-i(序列080)和mhc-ii(序列081);cd137l(序列082);ox40(序列083);cd70(序列084);gal9(序列085);或与包含itam;itim或itsm基序的跨膜、外周膜、膜相关或胞质受体/蛋白结合的蛋白质、肽、脂质、聚糖、糖脂、糖蛋白、脂蛋白、核酸、核糖核蛋白或脱氧核糖核蛋白。

10.根据权利要求1所述的pantid分子,其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个是免疫调节细胞因子。

11.根据权利要求10所述的pantid分子,其中所述免疫调节细胞因子是能够在白细胞中引起信号传导的蛋白质、结构域或肽。

12.根据权利要求11所述的pantid分子,其中所述免疫调节细胞因子是白介素。

13.根据权利要求12所述的pantid分子,其中所述白介素(il)是:il-1家族的成员,包括il-1α(序列086)、il-1β(序列087)、il-1ra(序列088)、il-33(序列089)、il-18(序列090)、il-36ra(序列091)、il-36α(序列092)、il-36β(序列093)、il-36γ(序列094)、il-37(序列095)和il-38(序列096);il-2(序列097)、il-3(序列098)、il-4(序列099)、il-5(序列100)、il-6(序列101)、il-7(序列102)、il-8(序列103)、il-9(序列104)、il-10(序列105)、il-11(序列106)、il-12(序列107)、il-13(序列108)、il-14(序列109)、il-15(序列110)、il-16(序列111)、il-17(序列112)、il-19(序列113)、il-20(序列114)、il-21(序列115)、il-22(序列116)、il-23(序列117)、il-24(序列118)、il-25(序列119)、il-26(序列120)、il-27(序列121)、il-28(序列122)、il-29(序列123)、il-30(序列124)、il-31(序列125)、il-32(序列126)、或il-35(序列127)。

14.根据权利要求10所述的pantid分子,其中所述免疫调节细胞因子是干扰素。

15.根据权利要求14所述的pantid分子,其中所述干扰素是i型、ii型或iii型干扰素。

16.根据权利要求10所述的pantid分子,其中所述免疫调节细胞因子是趋化因子。

17.根据权利要求16所述的pantid分子,其中所述趋化因子是c、cc、cxc或cx3c趋化因子。

18.根据权利要求10所述的pantid分子,其中所述免疫调节细胞因子是tnf受体超家族配体。

19.根据权利要求18所述的pantid分子,其中所述tnf受体超家族配体是ox40l、cd40l、tnf-α和cd70或4-1bbl之一。

20.根据权利要求10所述的pantid分子,其中所述免疫调节细胞因子是非经典的化学动力学剂或趋化剂。

21.根据权利要求20所述的pantid分子,其中所述非经典的化学动力学剂或趋化剂是slit1、slit2和slit3之一。

22.根据权利要求1所述的pantid分子,其中所述效应子包含在白细胞——可选地t细胞和b细胞——中能够诱导凋亡、坏死、细胞凋亡、耐受或无反应的蛋白质、结构域、肽、聚糖、脂质、核酸、糖蛋白、脂蛋白、核糖核蛋白、脱氧核糖核蛋白、共价修饰的肽或小于10,000道尔顿的小分子或其组合或分子嵌合体。

23.根据权利要求22所述的pantid分子,其中所述效应子包含死亡受体配体,其包含cd95l(又名fasl,序列001)、trail(又名apo2l,序列002)或tweak(又名肿瘤坏死因子配体超家族成员12,序列003)。

24.根据权利要求22所述的pantid分子,其中所述效应子是修饰的细菌毒素。

25.根据权利要求24所述的pantid分子,其中所述修饰的细菌毒素是a-b毒素或自转运蛋白,用于在细胞内递送细胞毒性效应子,其中所述细胞毒性效应子可以是胱天蛋白酶、细菌毒素或其他酶。

26.根据权利要求22所述的pantid分子,其中所述效应子是nk活化受体配体。

27.根据权利要求26所述的pantid分子,其中所述nk活化受体配体包括结合nkg2d的mica(序列023)或micb(序列024);结合nkg2d的ulbp1-6(序列025-030)、rae-1(序列031)、mult1(序列032)或h60(序列033);dnam-1配体cd155(序列034)或cd112(序列035);结合nkp30的b7-h6(序列036)或bat3(序列037);或结合cd70的cd27。

28.根据权利要求22所述的pantid分子,其中所述效应子是小于10,000道尔顿的细胞毒性或细胞抑制剂小分子。

29.根据权利要求28所述的pantid分子,其中所述细胞毒性或细胞抑制剂小分子是微管或肌动蛋白细胞骨架调节剂、dna复制抑制剂、核糖体抑制剂、rna合成抑制剂、放射性核素或其配位复合物。

30.根据权利要求22所述的pantid分子,其中所述效应子是免疫调节细胞因子。

31.根据权利要求30所述的pantid分子,其中所述免疫调节细胞因子是il-1β、il-6、il-7、il-10、il-12、il-21、il-35、tgf-β、tnf-α、i型干扰素、ii型干扰素、iii型干扰素、典型趋化因子(例如cc、cxc、c和cx3c类)或非典型趋化剂或化学动力学剂(例如slit1、2和3)。

32.根据权利要求22所述的pantid分子,其中所述效应子是人、鼠、猪或犬免疫球蛋白的fc结构域。

33.根据权利要求32所述的pantid分子,其中所述免疫球蛋白是iga、igm、igg、igd、ige免疫球蛋白或它们的亚类之一。

34.根据权利要求1的pantid分子,其中所述分子嵌合体的二、三、四或五个蛋白质、结构域或肽是共价连接或非共价结合的复合物。

35.一种pantid分子,其由以下组成:(1)免疫检查点受体、免疫检查点配体或免疫调节细胞因子;和(2)异二聚结构域、三聚结构域、四聚结构域或低聚结构域或其组合的分子嵌合体,其中所述分子嵌合体与效应子与异二聚结构域、均二聚结构域、三聚结构域、四聚结构域或低聚结构域或其组合的分子嵌合体混合或可混合。

36.一种用于治疗自身免疫性疾病的pantid分子,其中自身反应性b细胞对免疫检查点受体、免疫检查点配体和/或免疫调节细胞因子有反应,所述分子包含:免疫检查点受体、免疫检查点配体和/或免疫调节细胞因子与异二聚结构域、均二聚结构域、三聚结构域、四聚结构域或低聚结构域或其组合的分子嵌合体,其中所述嵌合体诱导b细胞活化诱导的细胞死亡(aicd)。

37.一种pantid分子,其由针对效应子的b或t细胞自身抗原的分子嵌合体组成,其中所述嵌合体通过非共价或共价嵌合形成。

38.一种pantid分子,其由以下组成:(a)对应于效应分子的核酸、合成蛋白质或肽中的一种;和(b)免疫检查点受体、免疫检查点配体或免疫调节细胞因子。

39.根据根据权利要求38所述的pantid分子,其中与所述效应子分子相对应的核酸、合成蛋白质或肽包括表达质粒、病毒载体、慢病毒载体、mrna、合成蛋白质、合成肽、或包含所述核酸、蛋白质或肽的转导或转染的细胞。

40.根据权利要求1所述的pantid分子,所述分子已通过核糖体翻译、细菌培养、古细菌培养、真菌培养、植物培养、动物培养或人细胞培养在体外表达。

41.根据根据权利要求1所述的pantid分子,所述分子已经由整个生物体表达。

42.一种用于治疗自身免疫疾病或病症的组合物,所述组合物包含一种或多种纯化的权利要求1所述的pantid分子。

43.一种方法,包括:

将权利要求1所述的pantid分子加入细胞培养上清液中;和

表征所述pantid分子。

44.一种方法,包括:

将权利要求1所述的pantid分子显微注射到细胞中;和

表征所述pantid分子。

45.一种治疗自身免疫性疾病或病症的方法,包括:

将权利要求1所述的pantid分子或权利要求41所述的组合物引入需要其的动物中;和

治疗所述疾病或病症。

46.根据权利要求45所述的方法,其中所述动物是人或小鼠。

47.根据权利要求45所述的方法,其中所述引入通过施用。

48.根据权利要求47所述的方法,其中所述施用通过注射、鼻内递送、透皮或经上皮递送。

49.根据权利要求45所述的方法,其中所述pantid分子被配制成丸剂,或处于贴剂中或为颗粒。

50.一种生产pantid的方法,包括克隆所述pantid。

51.一种通过化学连接pantid的两个或多个组分生产pantid的方法。

52.根据权利要求1或5中任一项所述的pantid,或用于前述权利要求中任一项所述的组合物和方法中的pantid,条件是当所述检查点受体、检查点配体或免疫调节细胞因子选自ctla-4、cd27、icos及其部分时,所述效应子不选自fasl、trail、tweak及其部分。

53.在前述权利要求所述的任何组合物或方法中使用的pantid,条件是所述检查点受体不是ctla-4。

54.一种用于治疗自身免疫性疾病或病症的pantid分子,其中自身反应性b细胞对免疫检查点受体、免疫检查点配体和/或免疫调节细胞因子有反应,所述分子包含:二、三、四或五个或至五个蛋白质、结构域或肽的分子嵌合体:

其中所述蛋白质、结构域或肽中的第一个是免疫检查点受体、检查点配体或免疫调节细胞因子中的一种;和

其中所述蛋白质、结构域或肽中的第二个是效应子。

55.一种用于通过自身反应性b细胞的克隆缺失来治疗自身免疫疾病或病症的pantid分子,所述pantid分子包含第一蛋白、结构域或肽,其选自免疫检查点受体、检查点配体、免疫调节细胞因子或本文所述的任何其他同源抗原;并且第二蛋白质、结构域或肽效应子是fc,例如igg1或igg3的铰链、ch2和ch3区域。

56.根据权利要求54所述的pantid分子,其中所述pantid的第一或第二结构域、蛋白质或肽包含在t和b细胞上表达的itim受体或其部分的配体。

57.根据权利要求56所述的pantid分子,其中所述itim受体的配体是ctl4、pd-1、btla、lag-3、tim-3、lair-1、tigit、cd33、cd22、siglec-4、siglec-10、fcγrii、cd5、cd66a、pir-b、ilt-2、或cd72。

58.根据权利要求54所述的pantid分子,其中所述第二蛋白质、结构域或肽是死亡受体或其部分的配体。

59.根据权利要求58所述的pantid分子,其中所述死亡受体是trail1、trailr1、trailr2或fasl。

60.根据权利要求54所述的pantid分子,其中所述pantid包含亲和纯化表位v5或ha肽。

61.根据权利要求54所述的pantid分子,其中所述pantid包括异二聚化序列。

62.根据权利要求54所述的pantid分子,其中所述pantid结合对b细胞表面标志物特异性的肽或配体。

63.根据权利要求54所述的pantid分子,其中所述pantid与细菌、真菌或病毒毒素缀合。

64.根据权利要求54所述的pantid分子,其中所述pantid与抗代谢物、放射性核素、细胞毒剂、信号转导途径调节剂、溶酶体剂或内体破坏剂缀合。

65.根据权利要求54所述的pantid分子,其中所述pantid是自身抗原-fc融合蛋白,并且其中所述pantid形成均二聚体或异二聚体,或更高阶的异寡聚体,用于自身反应性b细胞的克隆缺失。

66.根据权利要求65所述的pantid分子,其中异二聚或更高阶的异低聚由异二聚化结构域定向。

67.一种慢病毒或其他表达载体,其编码权利要求54所述的pantid分子。

68.一种高通量鉴定自身抗原以创建用于自身反应性b细胞克隆缺失的pantid的方法。

69.一种表达和纯化所述pantid的方法。

70.自身抗原-fcpantid在人、宠物和/或家养动物中用于自身反应性b细胞缺失或用于自身抗原-fc融合蛋白的药代动力学或药效学性质的用途。

71.自身抗原-fcpantid在具有或不具有血浆置换的动物——包括人和非人灵长类动物——中用于消除内源性循环抗体的用途。

72.根据权利要求68或69中任一项所述的方法,其中所述pantid是自身抗原-fc。


技术总结
B和T细胞经常在自身免疫性疾病中靶向检查点受体及其同源配体,其中这些适应性免疫应答可能显著促进潜在的免疫病理。本文描述了靶向检查点受体及其配体的自身反应性B细胞的克隆消除的新技术。该技术的一个实施方案是与效应子结构域的检查点受体或配体胞外结构域分子嵌合体,其能够诱导B细胞凋亡、坏死和/或耐受/无反应:在本文中,该技术被称为PantId(多克隆抗独特型)。在其他实施方案中,该技术还包括与免疫调节细胞因子的效应分子嵌合体。还描述了新型的凋亡效应子。还描述了鉴定检查点受体/配体自身反应性B细胞反应、构建PantId及其体外和体内应用的方法。

技术研发人员:C·格尔贝尔;M·斯皮克;J·埃博里斯
受保护的技术使用者:奥菲斯生物科学公司
技术研发日:2018.03.23
技术公布日:2020.07.03
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