咖啡酸苯乙酯在制备肝再生药物中的应用的制作方法

本发明涉及咖啡酸苯乙酯在制备肝再生药物中的应用，属于生物医药技术领域。

背景技术：

肝脏是机体内负责新陈代谢的重要器官，能够合成和储存碳水化合物、脂肪和维生素。肝脏中的细胞分为肝实质细胞和非实质细胞。肝实质细胞占肝细胞的80％左右；其他20％为非实质细胞，包括肝窦内皮细胞、枯否细胞和肝星状细胞。在正常情况下，绝大多数的肝细胞处于静止状态，在受到各种损伤因素如毒素、炎症或肝切除后肝脏会表现出巨大的再生能力。肝脏再生是涉及多种效应细胞增殖反应的高度协调的过程，参与肝脏再生的细胞种类与肝损伤程度密切相关，包括以肝细胞为主的实质细胞再生和各种细胞因子和生长因子以不同的作用机制参与的动态调控过程。

我国是世界上肝脏疾病高发国家之一，其中肝癌发病率居世界第九位。目前，手术切除和肝移植仍然是临床上治疗肝癌和终末期肝病的最佳手段。但是，部分患者接受手术后，剩余肝脏缺乏再生能力、就会引起多种不良综合病症，如手术后急性肝衰竭、脓毒性感染、腹水、出血、肾衰竭或肝性脑病。其中，手术后出现的急性肝衰竭仍然是导致术后死亡的主要原因。所以，术后肝脏的再生能力对肝脏功能的恢复至关重要。寻找治疗肝损伤同时促进肝再生的治疗的药物已成为目前医学领域研究的热点。

咖啡酸苯乙酯(caffeicacidphenethylester，cape)是一种从蜂胶中提取的酚类化合物，具有多种生物活性。研究证明，cape具有抗炎，抗癌，抗病毒以及参与免疫调节等生物活性。它可以通过抑制肿瘤增殖，调节凋亡相关基因表达来发挥抗肿瘤作用，这更说明了cape在降低肝细胞癌的发生方面的作用。cape分子式为：c17h16o4，分子量为：284.31，其结构式如下：

技术实现要素：

本发明提供了一种从蜂胶中提取的天然化合物cape在制备肝再生药物中的应用。

本发明的研究人员发现如下应用：

cape能够促进肝损伤中肝再生。

肝损伤包括肝物理损伤或肝化学损伤，肝物理损伤为肝切除、肝破裂或肝穿刺，肝化学损伤为肝毒性损伤。

cape能够改善肝损伤后的肝功能。

cape能够刺激肝损伤中的肝细胞增殖。

cape能够刺激肝硬化、肝炎、肝癌、肝纤维化、脂肪性肝病、肝衰竭中正常肝细胞增殖。

cape能够提高部分肝切除后肝/体重比恢复能力

有益效果

申请人发现，cape能够促进部分肝切除后的肝再生，并能够有效改善部分肝切除后造成的肝脏损伤，且所述药物安全性高，毒副作用小，具有广泛的应用前景

附图说明

图1是实施例中70％肝切除小鼠肝再生实验肝重比结果；

图2是实施列中70％肝切除小鼠肝组织免疫组化标记增殖信号ki67染色显微图像和ki67阳性信号率柱状图；

图3是实施例中70％肝切除小鼠血清中生化指标ast的柱状图；

图4是实施例中70％肝切除小鼠血清中生化指标alt的柱状图；

图5是实施例中70％肝切除小鼠肝脏组织病理形态学的he切片图

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

实施例：

1、动物实验设计

动物模型是c57bl/6小鼠70％肝切除模型。实验前，选取16只8-10周龄，体重为18-22g的雄性小鼠，将小鼠根据体重随机均分为两组，分别为溶剂组、cape给药组，cape给药组给药剂量为60mg/kg。给药后两小时，用异氟烷麻醉小鼠，进行肝切除手术。用酒精将老鼠腹部消毒，从剑突往下1-2cm宽度剪开皮肤和肉，使肝部暴露，用棉签压着中叶，剪掉中叶上的镰状韧带。用线将肝左叶结扎，在靠近结扎部位稍上一点剪掉肝左叶；结扎中叶，结扎部位在中叶分叉下2-3mm，剪掉肝中叶。分别将肉和皮肤缝好，腹腔注射0.4ml生理盐水，将老鼠放置在温暖的环境。每天定时去给药，连续给药三天。在实验的第四天处死老鼠。

2、肝重比

第4天处死小鼠，分别称量小鼠的肝重和体重，以两者之比计算肝再生指数。如图1所示，cape组与对照组的肝重比相比，具有统计学意义的显著性增大(*p<0.05**p<0.01***p<0.001)，由此可见，cape能够促进部分肝切除后的肝再生

3、肝组织ki67免疫组化分析

将实施列中小鼠肝脏浸泡福尔马林,石蜡切片固定,石蜡切片进行脱蜡,水化,抗原修复,封闭,孵育增值信号ki67抗体,dab染色,脱水封片并显微观察,计数ki67阳性信号数量,对照组和cape组进行比较,手术后恢复三天的部分切片如图2a和图2b所示，其中图2c为阳性信号两者百分比。由此可见cape组ki67阳性细胞数明显较对照组更多,说明cape能够增强部分肝切除后的肝细胞增殖,促进肝脏再生。

4、肝组织生化指标检测

第4天处死小鼠，取血测定血清中谷草转氨酶(ast)和谷丙转氨酶(alt)的含量。

肝再生实验生化指标结果如图3-4表1所示，

表1肝切除小鼠血清生化指标结果

跟溶剂组相比*p<0.05**p<0.01***p<0.001

结果分析：根据图3-4和表1所示，与对照组相比，cape能显著降低70％肝切除小鼠血清中alt和ast水平。提示cape在肝损伤过程中能够降低肝脏损伤程度。

5、肝脏组织学分析

肝脏组织h&e染色观察肝受损情况

肝组织经过4％多聚甲醛固定、组织修切、蒸馏水冲洗、脱水、石蜡包埋、常规切片，得到4μm切片。再将切片脱蜡、染色、脱水、透明、封片进行光学显微镜观察肝细胞炎症浸润和水肿情况。结果如图5所示。

结果分析：

对照组肝细胞排列紊乱，变性明显，表现为不同程度的肿胀和空泡变性，伴核增大和双核细胞；cape给药组，肝细胞排紊乱程度和变性程度有所改善，同样可见核增大和双核细胞，核分裂像明显增多。

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。