用于肿瘤特异性T细胞免疫疗法的IL-13受体α2(IL13RA2)嵌合抗原受体的制作方法

文档序号:23666899发布日期:2021-01-15 14:06阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种编码嵌合抗原受体的核酸,所述嵌合抗原受体包含:

配体结合结构域,所述配体结合结构域结合至il-13α2(il13rα2)受体和/或与il-13α2(il13rα2)受体相互作用;

多肽间隔区,所述多肽间隔区位于所述配体结合结构域和跨膜结构域之间;

所述跨膜结构域;以及

细胞内信号转导区。

2.如权利要求1所述的核酸,其中,所述配体结合结构域包含:

重链互补决定区1(cdr1)或其保守变异体,所述重链互补决定区1具有氨基酸序列seqidno:20;

重链互补决定区2(cdr2)或其保守变异体,所述重链互补决定区2具有氨基酸序列seqidno:21;和/或

重链互补决定区3(cdr3)或其保守变异体,所述重链互补决定区3具有氨基酸序列seqidno:22。

3.如权利要求1或2所述的核酸,其中,所述配体结合结构域包含:

轻链互补决定区1(cdr1)或其保守变异体,所述轻链互补决定区1具有氨基酸序列seqidno:23;

轻链互补决定区2(cdr2)或其保守变异体,所述轻链互补决定区2具有氨基酸序列seqidno:24;和/或

轻链互补决定区3(cdr3)或其保守变异体,所述轻链互补决定区3具有氨基酸序列seqidno:25。

4.如权利要求1-3中任一项所述的核酸,其中,所述配体结合结构域包含重链可变(vh)结构域,所述重链可变结构域包含与氨基酸序列seqidno:18具有至少90%同一性的多肽。

5.如权利要求1-4中任一项所述的核酸,其中,所述配体结合结构域包含轻链可变(vl)结构域,所述轻链可变结构域包含与氨基酸序列seqidno:19具有至少90%同一性的多肽。

6.如权利要求1-5中任一项所述的核酸,其中,所述配体结合结构域包含:

具有氨基酸序列seqidno:20的重链cdr1;

具有氨基酸序列seqidno:21的重链cdr2;和/或

具有氨基酸序列seqidno:22的重链cdr3。

7.如权利要求1-6中任一项所述的核酸,其中,所述配体结合结构域包含:

具有氨基酸序列seqidno:23的轻链cdr1;

具有氨基酸序列seqidno:24的轻链cdr2;和/或

具有氨基酸序列seqidno:25的轻链cdr3。

8.如权利要求1-7中任一项所述的核酸,其中,所述配体结合结构域包含vh结构域,所述vh结构域包含具有氨基酸序列seqidno:18的多肽。

9.如权利要求1-8中任一项所述的核酸,其中,所述配体结合结构域包含具有氨基酸序列seqidno:19的vl结构域。

10.如权利要求1-9中任一项所述的核酸,其中,所述配体结合结构域是抗体片段,例如抗原结合片段。

11.如权利要求1-10中任一项所述的核酸,其中,所述配体结合结构域是单链可变片段(scfv)。

12.如权利要求1-11中任一项所述的核酸,其中,所述scfv包含vl-vh取向。

13.如权利要求1-12中任一项所述的核酸,其中,所述单链可变片段(scfv)包含与核苷酸序列seqidno:61具有至少95%同一性的序列。

14.如权利要求1-13中任一项所述的核酸,其中,所述单链可变片段(scfv)包含核苷酸序列seqidno:61。

15.如权利要求1-14中任一项所述的核酸,其中,所述间隔区包含氨基酸序列x1ppx2p。

16.如权利要求1-15中任一项所述的核酸,其中,所述间隔区域包括人抗体的铰链区的一部分,或其修饰变体。

17.如权利要求1-16中任一项所述的核酸,其中,所述间隔区为15个氨基酸或更少,但不少于1个或2个氨基酸。

18.如权利要求1-17中任一项所述的核酸,其中,所述间隔区包含与氨基酸序列seqidno:09具有至少95%同一性的序列、由与氨基酸序列seqidno:09具有至少95%同一性的序列组成或基本上由与氨基酸序列seqidno:09具有至少95%同一性的序列组成。

19.如权利要求1-18中任一项所述的核酸,其中,所述间隔区包含氨基酸序列seqidno:09或其保守置换物、由氨基酸序列seqidno:09或其保守置换物组成或基本上由氨基酸序列seqidno:09或其保守置换物组成。

20.如权利要求1-19中任一项所述的核酸,其中,所述间隔区包含igg4铰链间隔区(s)、由igg4铰链间隔区(s)组成或基本上由igg4铰链间隔区(s)组成。

21.如权利要求1-20中任一项所述的核酸,其中,所述间隔区包含igg4铰链-ch3间隔区(m)、由igg4铰链-ch3间隔区(m)组成或基本上由igg4铰链-ch3间隔区(m)组成。

22.如权利要求1-21中任一项所述的核酸,其中,所述间隔区包含igg4铰链-ch2(l234d、n297a)-che间隔区(l)、由igg4铰链-ch2(l234d、n297a)-che间隔区(l)组成或基本上由igg4铰链-ch2(l234d、n297a)-che间隔区(l)组成。

23.如权利要求1-22中任一项所述的核酸,其中,所述细胞内信号转导区包含初级信号转导结构域和共刺激信号转导结构域,任选地包含cd3ζ的全部或部分与共刺激结构域的组合,所述共刺激结构域选自于由以下信号转导结构域所组成的组:cd27、cd28、4-1bb、ox-40、cd30、cd40、pd-1、icos、lfa-1、cd2、cd7、nkg2c和b7-h3,以及它们的组合。

24.如权利要求23所述的核酸,其中,所述细胞内信号转导区包含cd3ζ的信号转导部分和4-1bb的信号转导部分。

25.如权利要求1-24中任一项所述的核酸,其中,所述跨膜结构域包括cd28跨膜结构域(cd28tm)。

26.如权利要求1-25中任一项所述的核酸,所述核酸进一步包含编码标志物序列的核酸。

27.如权利要求26所述的核酸,其中,所述标志物序列是截短的受体,并且任选为egfrt、her2t或cd19t。

28.如权利要求1-27中任一项所述的核酸,所述核酸进一步包含配置用于甲氨蝶呤选择的二氢叶酸还原酶转基因。

29.如权利要求28所述的核酸,其中,所述二氢叶酸还原酶转基因是二氢叶酸还原酶双突变体(dhfrdm)。

30.如权利要求29所述的核酸,其中,所述二氢叶酸还原酶双突变体包含氨基酸突变l22f和f31s。

31.一种表达载体,所述表达载体包含权利要求1-30中任一项所述的核酸。

32.如权利要求31所述的表达载体,其中,所述载体是病毒载体。

33.如权利要求30或31所述的表达载体,其中,所述载体是慢病毒载体或腺病毒载体。

34.由权利要求1-30中任一项所述的核酸编码的嵌合抗原受体(car)多肽。

35.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含权利要求1-30中任一项所述的核酸。

36.如权利要求35所述的宿主细胞,其中,所述宿主细胞为cd8+t细胞毒性淋巴细胞,所述cd8+t细胞毒性淋巴细胞选自于由如下所组成的组:初始cd8+t细胞、中央记忆cd8+t细胞、效应记忆cd8+t细胞和本体cd8+t细胞。

37.如权利要求36所述的宿主细胞,其中,所述cd8+细胞毒性t淋巴细胞是中央记忆t细胞,并且其中,所述中央记忆t细胞为cd45ro+、cd62l+和cd8+阳性。

38.如权利要求35所述的宿主细胞,其中,所述宿主细胞为cd4+t辅助淋巴细胞,所述cd4+t辅助淋巴细胞选自于由如下所组成的组:初始cd4+t细胞、中央记忆cd4+t细胞、效应记忆cd4+t细胞和本体cd4+t细胞。

39.如权利要求38所述的宿主细胞,其中,所述cd4+辅助淋巴细胞是初始cd4+t细胞,并且其中,所述初始cd4+t细胞为cd45ra+、cd62l+和cd4+阳性,cd45ro阴性。

40.如权利要求35-39中任一项所述的宿主细胞,其中,所述宿主细胞是前体t细胞。

41.如权利要求35-40中任一项所述的宿主细胞,其中,所述宿主细胞是造血干细胞。

42.一种药物组合物,所述药物组合物包含权利要求35-41中任一项所述的宿主细胞以及药学上可接受的赋形剂。

43.一种制备权利要求35-41中任一项所述的宿主细胞的方法,所述方法包括:

将权利要求1-30中任一项所述的核酸引入细胞中;以及

在足以使所述细胞扩增的条件下,在抗cd3抗体和/或抗cd28抗体和至少一种稳态细胞因子的存在下对所述细胞进行培养;以及

用选择试剂对所述细胞进行选择;其中,所述选择试剂被配置为选择性富集转导有所述核酸或载体的细胞。

44.一种制备宿主细胞的方法,所述方法包括:

将权利要求1-30中任一项所述的核酸引入细胞中;以及

在足以使所述细胞扩增的条件下,在抗cd3抗体和/或抗cd28抗体和至少一种稳态细胞因子的存在下对所述细胞进行培养;以及

用选择试剂对所述细胞进行选择;其中,所述选择试剂被配置为选择性富集转导有所述核酸或载体的细胞。

45.如权利要求43或44所述的方法,其中,所述细胞是淋巴细胞。

46.如权利要求45所述的方法,其中,所述淋巴细胞具有cd45ra-、cd45ro+和cd62l+表型。

47.如权利要求45或46所述的方法,其中,所述淋巴细胞为cd8+或cd4+。

48.如权利要求43-47中任一项所述的方法,其中,所述选择试剂是甲氨蝶呤。

49.如权利要求43-48中任一项所述的方法,其中,所述细胞因子是il-15、il-7和/或il-21。

50.如权利要求43-49中任一项所述的方法,所述方法进一步包括将第二核酸引入所述宿主细胞,其中,所述第二核酸编码标志物蛋白。

51.如权利要求50所述的方法,其中,所述标志物蛋白是egfrt。

52.如权利要求35-41中任一项所述的宿主细胞在药剂中的用途或在表达il-13α2受体的癌症或实体瘤的治疗或抑制中的用途。

53.如权利要求52所述的用途,其中,所述癌症包括脑癌。

54.如权利要求52或53所述的用途,其中,所述癌症是胶质瘤或胶质母细胞瘤肿瘤。

55.如权利要求54所述的用途,其中,所述癌症为多形性胶质母细胞瘤(gbm)。

56.如权利要求54所述的用途,其中,所述癌症是胶质瘤。

57.一种治疗、抑制或减轻受试者中的癌症的方法,所述方法包括:向有需要的受试者给予权利要求35-41中任一项所述的宿主细胞。

58.如权利要求57所述的方法,其中,所述癌症是il13rα阳性恶性肿瘤。

59.如权利要求57或58所述的方法,其中,所述癌症是脑癌。

60.如权利要求57-59中任一项所述的方法,其中,所述癌症是胶质瘤或胶质母细胞瘤肿瘤。

61.如权利要求57-60中任一项所述的方法,其中,所述癌症是胶质瘤。

62.如权利要求57-60中任一项所述的方法,其中,所述癌症是多形性胶质母细胞瘤(gbm)。

63.如权利要求57-62中任一项所述的方法,所述方法进一步包括给予额外的疗法,所述额外的疗法选自化学疗法和放射疗法。

64.如权利要求63所述的方法,其中,所述化学疗法药物包括电化学疗法、烷化剂、抗代谢药(例如5-氟尿嘧啶(5-fu)、6-巯嘌呤(6-mp)、卡培他滨克拉屈滨、氯法拉滨、阿糖胞苷氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞喷司他丁和硫鸟嘌呤)、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、皮质类固醇、dna嵌入剂或检查点抑制剂(检查点激酶chk1、chk2)。

65.如权利要求57-64中任一项所述的方法,其中,所述受试者是哺乳动物。

66.如权利要求57-65中任一项所述的方法,其中,所述受试者是人。


技术总结
本文提供的方法和组合物的一些实施方式涉及特异性结合至IL‑13α2(IL13Ra2)受体的人细胞外结构域的嵌合抗原受体(CAR)、包含此类CAR的细胞、以及靶向癌细胞(例如实体瘤的细胞)的基于细胞的免疫疗法的方法。

技术研发人员:贾科莫·坦佩拉;迈克尔·C·延森
受保护的技术使用者:西雅图儿童医院(DBA西雅图儿童研究所)
技术研发日:2019.03.12
技术公布日:2021.01.15
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