一种抗衰组合物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及化妆品
技术领域：
，更具体地，涉及一种抗衰组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：皮肤位于体表，是机体衰老过程最显著的部分。衰老的皮肤表皮和真皮结构都会发生显著的改变，表皮细胞更新减慢、屏障功能减弱、角质形成细胞活力下降、表皮受伤后修复能力减弱，其中屏障功能的减弱导致皮肤干燥、脱屑、皱纹等；真皮结构的改变是皮肤衰老的主要原因，衰老的皮肤厚度变薄，合成胶原蛋白和弹性蛋白能力下降。老化皮肤中黑色素细胞数目明显下降，暴露于阳光下易受伤，脂褐质明显增加，呈现出老年斑和其他局部色素性改变；衰老的皮肤皮脂腺于汗腺萎缩，分泌减少，出汗反应降低，皮肤表面乳化物不足，角质层水合能力减弱，导致皮肤干燥、干裂。随着社会老龄化程度加剧以及人们对年轻化的追求，抗衰老护肤品在化妆品市场中的份额逐渐增加，提供一种温和有效的抗衰老产品以满足消费者对抗衰老化妆品安全及功效方面的需求是非常有必要的。已知真菌是生物体大家族，一些野生和可栽培的蘑菇的子实体含有用于传统医药和化妆品的药用化合物。在其进化过程中，真菌进化出各种性质以抵抗环境胁迫，已知一些真菌化合物可以具有调节由生活环境和自然环境对生物体造成的损伤的作用，因此加强了对来自真菌来源的新的天然生物活性化合物的研究。提取物主要成分是多糖，多糖是生命代谢活动中不可或缺的正要部分，可广泛地参与人体的各项活动，如抗衰、美白、皮肤保湿。由于从动植物中提取的多糖类物质具有天然、安全无刺激、与皮肤亲和力较高等优势，因此多糖类物质在化妆品中的应用受到了人们的广泛关注。目前一直都多糖研究主要有植物多糖、动物多糖、藻类多糖等，其中真菌多糖研究较少。cn102895172a公开了一种具有抗衰保湿促透功效的松茸提取物、制备方法及其应用，公开了一种松茸多糖的提取方法及其在护肤品中的应用。但对于松茸与其他的其他的菌类提取物协同作用还有待于进一步研究，单一松茸多糖的抗衰性能也有待于进一步提升。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是克服现有抗衰产品抗衰性能的缺陷和不足，提供一种抗衰组合物，可以有效清除自由基，抑制酪氨酸酶并且促进胶原蛋白的生成，从而达到均匀肤色、美白、抗衰老的功效。本发明的另一目的在于提供一种抗衰组合物的制备方法。本发明的再一目的在于提供所述抗衰组合物在制备抗衰护肤制品中的应用。本发明的又一目的在于提供一种抗衰护肤制品。本发明上述目的通过以下技术方案实现：一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物5～20份、长裙竹荪提取物0.5～10份、桦褐孔菌提取物0.5～10份。本发明的抗衰组合物通过松茸提取物、长裙竹荪提取物和桦褐孔菌提取物的协同作用，可有效地清除dpph自由基和abts自由基，有效地抵抗自由基的生成，且可以抑制酪氨酸酶,并且促进胶原蛋白的生成，从而达到均匀肤色、美白、抗衰老的功效。其中：松茸的提取物中含有含有18种氨基酸、14种人体必需微量元素、49种活性营养物质、5种不饱和脂肪酸、8种维生素、2种糖蛋白和丰富的膳食纤维和多种活性酶，其中多糖、多肽、甾类、萜类、油脂以及多种酶等物质具有显著的护肤活性，在护肤方面，松茸多糖和多肽更为有靶向性，具有美白、保湿、抗衰等功效。松茸多糖有很好的抗氧化作用，通过抗氧化作用清除超氧阴离子自由基、dpph自由基和羟基自由基，抑制或者阻断自由基引发的脂质过氧化反应，增强sod、cat和gsh-px的抗氧化活性，抑制mda水平升高，降低组织细胞过氧化程度，增强免疫功能，延缓衰老。松茸多糖和松茸三萜具有很好的抑制酪氨酸酶的活性，其中多糖tmsp-6ii被报道抑制黑色素生成能力优于熊果苷。松茸多糖能够很好的抑制由衰老引起的色素沉重、肤色不均问题，多糖tmsp活性成份可以使得皮肤白皙光亮并把现有的黑色素转化为淡黑素，与此同时，还能进一步调整淡黑素的形成，不再继续形成黑色素，从而达到美白抗衰的功效。长裙竹荪提取物富含多糖、蛋白质、氨基酸、维生素和无机盐等多种活性成分，具有优异的美白、抗氧化、延缓衰老和抑菌等功效。竹荪含有多种氨基酸，对皮肤有很好的营养、滋润作用，不仅可显著提高机体免疫能力，而且可使血液中氧合血红蛋白释放更多的氧，以供给组织细胞，而且对皮肤中的黑色素沉淀有明显的改善作用。桦褐孔菌含有多糖、桦褐孔菌素、桦褐孔菌醇、超氧化物歧化酶(sod)和多种氧化三萜类化合物。桦褐孔菌的超氧化物歧化酶(sod)是灵芝的55倍、巴西蘑菇的23倍、猴头菇的25倍，超氧化物歧化酶(sod)是保护细胞对抗ros的关键元件。而水溶性多糖如1，3β葡聚糖、1，6β葡聚糖高达55.6mg/g。桦褐孔菌提取物能够清除体内的自由基，保护细胞，延长传代细胞的分裂代数，增进细胞寿命，促进代谢，因而能有效地延缓衰老，可改善并预防过敏性体制，可作为有效的抗氧化剂和抗炎，可以作用于细胞的分化(外皮蛋白)和表皮凝聚力(整联蛋白-b1，紧密连接蛋白1，闭合蛋白)，刺激基底层和血管壁结构胶原蛋白iv的合成、从而起到加强皮肤屏障、加强表皮凝聚力，保护和舒缓肌肤，可作为有效的抗氧化剂和抗炎剂。优选地，松茸提取物10～20份、长裙竹荪提取物2～10份、桦褐孔菌提取物1～10份。更优选地，包括如下质量份数的组分：松茸提取物10份、长裙竹荪提取物2份、桦褐孔菌提取物1份。本发明还保护上述抗衰组合物的制备方法，包括如下步骤：s1.将松茸、长裙竹荪和桦褐孔菌加水浸泡，常压萃取分离得到上清液，脱色处理，减压蒸馏制备得到浸膏；s2.将上述浸膏加入乙醇混合，静置离心，分离得到沉淀即为抗衰组合物，其中s1中萃取温度为50～80℃，萃取时间为2～5h，减压蒸馏温度为45～75℃。优选地，s1中加水浸泡的料液比为1:10～20，例如可以为1:10、1:15或1:20，更优选料液比为1:10。优选地，s2中浸膏与乙醇的质量比为1:1～5，例如可以为1:1、1:3或1:5。更优选地，s2中浸膏与乙醇的质量比为1:3。随着水浴温度的升高，分子热运动加快，多糖得率也随之增加，而温度达到80℃以上时，多糖含量增加比较缓慢。由于多糖是活性物质，温度过高会破环其结构，影响其生物活性，对后面的实验造成不利影响，故其提取温度以50～80℃为宜。不同的料液比会影响到提取溶剂对活性物质的溶解情况。料液比例低，活性物不能充分溶解，影响到提取率。料液比例过高，则活性物浓度偏低，后续的纯化浓缩步骤会增多。上述抗衰组合物在制备抗衰护肤制品中的应用也在本发明的保护范围之内。本发明的抗衰组合物能够有效清除自由基，并抑制酪氨酸酶，促进胶原蛋白的生成，具有优异的保湿、美白和抗衰作用，可以广泛应用于抗衰护肤制品的制备中。本发明还保护一种抗衰护肤制品，由所述抗衰组合物和可接受的辅料制备得到。优选地，所述抗衰护肤制品中抗衰组合物的质量含量为1～10％。优选地，所述抗衰护肤制品中抗衰组合物的质量含量为5～10％。与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供了一种抗衰组合物，通过松茸提取物、长裙竹荪提取物和桦褐孔菌提取物的协同作用，清除abts自由基的ic50值可以降低到0.52％，清除dpph自由基的ic50值可以降低到0.46％可有效地清除dpph自由基和abts自由基，有效地抵抗自由基的生成。而且，本发明的抗衰组合物且抑制酪氨酸酶的ic50值可以降低到2.45％，抑制弹性蛋白酶的ic50值可以降低到0.16％，可以很好的抑制酪氨酸酶并且促进胶原蛋白的生成，从而达到均匀肤色、美白、抗衰老的功效。附图说明图1为志愿者使用样品前后除皱效果照片图2为志愿者使用样品前后美白均匀肤色效果照片具体实施方式下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非另有说明，本发明实施例采用的原料试剂为常规购买的原料试剂。实施例1一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物5份、长裙竹荪提取物0.5份、桦褐孔菌提取物0.5份。其中，上述抗衰组合物的制备方法如下：s1.准确称取各松茸、长裙竹荪、桦褐孔菌原料成分，按料液质量比1:10，加入去离子水，常温浸泡4小时，再70℃常压萃取3h，过滤布，取其上清液后离心处理，离心的转速为4000rpm，离心时间为10分钟得上清液；上清液再过滤离心。微滤膜处理，进行脱色处理，减压蒸馏，浓缩液50℃加热处理，得浸膏，备用；s2.将提取浸膏加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1：3，静置6小时后，对混合液(浓缩液和无水乙醇的混合液体)进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间10分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后备用。实施例2一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物15份、长裙竹荪提取物5份、桦褐孔菌提取物3份。其中，上述抗衰组合物的制备方法与实施例1相同。实施例3一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物10份、长裙竹荪提取物2份、桦褐孔菌提取物1份。其中，上述抗衰组合物的制备方法与实施例1相同。实施例4一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物20份、长裙竹荪提取物10份、桦褐孔菌提取物10份。其中，上述抗衰组合物的制备方法与实施例1相同。实施例5一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物10份、长裙竹荪提取物2份、桦褐孔菌提取物1份。其中，上述抗衰组合物的制备方法如下：s1.准确称取各松茸、长裙竹荪、桦褐孔菌原料成分，按料液质量比1:20，加入去离子水，常温浸泡4小时，再80℃常压萃取5h，过滤布，取其上清液后离心处理，离心的转速为4000rpm，离心时间为10分钟得上清液；上清液再过滤离心。微滤膜处理，进行脱色处理，减压蒸馏，浓缩液50℃加热处理，得浸膏，备用；s2.将提取浸膏加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1:5，静置6小时后，对混合液(浓缩液和无水乙醇的混合液体)进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间10分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后备用。实施例6一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物5份、长裙竹荪提取物2份、桦褐孔菌提取物1份。其中，上述抗衰组合物的制备方法如下：s1.准确称取各松茸、长裙竹荪、桦褐孔菌原料成分，按料液质量比1:10，加入去离子水，常温浸泡4小时，再50℃常压萃取2h，过滤布，取其上清液后离心处理，离心的转速为4000rpm，离心时间为10分钟得上清液；上清液再过滤离心。微滤膜处理，进行脱色处理，减压蒸馏，浓缩液50℃加热处理，得浸膏，备用；s2.将提取浸膏加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1:1，静置6小时后，对混合液(浓缩液和无水乙醇的混合液体)进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间10分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后备用。实施例7一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物5份、长裙竹荪提取物2份、桦褐孔菌提取物1份。其中，上述抗衰组合物的制备方法如下：s1.准确称取各松茸、长裙竹荪、桦褐孔菌原料成分，按料液质量比1:15，加入去离子水，常温浸泡4小时，再60℃常压萃取3h，过滤布，取其上清液后离心处理，离心的转速为4000rpm，离心时间为10分钟得上清液；上清液再过滤离心。微滤膜处理，进行脱色处理，减压蒸馏，浓缩液50℃加热处理，得浸膏，备用；s2.将提取浸膏加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1:3，静置6小时后，对混合液(浓缩液和无水乙醇的混合液体)进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间10分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后备用。实施例8一种抗衰护肤制品，具体成分如下表1：表1制作工艺：1、加热溶解b相，85℃，持续搅拌20分钟以上，完全溶解分散依次加入c相，保持温度80℃，搅拌混合均匀；2、边搅拌边将预溶好的d相加入(b+c)相，保持温度80℃，搅拌混合均匀；3、a相加热搅拌至80℃，保温5分钟，完全溶解分散；4、边搅拌边将a相加入(b+c+d)相，均质2分钟，然后搅拌降温；5、45℃时边搅拌边依次加入e相各原料，搅拌混合均匀，降至室温，可出料。实施例9一种抗衰护肤制品，具体成分如下表2：表2制作工艺与实施例8相同实施例10一种抗衰护肤制品，具体成分如下表3：表3制作工艺与实施例8相同对比例1一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物5份、长裙竹荪提取物2份。其中，上述抗衰组合物的制备方法如下：s1.准确称取各松茸、长裙竹荪原料成分，按料液质量比1:10，加入去离子水，常温浸泡4小时，再70℃常压萃取3h，过滤布，取其上清液后离心处理，离心的转速为4000rpm，离心时间为10分钟得上清液；上清液再过滤离心。微滤膜处理，进行脱色处理，减压蒸馏，浓缩液50℃加热处理，得浸膏，备用；s2.将提取浸膏加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1：3，静置6小时后，对混合液(浓缩液和无水乙醇的混合液体)进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间10分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后备用。对比例2一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物5份、桦褐孔菌提取物1份。其中，上述抗衰组合物的制备方法如下：s1.准确称取各松茸、桦褐孔菌原料成分，按料液质量比1:10，加入去离子水，常温浸泡4小时，再70℃常压萃取3h，过滤布，取其上清液后离心处理，离心的转速为4000rpm，离心时间为10分钟得上清液；上清液再过滤离心。微滤膜处理，进行脱色处理，减压蒸馏，浓缩液50℃加热处理，得浸膏，备用；s2.将提取浸膏加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1：3，静置6小时后，对混合液(浓缩液和无水乙醇的混合液体)进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间10分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后备用。对比例3一种抗衰组合物，包括如下质量份数的组分：松茸提取物5份、长裙竹荪提取物2份。其中，上述抗衰组合物的制备方法如下：s1.准确称取各松茸、长裙竹荪提取物原料成分，按料液质量比1:10，加入去离子水，常温浸泡4小时，再70℃常压萃取3h，过滤布，取其上清液后离心处理，离心的转速为4000rpm，离心时间为10分钟得上清液；上清液再过滤离心。微滤膜处理，进行脱色处理，减压蒸馏，浓缩液50℃加热处理，得浸膏，备用；s2.将提取浸膏加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的质量比为1：3，静置6小时后，对混合液(浓缩液和无水乙醇的混合液体)进行离心，离心的转速为5000rpm，离心的时间10分钟；取沉淀，加少许纯水复溶后备用。结果检测对上述实施例和对比例的抗衰组合物及其制备的抗衰护肤制品的保湿、美白、抗衰性能进行检测，具体检测指标如下：(1)抑制酪氨酸酶测试检测方法：底物0.5mmol/l邻苯二酚加上样品和马铃薯酶液后，将配好的溶液混合于37℃反应10min后，在480nm测试其吸光度值。表4.试剂用量表样品名称样品反应液asample1ml样品溶液+3ml邻苯二酚+1ml马铃薯酶液asampleblank1ml样品溶液+3ml去离子水+1ml马铃薯酶液acontrol1ml去离子水+3ml邻苯二酚+1ml马铃薯酶液acontrolblank4ml去离子水+1ml马铃薯酶液摇匀后，置于37℃水浴锅中反应10min，加入比色皿中测定480nm吸光度，测出asample、acontrol、acontrolblank和asampleblank所表示的吸光度值，清除率sa按以下公式计算：sa(％)＝1-(asample-asampleblank)/acontrol-acontrolblank×100式中：acontrol——未加样液的底物+酶溶液的吸光度；asample——加入样液后的底物+酶溶液的吸光度；asampleblank——样液与酶液混合后的吸光度。acontrolblank——去离子水与酶液混合后的吸光度。处理实验数据时，以清除率为纵坐标，浓度为横坐标，绘制线性回归曲线；再根据线性回归曲线，计算出清除率为50％时样品的浓度，即样品的ic50。ic50越小，抑制酪氨酸酶性能越好。检测结果如表5所示：表5(2)清除abts自由基测试检测方法：取0.0038gabts溶于去离子水，并用水定容到10ml的容量瓶中，再取0.0013g过硫酸钾溶于去离子水，并定容到10ml的容量瓶中，然后将配好的两种溶液混合，于室温黑暗中静置20h后，用去离子水稀释至734nm的吸光值为0.80±0.2。表6.abts法实验加样表样品名称样品反应液asample0.2ml样品溶液+1.8mlabts·+溶液acontrol0.2ml去离子水+1.8mlabts·+溶液asampleblank2ml去离子水摇匀后，置于30℃水浴锅中反应6min，加入比色皿中测定734nm的吸光度，测出asample、acontrol和asampleblank所表示的吸光度值，清除率sa按以下公式计算：sa(％)＝1-(asampleasampleblank)/acontrol×100式中：acontrol——未加样液的abts·+溶液的吸光度；asample——加入样液后的abts·+溶液的吸光度；asampleblank——样液与去离子水混合后的吸光度。处理实验数据时，以清除率为纵坐标，浓度为横坐标，绘制线性回归曲线；再根据线性回归曲线。ic50越小，清除abts自由基性能越好。检测结果如表7所示：表7序号清除abts自由基ic50(％)实施例11.09实施例20.85实施例30.42实施例40.52实施例50.73实施例60.85实施例70.69对比例11.35对比例21.72对比例31.60(3)清除dpph自由基检测方法：试验方法：取0.003gdpph用无水乙醇定容到50ml，利用dpph溶液在517nm处特征紫红色团的吸收峰，用紫外-可见分光光度法测定加提取液后的吸光度减小来表示其对自由基清除能力，下表分组加反应液。表8.dpph法实验加样表样品名称样品反应液asample1ml样品溶液+1mldpph溶液acontrol1ml无水乙醇+1mldpph溶液asampleblank1ml去离子水+1ml无水乙醇用力摇匀后，将asample所表示的样品在室温下静置30min后，加入比色皿中测定517nm的吸光度，测出asample、acontrol和asampleblank所表示的吸光度值，清除率sa按以下公式计算：sa(％)＝1-(asampleasampleblank)/acontrol×100式中：acontrol——未加样液的dpph溶液的吸光度；asample——加入样液后的dpph溶液的吸光度；asampleblank——样液与无水乙醇混合后的吸光度。处理实验数据时，以清除率为纵坐标，浓度为横坐标，绘制线性回归曲线；再根据线性回归曲线。ic50越小，清除dpph自由基性能越好。检测结果如表9所示：表9序号清除dpph自由基ic50(％)实施例11.19实施例20.95实施例30.46实施例40.52实施例50.83实施例60.98实施例70.73对比例11.52对比例21.89对比例31.78(4)抑制弹性蛋白酶测试检测方法：溶液配制：配制0.05mol/lph8.8tris-hcl缓冲液，用此缓冲液配制1.0×10.5mol/l弹性蛋白酶，并且保存于4℃冰箱中备用。用tris-hcl缓冲液配制浓度为5.0×10.4mol/l鞣花酸，临用时稀释成不同浓度的样品溶液。荧光光谱法：分别向具塞三角烧瓶中依次加人2ml弹性蛋白酶溶液，2ml不浓度的鞣花酸，在恒温水浴中振荡20rain，并且以tris—hci缓冲溶液为参比，设定荧光激发狭缝为2.5nm，发射狭缝为10.0nm，固定激发波长为278nm，在288～500nm自动扫描记录荧光发射光谱；同定激发波长与发射波长之差分别为15nm和60dm，在200～400nm自动扫描记录同步荧光光谱。ic50越小，抑制弹性蛋白酶性能越好。检测结果如表10所示：表10(5)人体使用评价从产品的保湿性、美白性、淡斑性、皮肤弹性、抗皱性几个方面进行评估，评估方法采用试用调查评分法。选取20位35-55岁年龄段的女性作为使用对象，每天使用2次，联系使用56天，有消费者自评，三个配方样品不同人群使用，各项使用效果总分为5分，5分为最高分，表示极好，非常满意，；4分为很好；3分为可以接受；3分一下为不好，不能接受。志愿者使用效果如图1和图2所示，据图评分结果如下：以下为各项平均得分，结果见下试用调查汇总表11。表11使用效果基质组实施例8实施例9实施例10保湿性2.84.53.54.4美白性2.54.63.44.6淡斑性2.34.53.24.5皮肤弹性2.44.73.84.8抗皱性2.54.83.74.9显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。当前第1页12