一种LncRNA抑制剂在制备减肥药物中的应用的制作方法

一种lncrna抑制剂在制备减肥药物中的应用
(一)技术领域
[0001]
本发明涉及一种lncrna抑制剂在制备减肥药物中的应用。
(二)

背景技术：

[0002]
随着社会经济的快速发展，我国乳腺癌的发病率逐年增加且呈现出年轻化趋势。与其他国家相同，乳腺癌位居我多女性恶性肿瘤发病率首位。在全球乳腺癌新诊断病例中，我国占12.2％。调查显示，我国2015年乳腺癌新诊断病例27.24万人，占全部恶性肿瘤的15％，死亡人数2.07万人，严重威胁着女性的身体健康和生活质量。因此，乳腺癌的有效治疗具有重要的社会意义。
[0003]
肥胖是体内脂肪堆积过多或分布异常所引起的慢性代谢性疾病，根据《中国成人超重和肥胖预防控制指南》，中国成人体重指数(bmi)正常范围为18.5kg/m
2-23.9 kg/m2，<18.5kg/m2为体重过低，24.0-27.9kg/m2为超重，≥28kg/m2为肥胖。2019年《全球营养不良状况报告》显示，中国有超过3亿超重和肥胖人群，因肥胖诱发的各类代谢性疾病的发病率也居高不下，过度肥胖还会促进癌症的发生。《国际癌症杂志》 (international journal of cancer)全面深入阐述了超重/肥胖与各类恶性肿瘤发生的关系，当bmi超过超重标准后，总体恶性肿瘤发生风险即开始显著增加。bmi超过超重标准后，每增加5个单位，乳腺癌的发生风险增加11％。并且肥胖女性乳腺癌患者中，高bmi与更差的长期预后相关。
[0004]
肥胖能够破坏人体内环境稳态，脂肪因子在体内不断地攻击人体的免疫和内分泌系统，长期必然使机体代谢受到影响。一般的，肥胖人群的胰岛细胞功能受损，不能及时有效地调节血糖，随之而来的就是高血糖、高血脂和高血压的发生。
[0005]
lncrna是一类长度大于200个核苷酸没有编码蛋白质能力的rna，缺乏可识别的开放阅读框架。尽管在起初认为lncrna是基因组转录的“噪音”，不具有生物学功能，但是，近年来许多研究表明，lncrna通过调节蛋白质、dna、rna的表达来调控细胞的细胞周期、分化和表观遗传等许多生命活动。因此，lncrna的异常表达会引发癌症，lncrna可能是肿瘤细胞中的潜在的生物标志物。越来越多的研究表明，lncrna在癌症的发生、发展过程中起了重要作用。
(三)

技术实现要素：

[0006]
本发明目的是提供一种lncrna抑制剂在制备减肥药物中的应用，本发明所述的lncrna抑制剂可以显著降低体重的增加，对于肥胖引起的乳腺癌的治疗具有一定的辅助作用。
[0007]
本发明采用的技术方案是：
[0008]
本发明提供一种lncrna抑制剂在制备减肥药物中的应用，所述lncrna抑制剂核苷酸序列为：5'-gaccagtgttaactgcttcctgatgacag-3'(seq id no.1)。
[0009]
进一步，所述药物为抑制lncrnaloc339535表达的药物，所述 lncrnaloc339535核苷酸序列为(seq id no.2)：
[0010]
tggaattcaagctgtgggtgagaagctctctagcagggactctgaccttat ggaggatcgctgtttcccccatttttccttttcacccaaaaaagtcctgcttctc tcacccttcaaacagcctgtgagcctaaatttttgtggccatgggacagacaag gaccccgtcttcagctgaactaaggaaaagtcctgcgacatctttggtacgcac tgtggaggctctacaaacagccatcaaactccaaccagtcacccaaccagagc ctctgaggatggccccttctgcggggaacccttacatgggcctctgactgatgc ttccccaaaacagtgccccctgtcatcaggaagcagttaacactggtcttcatt cttacgcttatccttattctaacagcagttatatgtacttctttagacgggggaat aagacagccaggtgggagggggtctctggaaaactccatctggcctgtgcact agggtggaacctcaggaagttgatgacatttgtagctgggagcagcctggccc ctcctcttcctgtgtggaacctgaaattccaccggcttggcaggaagcgctcta gcagggactccggctttgcagagcatccctgtttccccgtttttcccttttcacc caataaaaccctgcttcactcacccttcaaaccatctgcaagcctaaatttttgt ggctgtgggacggacaaagatgcctttagctgactgaggaaaagtcctgcaac acaggtatcactgcacatttataatattgtttctctgttttaaaccttgtataaata ggaaaatattgtatataatctcaagcagattgttttcttttgaaaagtattcatata tgttaaagatgtagttctagttcattcattttctctgttttgactcttttatacata tactacagctcatttatccattttcctactgttgcaacatagattgcttataattct tctaattactaacaatgctggtatgaaattgttgtgtatatctctggtagatatgtg ttatttcttttttgcaatgctagattataattatttgtctaaggtggagattaccag ggtagactcgctctggccgtatgtaatgatgtctgtggctacataacctgccaac acttagtcttatcacacattttattttaaaatcaatatgtaaaaaatactaatttac ttggtagtaatttaaatttttctgattattactgaggttgaatatgttttcatatgt ttactgaatattcctgttaattttctcatgaatttcagttaatgtttctgttgattt tattaatttgtagtggttttgaaacatattctagaaaccaatattttgtctgttgta tgtgttacaaatatatttattttgtatagcttcttcatatttagtacttttacaattt taacagtaaaattagtttcatgttttatagctataattattataacttttaaataaat atttcctcaattaaaataaaaatgcattatccttaaaaaaaaaaa。
[0011]
进一步，所述药物为辅助治疗肥胖引起的乳腺癌的药物。
[0012]
进一步，所述药物还包括药学上可用的载体，所述载体为胆固醇、脂质体、纳米颗粒中的一种或多种。
[0013]
本发明所述药物以注射的方式给药，注射给药方式包括肌肉注射、静脉注射和皮下注射，所述药物中lncrna抑制剂的含量为1mg/ml。
[0014]
肥胖的乳腺癌患者预后更差，生存率更低，lncrnaloc339535在三阴乳腺癌中特异性表达，本发明通过实验发现lncrnaloc339535能诱导小鼠肥胖，通过注射 lncrna抑制剂能显著抑制小鼠体重增加。本发明提供的lncrna抑制剂能够抑制 lncrnaloc339535表达，进而用于辅助治疗肥胖引起的乳腺癌。
[0015]
与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：本发明所述的lncrna抑制剂可以显著降低体重的增加，辅助治疗肥胖引起的乳腺癌。本发明所用原料科学合理，制备工艺简单，成本较低，辅助治疗效果较好。
(四)附图说明
[0016]
图1为lncrnaloc339535的过表达促进了肥胖。
[0017]
图2为lncrnaloc339535在肥胖的乳腺癌患者中高表达。
[0018]
图3为lncrnaloc339535抑制剂对小鼠体重增长的抑制作用。
12000rpm离心10min，去上清。加入1ml rnase-free水配置的75％乙醇洗涤沉淀。4℃、 8000rpm离心5min，弃上清。室温晾干20min，根据rna沉淀量，加入适量rnase-free 水，溶解rna。
[0037]
2、使用诺唯赞公司反转录试剂盒，将rna逆转录为cdna。以此cdna为模板，采用实时荧光定量pcr试剂盒检测lncrnaloc339535的表达量。
[0038]
根据ncbi blast设计lncrnaloc339535检测引物(loc339535 f、 loc339535 r)及内参引物(18s f、18s r)：
[0039]
loc339535 f：5'-aaaacagtgccccctgtca-3'，
[0040]
loc339535 r：5'-gttccaccctagtgcacagg-3'。
[0041]
18s f：5
’-
ggacacggacaggattgaca-3’，
[0042]
18s r：5
’-
gacatctaagggcatcacag-3’。
[0043]
表1、反应体系
[0044]
试剂体积(微升)sybr mix5cdna模板1primer f0.2primer r0.2双蒸水3.6
[0045]
荧光定量pcr的条件为：95℃预变性30s，95℃变性15s，60℃退火30s，72℃延伸20s，共40个循环，然后计算分析熔解曲线及循环数cq值。按照内参18s的cq 值对各组进行平衡，计算2-δδcq
指示该lncrnaloc339535的相对丰度，所有组织样品进行lncrnaloc339535含量检测，统计分析。检测乳腺癌肿瘤中的 lncrnaloc339535表达水平，lncrnaloc339535在肥胖的乳腺癌患者中高表达(图 2)。
[0046]
实施例4：lncrna抑制剂抑制体重增长实验
[0047]
本实施例以实施例1高脂饲料喂养10周的lncrnaloc339535基因敲入小鼠为实验对象，分为2组，每组6只。一组为对照组，不给药：另一组为实验组，给药。
[0048]
1、小鼠准备：每组实验小鼠数量为6只，先将每只小鼠称重。
[0049]
2、注射给药：将小鼠轻轻抓起，操作1ml注射器在脂肪垫部位注射lncrna抑制剂(seq id no.1，以纳米颗粒为载体，溶剂为水)。按照0.2mg/kg的剂量给药。
[0050]
3、将小鼠轻轻放回鼠笼，给每笼小鼠补充鼠粮(高脂)和水。
[0051]
4、隔一天后再次给药，重复步骤1、2、3。共持续14天，给药7次。
[0052]
图3为注射lncrna抑制剂后小鼠体重变化，结果显示通过注射lncrna抑制剂能显著抑制小鼠体重增加。
[0053]
本发明所述的lncrna抑制剂可以显著降低体重的增加，适用于肥胖引起的乳腺癌辅助治疗。本发明所用原料科学合理，制备工艺简单，成本较低，辅助治疗效果较好。
[0054]
上述实施例的说明用于理解本发明的方法及主要思想。应当说明，对于本领域的技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行一些改进，这些改进也在本发明权利要求的保护范围内。