一种马齿苋提取物的制备方法和产品及其应用与流程

1.本发明属于日化技术领域，具体涉及到一种马齿苋提取物的制备方法和产品及其应用。


背景技术：

2.头皮屑是一种常见的头皮类问题，在全球范围内均普遍存在。研究表明，头皮屑产生的主要原因是马拉色菌在头皮上的滋生。头皮屑出现的三个主要因素为：马拉色菌定植，皮脂分泌和个体倾向。在头皮屑病因学方面，皮脂对马拉色菌的重要性相当明显。首先，处于青春期的男性和女性在皮脂腺成熟时会产生更多的皮脂；其次，除厚皮马拉色菌外所有的马拉色菌属都需要皮脂脂肪作为营养源，它们通常与富含油脂的皮肤区域有关，如头皮。第三，在患有头屑和正常受试者的头皮上局部施用7.5％的油酸(一种皮脂成分)，患有头屑的受试者病症会进一步加重，而正常受试者则不会产生头屑。说明除了马拉色菌外，头皮屏障功能的受损也是产生头皮屑的一个重要因素。患有头皮屑的人群头皮屏障功能的改变，可能是因为头皮受到长期的损伤(如清洁过度、烫染过度、抓挠用力过度等)，而导致头皮产生炎症，这些屏障功能的紊乱，则会导致头皮表皮细胞的异常分化和增生从而引起头屑。
3.目前，市场上主要采用含有抗真菌剂(zpt等)的发用制品来抑制头皮屑的产生。由于人们对天然、绿色产品的诉求和流行趋势的衍化，以植物提取物作为功效添加剂的祛屑产品越来越受到人们的关注，并且与化学合成物相比，植物提取物作用温和、刺激性较低。
4.研究表明，许多植物提取物中均含有具有抑菌活性的物质，如黄酮类等，但植物提取物应用到化妆品中还存在着巨大的挑战：第一，许多植物提取物往往含有较深的色素、特殊的气味，在应用到化妆品的过程中可能会对化妆品的感官性能产生影响；第二，许多植物提取物中还含有一些离子、蛋白质等，可能会对化妆品的稳定性产生影响；第三，一般来说植物的提物相比化学类物质往往不具有较好的功效，难以应用到化妆品中；有些植物原料的价格昂贵，甚至是化学原料的成百上千倍，应用到化妆品中会使得其成本变得更高。
5.因此，本领域亟需一种天然温和、价格低廉、功效卓越的植物祛屑原料来取代或部分取代化学提取物。


技术实现要素：

6.本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
7.鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。
8.因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种马齿苋提取物的制备方法。
9.为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种马齿苋提取物的制备方法，包括，将马齿苋干燥，碎过20～36目筛，加入水，超声处理，过滤，即得马齿苋粗提取物；
将马齿苋粗提物脱蛋白处理，得马齿苋脱蛋白提取物；将马齿苋脱蛋白提取物，经d101大孔树脂柱洗脱，用去离子水洗脱，收集1bv～2bv洗脱液，吸附脱色，得脱色后水洗脱液，冷冻干燥后得白色粉末；将冷冻干燥后得白色粉末放入3500da透析袋中，透析处理，取透析袋内液，将透析得到的产物经葡聚糖凝胶g
‑
150分离纯化，以0.1mol/l nacl作为洗脱剂，收集洗脱峰区域的洗脱液，浓缩后透析去盐并冷冻干燥，得到所述马齿苋提取物。
10.作为本发明所述马齿苋提取物的制备方法的一种优选方案，其中：所述得马齿苋粗提取物，其中，提取温度为50～70℃，提取时间为40～60min，料液比为1:20～30，超声功率为165～255w。
11.作为本发明所述马齿苋提取物的制备方法的一种优选方案，其中：所述提取温度为70℃，提取时间为50min，料液比为1:25，超声功率为210w。
12.作为本发明所述马齿苋提取物的制备方法的一种优选方案，其中：所述马齿苋粗提物脱蛋白处理，包括，
13.取马齿苋提取液10mg/ml、1ml，加入1ml sevag试剂，剧烈震荡20min，离心去除析出的蛋白，上清液再加入1ml sevag试剂，剧烈震荡20min，离心去除析出的蛋白，重复3～5次，直至没有不溶物产生。
14.作为本发明所述马齿苋提取物的制备方法的一种优选方案，其中：所述d101大孔树脂柱洗脱，其中，
15.d101大孔树脂的预处理：将d101大孔树脂用去离子水浸泡24h充分溶胀，用5％盐酸溶液浸泡4h后，用水洗至中性，再用5％氢氧化钠溶液浸泡4h，水洗至中性，然后用95％乙醇浸泡12h，抽滤，树脂用去离子水洗至无醇味后，去离子水浸泡待用
16.作为本发明所述马齿苋提取物的制备方法的一种优选方案，其中：所述吸附脱色为活性炭吸附法。
17.因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种马齿苋提取物的制备方法制得的产品。
18.为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种马齿苋提取物的制备方法制得的产品，所述产品，分子量分布为：mn为20340da，mw为175246da，mp为19749da，重均分子量为175246da。
19.作为本发明所述马齿苋提取物的制备方法的产品一种优选方案，其中：所述产品在紫外线照射下具有良好的稳定性；具有良好的储存稳定性；在浓度低于50mg/ml时，几乎无刺激性；马齿苋提取物产品和oct之间具有协同作用。
20.因此，本发明另一个目的是，克服现有技术中的不足，提供一种马齿苋提取物的制备方法制得的产品在在化妆品中的应用，所述应用包括，在香波、护发素配方中的应用，其添加对配方的感官及理化指标几乎无影响，对配方的稳定性也几乎无影响；且其仍然具有良好的抑菌效果。
21.本发明有益效果：
22.(1)本发明以寻找天然温和的祛屑剂为目标，从众多植物提取物中筛选出具有显著抑制糠秕马拉色菌作用的植物，再对其提取物进行分离纯化，得到马齿苋提取物，在紫外线照射下具有良好的稳定性；具有良好的储存稳定性；在浓度低于50mg/ml时，几乎无刺激性；且和oct之间具有协同作用。
23.(2)本发明制得的提取物，将其应用于香波、护发素以及发膜配方中的应用，其添加对配方的感官及理化指标几乎无影响，对配方的稳定性也几乎无影响；且其仍然具有良好的抑菌效果。
附图说明
24.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
25.图1为本发明实施例中不同植物提取物的抑菌圈直径对比图。
26.图2为本发明实施例中葡聚糖凝胶g
‑
150柱层析洗脱曲线图。
27.图3为本发明实施例中hpgfc法测定php
‑
1的分子量图。
28.图4为本发明实施例中php
‑
1红外光谱图。
29.图5为本发明实施例中php
‑
1的紫外吸收光谱图。
30.图6为本发明实施例中单糖对照品和php
‑
1的离子色谱图。
31.图7为本发明实施例中温度对php
‑
1抑菌活性的影响图。
32.图8为本发明实施例中紫外线对php
‑
1抑菌活性的影响图。
33.图9为本发明实施例中ph对php
‑
1抑菌活性的影响图。
34.图10为本发明实施例中存储时间对php
‑
1抑菌活性的影响图。
35.图11为本发明实施例中不同浓度php
‑
1的红细胞溶血率图。
36.图12为本发明实施例中棋盘法示意图。
具体实施方式
37.为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
38.在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
39.其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
40.本发明中穿心莲(andrographis paniculata(burm.f.)nees)、当归(angelica sinensis(oliv.)diels)、白鲜皮(dictamnus dasycarpus t.)、鱼腥草(houttuynia cordata thunb.)、红花(carthamus tinctorius l.)、马齿苋(portulaca oleracea l.)、黄连(coptis chinensis franch.)、大黄(rheum palmatum l.)、肉桂(cinnamomum cassia presl)、射干(belamcanda chinensis(l.)dc.)、蛇床子(cnidium monnieri(l.)cuss.)、艾叶(artemisia argyi levi.et vant.)、桑白皮(morus alba l.)、公丁香(syzygium aromaticum)、姜黄(curcuma longa l.)、苦参(sophora flavescens ait.)、南沙参(adenophora stricta miq.)、厚朴(magnolia officinalis rehd.et wils.)均购自无锡
同仁堂药店。
41.地肤子(kochia scoparia(l.)schrad.)、蒲公英(taraxacum mongolicum hand.
‑
mazz.)和桃花(prunus persica(l.)batsch)购自河北省安国市旭芳中药材经营有限公司。以上药材均粉碎过36目筛，存放于塑封袋中，置于干燥器中保存。
42.zpt，可隆化工；oct，英国维曼。
43.本发明供试菌种：糠秕马拉色菌(atcc 44344)，购自广东省微生物菌种保藏中心。
44.实施例1
45.本发明提取实验：
46.(1)药材的提取溶剂、提取方法及提取时间如表1所示。
47.表1
[0048][0049]
[0050]
提取药材后，将提取液浓缩至恒重，再用相应的提取溶剂复溶至浓度为200mg/ml。
[0051]
(2)植物提取物的抑菌效果测定
[0052]
21种植物提取物中有9种表现出了抑制糠秕马拉色菌的活性，其抑菌能力如图1示。虽然21种植物提取物均有文献报道其抑菌效果，但是由于菌种的不同，实验方法的差异等因素，使得所选择的的提取物表现出了不同的抑菌效果。
[0053]
其中，php(马齿苋)表现出了最高的抑菌活性，抑菌圈直径为38.03
±
0.83mm，地肤子提取物的抑菌圈直径其次，为36.98
±
0.79mm，蛇床子提取物的抑菌圈直径为35.28
±
0.03mm。空白对照组均无抑菌圈，阳性对照zpt的抑菌圈直径为31.72
±
0.66mm。
[0054]
(3)植物提取物的mic
[0055]
不同植物提取物和zpt及oct的最小抑菌浓度如表2所示。由表2可知，php的最小抑菌浓度最低，为0.781mg/ml，地肤子提取物的最小抑菌浓度为1.563mg/ml。zpt的最小抑菌浓度为0.004mg/ml。可知植物提取物的抑菌效果要比zpt弱很多。综合植物提取物的抑菌圈直径可得，php的抑菌圈直径和最小抑菌浓度都为最佳，其次为地肤子提取物。蛇床子提取物的抑菌圈直径较大，但其最小抑菌浓度较高。黄连提取物的最小抑菌浓度较低，但其抑菌圈直径相比php要小很多，综合考虑，本发明优选马齿苋作为提取物进一步研究。
[0056]
表2
[0057][0058][0059]
实施例2
[0060]
正交实验法优化提取工艺选取提取温度(a，℃)、提取时间(b，min)、料液比(c，g/ml)、超声功率(d，w)为条件，以抑菌活性和得率为考查指标，采用l9(34)正交实验，对马齿苋有效抑菌成分的提取工艺进行优化，因素水平设计见表3。
[0061]
表3
[0062][0063]
各因素的正交实验考察结果见表4。
[0064]
四个因素中对php抑菌效果影响最大的是提取温度，最小的是超声功率。最佳组合为a3b2c2d2，即提取温度为70℃，提取时间为50min，料液比为1:25，超声功率为210w。按上述确定的反应条件进行三次平行实验，测定所得php(200mg/ml)对糠秕马拉色菌的抑菌效果，结果显示，抑菌圈直径分别为47.48mm，48.26mm和45.88mm，平均值为47.21mm，rsd为2.57％，表明此提取工艺可行。
[0065]
表4正交实验结果与分析
[0066][0067]
实施例3
[0068]
(1)本方案采用savag法进行脱蛋白：取马齿苋提取液(10mg/ml)1ml，加入1ml sevag试剂，剧烈震荡20min，离心去除析出的蛋白，上清液再加入1ml sevag试剂，剧烈震荡
20min，离心去除析出的蛋白，重复3～5次，直至没有不溶物产生。
[0069]
(2)大孔树脂柱法分离纯化
[0070]
d101大孔树脂的预处理
[0071]
将d101大孔树脂用去离子水浸泡24h充分溶胀，用5％盐酸溶液浸泡4h后，用水洗至中性，再用5％氢氧化钠溶液浸泡4h，水洗至中性，然后用95％乙醇浸泡12h，抽滤，树脂用去离子水洗至无醇味后，去离子水浸泡待用。
[0072]
d101大孔树脂柱的装填与平衡
[0073]
选用层析柱，柱的下端连接聚乙烯管，装柱时为关闭状态。将预处理好的d101大孔树脂在水中搅拌均匀倒入层析柱中，使树脂自然沉降，待底部树脂沉积约1cm高时打开下端聚乙烯管，使柱内液体流动。继续向层析柱中加入树脂，直至树脂沉积到一定高度即可。装柱时应注意填料的均匀，不得有气泡和分界现象，表面要平整。以去离子水平衡12h，待用。
[0074]
php的上样与洗脱
[0075]
取php溶液上样至d101大孔树脂柱中，分别用去离子水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇和70％乙醇洗脱，每种洗脱剂洗脱3倍柱体积(bv)，其中去离子水洗脱液每25ml(0.5bv)收集一管，10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇和70％乙醇洗脱液分别收集。
[0076]
再将每管的去离子水洗脱液和不同浓度的乙醇洗脱液浓缩至2ml，纸片法测定各管去离子水洗脱液和不同浓度乙醇洗脱液的抑菌活性。
[0077]
php经d101大孔树脂分离后，不同浓度乙醇洗脱液均无抑菌活性，去离子水洗脱液的抑菌活性如表5所示。
[0078]
表5
[0079]
去离子水洗脱液流分抑菌圈直径(mm)0.5
‑
1bv22.54
±
0.361
‑
1.5bv38.26
±
0.581.5
‑
2bv36.82
±
0.222
‑
2.5bv20.12
±
0.82
[0080]
由表5可知，php经d101孔树脂分离纯化后，只有去离子水洗脱液具有抑制糠秕马拉色菌的活性，因此，本发明优选离子水洗脱部分为第1倍柱体积至2倍柱体积的洗脱部分作为最佳的洗脱液
[0081]
实施例4
[0082]
将实施例3中采用优选的洗脱液，进行脱色：活性炭吸附法
[0083]
取经过预处理的活性炭粉末，加入优选的洗脱液中，40℃下在恒温震荡水浴器中180r/min震荡50min，抽滤并离心去除活性炭。
[0084]
计算php脱色率：
[0085][0086]
其中，a0为脱色前php的吸光度值，a1为php经活性炭吸附脱色后的吸光度值。得到php的脱色率为87.65％，脱色后的php冷冻干燥后为白色粉末，可进行下一步分离纯化。
[0087]
实施例5
[0088]
(1)php的透析
[0089]
将脱色后的php放入3500da透析袋中，置于大烧杯，加入适量去离子水，磁力搅拌器搅拌使烧杯内的水流动，每12h换一次水。换3次水后，分别收集透析袋内液和外液，浓缩后冷冻干燥。
[0090]
php经3500da透析袋透析后，只有透析袋内液具有抑菌活性。
[0091]
(2)将透析得到的产物经葡聚糖凝胶g
‑
150分离纯化，用0.1mol/l的nacl溶液进行洗脱，得到的洗脱曲线如图2所示。
[0092]
由图可知，php经过葡聚糖凝胶g
‑
150分离纯化后得到单一的洗脱峰，收集后透析去盐并冷冻干燥，得到php
‑
1，计算得率为0.81％。震荡培养法测得php
‑
1的mic为0.195mg/ml。
[0093]
g
‑
150分离纯化具体过程如下：
[0094]
php葡聚糖凝胶g
‑
150柱层析分离
[0095]
葡聚糖凝胶g
‑
150的预处理：将葡聚糖凝胶g
‑
150在去离子水中浸泡6h后放入热水浴加热5小时以确保凝胶完全溶胀，用5％盐酸溶液浸泡4h后，用水洗至中性，再用5％氢氧化钠溶液浸泡4h，水洗至中性，去离子水浸泡待用。
[0096]
葡聚糖凝胶柱的装填与平衡：在层析柱中加入三分之一高度的去离子水，将预处理好的葡聚糖凝胶g
‑
150在水中搅拌均匀一次性倒入层析柱中，使凝胶自然沉降，待底部凝胶沉积约1cm高时打开下端聚乙烯管，使柱内液体流动。待凝胶完全沉降即可。装柱时应注意填料的均匀，不得有气泡和分界现象，表面要平整。用洗脱液平衡柱体后待用。
[0097]
葡聚糖凝胶柱的上样与洗脱：将透析后的php上样至葡聚糖凝胶柱中，以0.1mol/l nacl作为洗脱剂，每8ml收集一管，苯酚硫酸法跟踪检测其在490nm处的吸光度值，分别以洗脱剂体积和吸光度值作为横纵坐标绘制洗脱曲线。收集洗脱峰区域的洗脱液，浓缩后透析去盐并冷冻干燥，得到组分php
‑
1。
[0098]
(3)php
‑
1结构分析
[0099]
分子量的测定
[0100]
通过高效凝胶色谱法(hpgfc)测定php
‑
1的分子量，结果见图3。
[0101]
可知，php
‑
1的分子量分布为：mn为20340da，mw为175246da，mp为19749da。php
‑
1的重均分子量为175246da。
[0102]
元素分析
[0103]
元素分析结果得知，php
‑
1中不含有n元素，c元素的含量为36.89％，h元素的含量为5.54％，且不含有硫酸根和蛋白质。
[0104]
红外光谱分析
[0105]
php
‑
1与kbr混合后，进行红外光谱扫面，扫描结果见图4。可知，php
‑
1具有典型的多糖吸收峰，其中3420cm
‑
1处为o
‑
h伸缩振动，2975cm
‑
1处为c
‑
h伸缩振动，1624cm
‑
1处为c＝o伸缩振动，1400cm
‑
1处为c
‑
o伸缩振动，1000～1100cm
‑
1范围的峰为h
‑
o的变角振动，880cm
‑
1处为β
‑
糖苷键的峰，834cm
‑
1处的峰暗示着其可能含有α
‑
糖苷键，703cm
‑
1处为吡喃糖环伸缩振动。
[0106]
php
‑
1的紫外
‑
可见光谱图如图5所示。可知，php
‑
1在260nm和280nm处均无吸收峰，因此可推断php
‑
1基本不存在核酸及蛋白质。
[0107]
php
‑
1经三氟乙酸完全水解后，采用离子色谱法分析得到的结果以及单糖对照品
的离子色谱图如图6所示。
[0108]
通过对比单糖对照品的出峰时间可知，php
‑
1中主要单糖组分为鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖以及半乳糖醛酸。
[0109]
实施例6
[0110]
php
‑
1的稳定性研究：
[0111]
(1)温度对php
‑
1抑菌效果的影响
[0112]
取200mg/ml的php
‑
1 5份，分别置于70℃、80℃、90℃、100℃水浴以及121℃高压高温条件下处理30min，取未处理的浓度为200mg/ml的php
‑
1作为对照，以糠秕马拉色菌为供试菌，纸片法测定处理前后php
‑
1的抑菌效果。每组实验重复3次。
[0113]
不同温度下php
‑
1的抑菌活性结果见图7。得知，在40℃～60℃之间，php
‑
1的抑菌活性无显著变化，60℃～100℃之间，抑菌活性稍有降低，而在121℃时，抑菌活性下降较多，因此php
‑
1在低于100℃下对菌体的抑制作用较高，而且具有良好的热稳定性。
[0114]
(2)紫外线对php
‑
1抑菌效果的影响
[0115]
取200mg/ml的php
‑
1 5份，置于紫外灯(220v，15w)下分别照射处理10min、30min、60min、90min以及120min，取未处理的浓度为200mg/ml的php
‑
1作为对照，以糠秕马拉色菌为供试菌，纸片法测定处理前后php
‑
1的抑菌效果。每组实验重复3次。
[0116]
不同紫外线照射时间下php
‑
1的抑菌活性结果见图8。可知，紫外线照射时间从10min到120min，php
‑
1的抑菌活性基本保持不变。说明在120min内，紫外线对php
‑
1的抑菌能力无影响。
[0117]
(3)ph对php
‑
1抑菌效果的影响
[0118]
取200mg/ml的php
‑
1 5份，用磷酸氢二钠
‑
柠檬酸缓冲溶液分别调节ph为4.0、5.0、6.0、7.0以及8.0，。取未处理的浓度为200mg/ml的php
‑
1作为对照，以糠秕马拉色菌为供试菌，纸片法测定处理前后php
‑
1的抑菌效果。每组实验重复3次。
[0119]
不同ph下php
‑
1的抑菌活性结果见图9。可知，ph在4～6时，随着ph的升高，php
‑
1的抑菌活性稍有上升，当ph＝7时，php
‑
1的抑菌活性稍有降低。说明php
‑
1在酸性条件下的抑菌能力较强，在碱性条件下会稍受影响，但抑菌效果始终较好。因此，php
‑
1在ph4～8范围内对菌体的抑制作用均较高，具有良好的稳定性。
[0120]
(4)存储时间对php
‑
1抑菌效果的影响
[0121]
取200mg/ml的php
‑
1 5份，置于40℃下分别放置10天、25天、40天、55天以及70天，取未处理的浓度为200mg/ml的php
‑
1作为对照，以糠秕马拉色菌为供试菌，纸片法测定处理前后php
‑
1的抑菌效果。每组实验重复3次。
[0122]
不同存储时间下php
‑
1的抑菌活性结果见图10。可知，在40℃下，php
‑
1放置70天后的抑菌活性基本保持不变，具有较好的稳定性。
[0123]
实施例7
[0124]
php
‑
1的刺激性研究
[0125]
php
‑
1的刺激性研究方法为红细胞溶血法(rbc)。在新鲜羊血中加入柠檬酸缓冲溶液(柠檬酸三钠：柠檬酸＝1:9)，冷冻离心后用4℃的磷酸盐缓冲溶液(pbs，ph＝7.2)洗涤两次后重悬。调节红细胞浓度为1010个/ml，4℃下保存待用。用pbs稀释php
‑
1至12.50mg/ml、6.25mg/ml、3.13mg/ml、1.56mg/ml、0.78mg/ml和0.39mg/ml。取各个浓度的php
‑
1 9.8ml置
于具塞锥形瓶中，加入0.2ml红细胞悬浮液，37℃下水浴震荡(150r/min)培养30min，然后10000r/min下离心3min，在530nm处测定上清液的吸光度值。以pbs作为空白对照，0.4％十二烷基硫酸钠(sds)作为阳性对照。样品的溶血率按式计算：
[0126][0127]
式中，hd％为溶血率；a0为空白组吸光度值；a1为样品组吸光度值；a2为阳性对照组吸光度值。
[0128]
红细胞溶血法是国际上认可的用于考察化妆品原料及产品眼刺激性的方法之一。不同浓度php
‑
1的红细胞溶血率如图11。
[0129]
php
‑
1的溶血率随着浓度的增大而增大，在其浓度为50mg/ml时，溶血率为15.86％，低于20％，说明php
‑
1在浓度低于50mg/ml时几乎无刺激性。
[0130]
实施例8
[0131]
php
‑
1和化学提取物的复配
[0132]
考察两种物质之间的复配作用通常采用的方法为棋盘法。本实验采用棋盘法测定两种物质复配的fic指数。以2
×
mic为最高浓度，依次倍比稀释5个系列的浓度。测定两种物质任意两个浓度之间复配的mic，根据公式可计算得到复配提取物之间的相互作用。公式如下：
[0133][0134]
其中，a、b为两药单用时的mic，mica、micb分别表示a，b联用时的mic。当fic≤1时，a、b两药之间为协同作用；当fic＝1时，a、b两药之间为相加作用；当1＜fic≤2时，a、b两药之间为无关作用；当fic＞2时，a、b两药之间为拮抗作用。取25支已灭菌的离心管，每支离心管加入1.8ml橄榄油液体培养基和100μl 1
×
107cfu/ml的菌悬液，将php
‑
1和化学提取物配制成的溶液从2
×
mic倍比稀释至0.125
×
mic，如图12所示，每个方格代表一组实验，在对应的离心管中各加入50μl的药液，在温度为35℃的水浴震荡培养箱中震荡培养48h后，取100μl上述培养液加入平板中，用无菌涂布棒涂布均匀，将平板倒置于35℃的培养箱中孵育48h，观察平板有无菌落生长并记录，其中
“‑”
表示无菌落生长，“+”表示有菌落生长。由公式计算php
‑
1和zpt及oct之间复配的fic指数。
[0135]
php
‑
1与化学提取物复配的fic指数见表6。
[0136]
表6
[0137]
复配fic指数相互作用zpt+php
‑
11相加作用oct+php
‑
10.5协同作用
[0138]
可知，php
‑
1与zpt复配的fic指数等于1，即两者之间的相互作用为相加作用，而php
‑
1与oct复配的fic指数为0.5，说明两者之间有协同作用。因此，php
‑
1和oct是一种很好的抑制糠秕马拉色菌的组合。
[0139]
实施例9
[0140]
php
‑
1在化妆品中的应用
[0141]
1、php
‑
1在香波中的应用
[0142]
香波配方如表7所示。
[0143]
表7
[0144][0145][0146]
制备工艺：
[0147]
(1)a部分：室温下在烧杯中加入去离子水和edta二钠，开始搅拌。在低速搅拌下，将silk 100聚合物撒到水面上，搅拌均匀。加热料体到75℃。
[0148]
(2)依次加入b部分中原料到主料体中，搅拌混合均匀。
[0149]
(3)搅拌下冷却料体到室温。依次加入c部分中原料，搅拌均匀。
[0150]
2、php
‑
1在护发素中的应用
[0151]
护发素配方如表8所示。
[0152]
表8
[0153][0154][0155]
制备工艺：
[0156]
(1)将a部分搅拌加热至75℃。
[0157]
(2)将b部分加热至75℃后，将b部分加入a部分，同时进行搅拌和集中均质。然后边搅拌边冷却至35℃。
[0158]
(3)加入c和d部分边搅拌边加入乳液。
[0159]
在配方中加入php
‑
1后的感官及理化指标如表9所示。
[0160]
表9
[0161][0162]
可知，配方的感官及理化指标均正常，因此，php
‑
1的加入对配方均没有影响。
[0163]
在配方中加入php
‑
1后的稳定性考察结果如表10所示。
[0164]
表10
[0165][0166][0167]
可知，添加了php
‑
1的香波在4℃，40℃以及45℃下稳定性能均较好，并且通过冻融循环实验，在65℃下放置7天后，香波的颜色稍有加深，但未出现分层及油水分离现象，表明此配方有良好的稳定性。添加了php
‑
1的护发素通过稳定性考察实验。
[0168]
php
‑
1在化妆品中的抑菌效果
[0169]
添加了php
‑
1的配方抑菌效果如表11所示。
[0170]
表11
[0171]
配方抑菌圈直径/mm香波38.26
±
0.82护发素28.72
±
0.36
[0172]
可知，添加在配方里的php
‑
1仍具有良好的抑菌效果。其中，php
‑
1在香波中的添加量为1.5％，在护发素中的添加量为1.0％。
[0173]
通过对php
‑
1的稳定性考察得知，温度在60℃以上时，php
‑
1的抑菌活性稍有降低，即php
‑
1不适合温度过高的体系；在紫外线照射下具有良好的稳定性；当php
‑
1处于ph大于6的体系时，抑菌活性稍有降低，说明php
‑
1更适合偏酸性的体系，但在偏碱性的体系中活性依然很好；php
‑
1在40℃下储存70天后仍然具有较好的抑菌活性，说明其具有良好的储存稳定性。红细胞溶血实验显示，php
‑
1在浓度低于50mg/ml时，几乎无刺激性；在和化学提取物的复配作用研究中发现，php
‑
1和oct之间具有协同作用，而和zpt之间为相加作用。
[0174]
测定含有php
‑
1的香波、护发素配方的感官及理化指标，结果显示，添加1.5％php
‑
1的香波配方在高温下颜色稍加深，其他测定组均无明显变化，表明php
‑
1的添加对配方的感官及理化指标几乎无影响；在配方的稳定性考察中显示，php
‑
1的添加对配方的稳定性也几乎无影响；php
‑
1在配方中的抑菌效果显示，其仍然具有良好的抑菌效果。
[0175]
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。