苯并咪唑衍生物及其用途
1.本发明总体上涉及经典瞬时受体电位(trpc)通道蛋白，并且更具体地涉及瞬时受体电位通道6 (trpc6)蛋白活性的抑制剂、包含所述抑制剂的药物组合物以及使用此类抑制剂的方法。
背景技术：
2.trpc6通道(瞬时受体电位(trp)家族的成员)是一种非选择性阳离子渗透通道，其通过由磷脂酶c的激活产生的二酰甘油等激活，并且发挥生理和病理生理效应。trpc6具有例如心肌病理性肥大和纤维化、肌营养不良的心肌损伤进展、急性肺血管收缩、慢性缺氧诱导的肺动脉高压的病理进展、过敏性气道应答、细胞如嗜中性粒细胞的迁移、炎症时内皮细胞的通透性增加、足细胞的病理性扁平化和肾小球损伤的进展、以及恶性肿瘤的增殖或浸润的效应，并且广泛分布于脑、心脏、肺、肾、胎盘、卵巢、脾等中(参见例如，j. clin. invest. 116:3114-3126，2006；dev. cell. 23:705-715，2012；circ. res. 114:823-832，2014；proc. natl. acd. sci. usa 103: 19093-19098，2006；j. cardiovasc. pharmacol. 57:140-147，2011；hypertension 63: 173-80，2014；clin. exp. allergy 38: 1548-1558，2008；acta. physiol. 195:3-11，2009；j. exp. med. 209:1953-1968，2011；arterioscler. thromb. vasc. biol. 33:2121-2129，2013；plos one 5: e12859，2010；expert. opin. ther. targets. 14:513-27，2010；以及bmc cancer 13:116，2013)。在家族性局灶性节段性肾小球硬化(fsgs)中，已鉴定了trpc6的功能获得性突变体，并且在类固醇抗性肾病综合征或特发性肺动脉高压患者中，已鉴定了启动子区中增加trpc6的mrna表达的单核苷酸多态性(参见例如：pediatr res 2013 nov；74(5):511-6和circulation. 2009 may 5；119(17):2313-2322)。因此，认为trpc6的功能亢进和表达增加促成肾病综合征、肺动脉高压等的病理进展(参见例如，science 308:1801-1804，2005；nat. genet. 37:739-744，2005；plos one 4: e7771，2009；clin. j. am. soc. nephrol. 6:1139-1148，2011；mol. biol. cell. 22:1824-1835，2011；bmc nephrol. 14:104，2013；pediatr. res. 74:511-516，2013；以及nephrol. dial. transplant. 28:1830-1838，2013)。此外，trpc6的表达增加已在微小病变肾病综合征、膜性肾病和糖尿病肾病中得到报道(参见例如，circulation 119:2313-2322，2009；j. am. soc. nephrol. 18:29-36，2007；以及nephrol. dial. transplant. 27:921-929，2012)。
3.在肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤和肌营养不良的预防和/或治疗中，需要新方法来调节 trpc6 活性，且更特别地抑制 trpc6 活性。还需要这样的试剂，其利用不同的作用机制，并且可能在短期和长期的症状缓解、安全性和患者死亡率方面具有更好的结果。
技术实现要素：
4.本发明提供了抑制trpc蛋白，并且更具体而言抑制trpc6蛋白的化合物。在一个方面，本发明提供了抑制trpc6活性的苯并咪唑化合物。trpc6活性的抑制在各种疾病的治疗或预防方面可能是特别期望的，所述疾病包括肾病综合征、局灶性节段性肾小球硬化、膜性肾病、糖尿病肾病、心力衰竭、中风、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征(ards)和急性肾功能衰竭。
5.在一个方面，本发明提供了调节trpc6活性的取代苯并咪唑化合物。优选地，本发明的取代苯并咪唑化合物是trpc6抑制剂。
6.还提供的是药物组合物，其包含药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂，以及下述详述中公开的至少一种取代苯并咪唑化合物。本发明提供的药物组合物适合用于由trpc6活性调节的疾病的治疗。在某些方面，本发明的药物组合物适合用于以下的治疗，例如肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良的治疗。
7.还提供的是包装的药物组合物，其包括包含药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂，以及下述详述中公开的至少一种取代苯并咪唑化合物的药物组合物，以及使用该组合物治疗患有由trpc6活性介导的疾病的患者、或更具体地治疗患有以下疾病的患者的说明书：肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在某些情况下，患者患有肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭。
8.还提供的是治疗或预防哺乳动物的疾病的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳动物施用治疗有效量的下述详述中公开的至少一种取代苯并咪唑化合物，或包含药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂，以及下述详述中公开的至少一种取代苯并咪唑化合物的药物组合物。
9.还提供的是用于调节哺乳动物中的trpc6活性的方法，所述方法包括向有此需要的哺乳动物施用治疗有效量的下述详述中公开的至少一种取代苯并咪唑化合物，或包含药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂，以及下述详述中公开的至少一种取代苯并咪唑化合物的药物组合物。本发明的另一个方面涉及治疗由trpc6介导的疾病或病症的方法，该方法包括向需要治疗的患者施用本发明的trpc6抑制剂。在某些实施方案中，trpc6介导的疾病或病症选自肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在某些情况下，患者患有肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭。
10.还提供的是下述详述中公开的至少一种取代苯并咪唑化合物在制造用于治疗或预防由trpc6活性介导的疾病的药剂中的用途。
11.根据下述详细描述，其它方面和实施方案对于本领域技术人员将是显而易见的。
具体实施方式
12.本发明总体上涉及下述详述中公开的取代苯并咪唑化合物及其盐和互变异构体，其抑制trpc蛋白活性，且更具体地抑制trpc6蛋白活性。特别地，本发明涉及选择性抑制trpc6蛋白活性的化合物。
13.在第一个实施方案中，本发明提供了选自以下的化合物或其药学上可接受的盐：(3r,4r)-4-氟-1-(5-氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；(3r)-1-(5,7-二氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；(3r,4r)-4-氟-1-(6-氟-1-((5-氟-2-嘧啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；(3r,4r)-4-氟-1-(6-氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(1-((5-氯-2-吡啶基)甲基)-5-氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；(3r)-1-(1-((5-氯-2-嘧啶基)甲基)-6-氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；(3r)-4,4-二氟-1-(6-氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(5,6-二氟-1-((5-甲基-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(4,6-二氟-1-((5-甲氧基-2-嘧啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；(3r)-1-(1-((5-氯吡啶-2-基)甲基)-6-氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟哌啶-3-胺；(3r,4r)-4-氟-1-(5-氟-1-((5-氟-2-嘧啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(1-((5-氯-2-吡啶基)甲基)-6-氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；2-((3r)-3-氨基-4,4-二氟-1-哌啶基)-1-((5-氯-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-6-甲腈；(3r)-1-(1-((5-氯-2-嘧啶基)甲基)-4,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；2-((3r,4r)-3-氨基-4-氟-1-哌啶基)-6-氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-4-甲腈；(3r)-1-(1-((5-氯-2-吡啶基)甲基)-5,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；(3r)-1-(1-((5-氯-2-嘧啶基)甲基)-5,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；
(3r,4r)-1-(1-((5-氯-2-嘧啶基)甲基)-5,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(5,6-二氟-1-((5-甲氧基-2-嘧啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；6-((2-((3r,4r)-3-氨基-4-氟-1-哌啶基)-5,6-二氟-1h-苯并咪唑-1-基)甲基)-2-吡啶甲腈；以及(3r,4r)-1-(1-((5-氯嘧啶-2-基)甲基)-4-氟-6-甲氧基-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟哌啶-3-胺。
14.在第二个实施方案中，提供的是选自以下的第一个实施方案的化合物或其药学上可接受的盐：(3r,4r)-4-氟-1-(5-氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；(3r)-1-(5,7-二氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；(3r,4r)-4-氟-1-(6-氟-1-((5-氟-2-嘧啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；(3r,4r)-4-氟-1-(6-氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；以及(3r,4r)-1-(1-((5-氯-2-吡啶基)甲基)-5-氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺。
15.在第三个实施方案中，提供的是选自以下的第一个实施方案的化合物或其药学上可接受的盐：(3r)-1-(1-((5-氯-2-嘧啶基)甲基)-6-氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；(3r)-4,4-二氟-1-(6-氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(5,6-二氟-1-((5-甲基-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(4,6-二氟-1-((5-甲氧基-2-嘧啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；以及(3r)-1-(1-((5-氯吡啶-2-基)甲基)-6-氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟哌啶-3-胺。
16.在第四个实施方案中，提供的是选自以下的第一个实施方案的化合物或其药学上可接受的盐：(3r,4r)-4-氟-1-(5-氟-1-((5-氟-2-嘧啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(1-((5-氯-2-吡啶基)甲基)-6-氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；2-((3r)-3-氨基-4,4-二氟-1-哌啶基)-1-((5-氯-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪
唑-6-甲腈；(3r)-1-(1-((5-氯-2-嘧啶基)甲基)-4,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；以及2-((3r,4r)-3-氨基-4-氟-1-哌啶基)-6-氟-1-((5-氟-2-吡啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-4-甲腈。
17.在第五个实施方案中，提供的是选自以下的第一个实施方案的化合物或其药学上可接受的盐：(3r)-1-(1-((5-氯-2-吡啶基)甲基)-5,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；(3r)-1-(1-((5-氯-2-嘧啶基)甲基)-5,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4,4-二氟-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(1-((5-氯-2-嘧啶基)甲基)-5,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；(3r,4r)-1-(5,6-二氟-1-((5-甲氧基-2-嘧啶基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟-3-哌啶胺；6-((2-((3r,4r)-3-氨基-4-氟-1-哌啶基)-5,6-二氟-1h-苯并咪唑-1-基)甲基)-2-吡啶甲腈；以及(3r,4r)-1-(1-((5-氯嘧啶-2-基)甲基)-4-氟-6-甲氧基-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟哌啶-3-胺。
18.在一个进一步实施方案中，本文公开的每种化合物以药学上可接受的盐的形式提供。
19.在第六个实施方案中，第一个实施方案至第五个实施方案每一个中提供的化合物及其药学上可接受的盐可以用于制备用于治疗由trpc6活性介导的疾病的药剂。在某些方面，第一个实施方案至第五个实施方案中提供的化合物或其药学上可接受的盐可以用于制造用于治疗选自以下的疾病或病症的药剂：肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在另外其它方面，第一个实施方案至第五个实施方案的化合物或其药学上可接受的盐可以用于制备用于治疗肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭的药剂。
20.在第七个实施方案中，提供的是治疗需要治疗的患者的疾病或病症的方法，该方法包括施用包含第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物或其药学上可接受盐的药学上可接受的组合物的步骤，其中所述疾病或病症选自肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在第六个实施方案的某些方面，疾病或病症选自肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭。
21.在另一个实施方案中，提供的是药物组合物，其包含一种或多种药学上可接受的载体、以及治疗有效量的第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物。在一些
方面，组合物被配制为选自可注射流体、气溶胶、片剂、丸剂、胶囊、糖浆剂、乳膏、凝胶和经皮贴剂的形式。
22.在另一个实施方案中，提供的是组合，特别是药物组合，其包含治疗有效量的第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物。
23.在另一个实施方案中，提供的是调节受试者中的trpc蛋白活性的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物。在实施方案的优选方面，提供的是抑制受试者中的trpc6活性的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物。在实施方案的某些方面，提供的是抑制受试者中的trpc6活性的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物。
24.在另外其它实施方案中，提供的是治疗受试者中由trpc蛋白活性介导的病症或疾病的方法，特别地，提供的是治疗由trpc6蛋白活性介导的疾病或病症的方法。该方法包括向受试者施用治疗有效量的第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物。
25.在另一个实施方案中，提供的是治疗或预防疾病或病症的方法，其中所述疾病或病症选自肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良，所述方法包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物的步骤。在该实施方案的某些方面，该方法包括治疗选自以下的疾病或病症：肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在某些情况下，治疗方法和/或预防方法适合于治疗和/或预防肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭。
26.在另一个方面，本发明提供了第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物，其用于制备药剂或用于制造用于治疗受试者中由trpc蛋白活性介导的病症或疾病的药剂。在某些其它方面，本发明提供了第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物在治疗以下中的用途：肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在某些情况下，本发明提供了第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的化合物用于制备药剂或用于制造药剂或用于治疗受试者中选自肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭的疾病或病症的用途。
27.为了解释本说明书的目的，将应用下述定义，并且适当时，以单数使用的术语也将包括复数，且反之亦然。
28.如本文使用的，术语“异构体”指具有相同分子式但在原子的排列和构型方面不同的不同化合物。同样如本文使用的，术语“光学异构体”或“立体异构体”指对于本发明的给定化合物可能存在的各种立体异构构型中的任一种，并且包括几何异构体。应理解，取代基可以附着在碳原子的手性中心处。因此，本发明包括化合物的对映异构体、非对映异构体或
外消旋物。“对映异构体”是一对立体异构体，其是彼此不重叠的镜像。一对对映异构体的1:1混合物是“外消旋”混合物。适当时，该术语用于指定外消旋混合物。“rel”的使用指示非对映异构体取向是已知的，但绝对立体化学是未知的。在其中绝对立体化学尚未确定的情况下，旋光度和/或手性色谱法条件将指示存在哪种异构体。
[0029]“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子但并非彼此的镜像的立体异构体。根据cahn-ingold-prelog r-s系统指定绝对立体化学。当化合物是纯对映异构体时，在每个手性碳处的立体化学可以由r或s指定。其绝对构型未知的解析化合物可以指定为(+)或(-)，取决于它们在钠d线的波长处旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)或在手性色谱法分离时的保留时间。本文所述的某些化合物含有一个或多个不对称中心或轴，并且因此可能产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式，其可以根据绝对立体化学定义为(r)-或(s)-，或用(+)或(-)符号限定。本发明意欲包括所有此类可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯形式和中间体混合物。
[0030]
旋光(r)-和(s)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂进行制备，或使用常规技术进行拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以是e或z构型。如果化合物含有双取代的环烷基，则环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。
[0031]
应理解，对于本文提供的任何化合物，包括第一个实施方案至第五个实施方案中任何一个的任何化合物或前述任一种的盐，所述化合物可以以任何立体化学形式存在，例如单一对映异构体、非对映异构体或互变异构体，或者以任何比率的一种或多种对映异构体、非对映异构体和互变异构体的混合物。
[0032]
如本文使用的，术语“盐(salt)”或“盐(salts)”指本发明的化合物的酸加成盐或碱加成盐。“盐”特别包括“药学上可接受的盐”。术语“药学上可接受的盐”指保留本发明的化合物的生物学有效性和性质，并且通常并非生物学或其它方面不期望的盐。在许多情况下，由于氨基和/或羧基或与其相似的基团的存在，本发明的化合物能够形成酸盐和/或碱盐。
[0033]
药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸和有机酸形成。
[0034]
盐可以由其衍生的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
[0035]
盐可以由其衍生的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、延胡索酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。
[0036]
药学上可接受的碱加成盐可以由无机碱和有机碱形成。
[0037]
盐可以由其衍生的无机碱包括例如铵盐和周期表第i列至第xii列的金属。在某些实施方案中，盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜。在某些其它实施方案中，盐选自铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。
[0038]
盐可以由其衍生的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代胺(包括天然存在的取代胺)、环胺、碱性离子交换树脂等。某些有机胺包括异丙胺、苄星青霉素、cholinate、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨基丁三醇。
[0039]
在另一个方面，本发明提供了呈以下形式的如本文公开的化合物：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐(chlortheophyllonate)、
柠檬酸盐、乙二磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三苯乙酸盐(trifenatate)、三氟乙酸盐或昔萘酸盐形式。在另外一个方面，本发明提供了呈以下形式的如本文公开的化合物：c
1-c4烷基磺酸，苯磺酸或者单-、二-或三-c
1-c4烷基取代的苯磺酸加成盐形式。
[0040]
本文给出的任何式或化合物还预期表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的化合物或式描述的结构，除了一个或多个原子由具有所选原子质量或质量数的原子替换之外。可以掺入本发明的化合物内的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
15
n、
18
f、
31
p、
32
p、
35
s、
36
cl、
124
i、
125
i。本发明包括如本文定义的各种同位素标记的化合物，例如放射性同位素如3h、
13
c和
14
c存在于其内的那些化合物。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(使用
14
c)、反应动力学研究(使用例如2h或3h)、检测或成像技术，例如正电子发射断层扫描术(pet)或单光子发射计算机断层扫描术(spect) (包括药物或底物组织分布测定)，或用于患者的放射性治疗。特别地，
18
f或标记化合物对于pet或spect研究可能是特别期望的。本发明的同位素标记的化合物及其盐一般可以通过用可容易获得的同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂，通过执行下文描述的方案或者实施例和制剂中公开的程序进行制备。
[0041]
进一步地，用较重的同位素，特别是氘(即2h或d)的取代可以提供起因于更大的代谢稳定性的某些治疗优点，例如增加的体内半衰期或减少的剂量需求或治疗指数的改善。应理解，该上下文中的氘被视为本发明的第一个实施方案的化合物的取代基。此类较重的同位素(具体地氘)的浓度可以由同位素富集因子定义。如本文使用的，术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本发明的化合物中的取代基指示为氘，则此类化合物在每个指定的氘原子处具有至少50%的氘掺入、60%的氘掺入、至少75%的氘掺入、至少90%的氘掺入、至少95%的氘掺入、至少99%的氘掺入或至少99.5%的氘掺入。
[0042]
本发明的化合物可以固有地或通过设计与溶剂(包括水)形成溶剂合物。因此，预期本发明包括溶剂化形式和非溶剂化形式两者。术语“溶剂合物”指本发明的化合物(包括其盐)与一种或多种溶剂分子的分子复合物。此类溶剂分子是已知对接受者无害的制药领域中常用的那些溶剂分子，例如水、乙醇、二甲基亚砜、丙酮和其它常见的有机溶剂。术语“水合物”指包含本发明的化合物和水的分子复合物。依照本发明的药学上可接受的溶剂合物包括其中结晶化的溶剂可以是同位素取代(例如d2o、d
6-丙酮、d
6-dmso)的那些溶剂合物。
[0043]
术语本发明的化合物的“治疗有效量”指这样的本发明的化合物的量，其将引起受试者的生物学或医学应答，例如减少或抑制酶或蛋白质活性，或者改善症状，减轻状况，减慢或延迟疾病进展，或预防疾病等。在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”指这样的本发明的化合物的量，当施用于受试者时，所述量有效地(1)至少部分减轻、抑制、预防和/或改善状况、或病症、或疾病或生物学过程，其(i)由trpc6活性介导，或(ii)与trpc6活性相关；或者(2)抑制trpc6的活性。在另一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”指这
o,o'-对甲苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。外消旋产物也可以通过手性色谱法进行拆分，所述手性色谱法例如使用手性吸附剂的高效液相色谱法(hplc)或超临界流体色谱法(sfc)。
[0054]
根据本发明可获得的异构体混合物可以以本领域技术人员已知的方式分离成各个异构体；非对映异构体可以例如通过在多相溶剂混合物之间分配、重结晶和/或例如在硅胶上的色谱分离，或通过例如在反相柱上的中压液相色谱法进行分离，并且外消旋物可以例如通过以下进行分离：与光学上纯的成盐试剂形成盐，并且例如借助于分级结晶或通过在旋光柱材料上的色谱法，分离可如此获得的非对映异构体混合物。
[0055]
在本文的范围内，除非上下文另有说明，否则仅易于去除的基团(其并非本发明的化合物的特定所需最终产物的组成部分)被指定为“保护基团”。通过此类保护基团的官能团保护、保护基团本身及其切割反应例如在标准参考著作中进行描述，例如j. f. w. mcomie，"protective groups in organic chemistry"，plenum press，london and new york 1973，t. w. greene和p. g. m. wuts，"protective groups in organic synthesis"，第三版，wiley，new york 1999，"the peptides"；第3卷(编辑：e. gross和j. meienhofer)，academic press，london and new york 1981，"methoden der organischen chemie" (methods of organic chemistry)，houben weyl，第4版，第15/i卷，georg thieme verlag，stuttgart 1974，h.-d. jakubke和h. jeschkeit，"aminosauren，peptide，proteine" (amino acids，peptides，proteins)，verlag chemie，weinheim，deerfield beach，and basel 1982，以及jochen lehmann，"chemie der kohlenhydrate: monosaccharide and derivate" (chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivatives)，georg thieme verlag，stuttgart 1974。保护基团的特性在于它们可以容易地去除(即，没有不需要的二次反应的发生)，例如通过溶剂分解、还原、光解或可替代地在生理条件下(例如通过酶促切割)。
[0056]
中间体和最终产物可以根据标准方法进行后处理和/或纯化，例如使用色谱方法、分布方法、(重)结晶等。
[0057]
除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法都可以以任何合适的次序执行。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(如“例如”)的使用仅预期更好地阐明本发明，并不对另外请求保护的本发明的范围构成限制。
[0058]
本文公开的任何工艺步骤可以在本领域技术人员已知的包括具体提到的那些的反应条件下，在溶剂或稀释剂(包括例如针对所使用的试剂惰性且使其溶解的溶剂或稀释剂)的不存在或照例地存在下，在催化剂、缩合剂或中和剂(例如离子交换剂，例如阳离子交换剂，例如以h
+
形式)的不存在或存在下，取决于反应和/或反应物在低温、常温或高温下的性质，例如在约-100℃至约250℃的温度范围内，包括例如大约-80℃至大约250℃，例如在-80至-60℃下、在室温下、在-20至40℃下或在回流温度下，在大气压下或在密闭容器(适当时在压力下)和/或在惰性大气中，例如在氩或氮大气下进行。
[0059]
适合于任何特定反应的那些溶剂可以从其中选择的溶剂包括那些具体提到的溶剂，或者例如水、酯例如低级烷基-低级链烷酸酯如乙酸乙酯，醚例如脂族醚如二乙醚，或环醚例如四氢呋喃或二噁烷，液态芳烃例如苯或甲苯，醇例如甲醇、乙醇或者1-或2-丙醇，腈例如乙腈，卤代烃例如二氯甲烷或氯仿，酰胺例如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，碱例如杂
环氮碱如吡啶或n-甲基吡咯烷-2-酮，羧酸酐例如低级链烷酸酐如乙酸酐，环状、线性或分支烃例如环己烷、己烷或异戊烷、甲基环己烷，或这些溶剂的混合物，例如水溶液，除非在过程的描述中另有说明。此类溶剂混合物也可以用于例如通过色谱法或分配的后处理中。
[0060]
在另一个方面，本发明提供了药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。在一个进一步实施方案中，组合物包含至少两种药学上可接受的载体，例如本文所述的那些载体。为了本发明的目的，除非另有说明，否则溶剂合物和水合物一般被视为组合物。优选地，药学上可接受的载体是无菌的。药物组合物可以配制用于特定的施用途径，例如经口施用、肠胃外施用和直肠施用等。另外，本发明的药物组合物可以制成固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒、粉末或栓剂)、或液体形式(包括但不限于溶液、悬浮液或乳状液)。药物组合物可以经受常规的药物操作例如灭菌，和/或可以含有常规的惰性稀释剂、润滑试剂或缓冲剂，以及佐剂例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。
[0061]
如本文使用的，术语“药学上可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等及其组合，如本领域技术人员已知的(参见例如，remington's pharmaceutical sciences，第18版 mack printing company，1990，第1289-1329页)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则考虑其在治疗组合物或药物组合物中的使用。
[0062]
通常，药物组合物是包含活性成分连同以下中的一种或多种的片剂或明胶胶囊：a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂，还有c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；需要时，d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；以及e)吸收剂、着色剂、调味料和甜味剂。根据本领域已知的方法，片剂可以是薄膜包衣的或肠包衣的。用于经口施用的合适组合物包括有效量的本发明的化合物，其形式为片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳状液、硬胶囊或软胶囊、或糖浆剂或酏剂。预期用于经口使用的组合物根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法进行制备，并且此类组合物可以含有选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的一种或多种试剂，以便提供药学上精致和适口的制剂。片剂可以含有与适合于制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂是例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑试剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂是未包被的或通过已知技术进行包被的，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，并且从而提供在更长时期的持续作用。例如，可以采用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于经口使用的制剂可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或呈现为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。某些可注射组合物是等渗水溶液或悬浮液，并且栓剂有利地由脂肪乳状液或悬浮液制备。所述组合物可以是灭菌的和/或含有佐剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调整渗透压的盐和/或缓冲剂。另外，它们还可能含有其它治疗上有价值的物质。所述组合物分别根据常规混合、制粒或包
被方法进行制备，并且含有约0.1-75%或约1-50%的活性成分。用于经皮应用的合适组合物包括有效量的本发明的化合物与适合的载体。适合于经皮递送的载体包括可吸收的药理学上可接受的溶剂，以帮助通过宿主的皮肤。例如，经皮装置呈绷带的形式，所述绷带包含背衬构件、含有任选地连同载体的化合物的储库、任选的用于在延长的时间段内以受控和预定的速率将化合物递送至宿主的皮肤的速率控制屏障、以及将装置固定到皮肤的手段。用于例如对皮肤和眼局部应用的合适组合物包括水溶液、悬浮液、软膏、乳膏、凝胶或可喷雾制剂，例如用于通过气溶胶等递送等。此类局部递送系统将特别适合于皮肤应用，例如用于治疗皮肤癌，例如用于防晒乳膏、洗剂、喷雾剂等中的预防用途。它们因此特别适用于本领域众所周知的局部制剂，包括化妆品制剂。这些可以含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。如本文使用的，局部应用还可以涉及吸入或鼻内应用。它们可以方便地以来自干粉吸入器的干粉(单独地，作为混合物，例如与乳糖的干共混物，或例如与磷脂的混合组分颗粒)，或者来自加压容器、泵、喷雾器、雾化器或喷洒器(伴随或不伴随合适推进剂的使用)的气溶胶喷雾呈递形式递送。
[0063]
本发明进一步提供了包含本发明的化合物作为活性成分的无水药物组合物和剂型，因为水可能促进某些化合物的降解。
[0064]
本发明的无水药物组合物和剂型可以使用无水成分或含有低水分的成分和低水分条件或低湿度条件进行制备。无水药物组合物可以这样进行制备且贮存，使得其无水性质得以维持。相应地，无水组合物使用已知防止暴露于水的材料进行包装，使得它们可以包括在合适的处方试剂盒中。合适包装的实例包括但不限于密封箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包装和条状包装。
[0065]
本发明进一步提供了包含一种或多种试剂的药物组合物和剂型，所述试剂降低作为活性成分的本发明的化合物分解的速率。在本文中称为“稳定剂”的此类试剂包括但不限于抗氧化剂例如抗坏血酸、ph缓冲剂或盐缓冲剂等。
[0066]
预防和治疗用途游离形式或药学上可接受的盐形式的本文公开的化合物显示出有价值的药理学性质，例如trpc蛋白调节性质，且更特别地trpc6蛋白活性的抑制，例如如在下一节中提供的体外和体内测试中所示的，并且因此指示用于治疗。
[0067]
本发明提供了通过向有此需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物，来治疗与trpc6蛋白活性相关的疾病或病症的方法。在某些方面，适合于通过施用本发明的化合物治疗的疾病或病症包括但不限于肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在某些情况下，患者患有肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭。
[0068]
在一个具体实施方案中，本发明提供了通过向有此需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物来治疗或预防肾病的方法。在某些实施方案中，目前无症状但处于发展肾病的风险中的患者适合于用本发明的化合物的施用。治疗或预防肾病的方法包括但不限于治疗或预防肾病综合征、膜性肾病、急性肾功能衰竭、败血症、慢性肾功能衰竭和糖尿病肾病的方法。
[0069]
本发明的药物组合物或组合可以为对于约50-70 kg的受试者约1-1000 mg活性成分，或约1-500 mg或约1-250 mg或约1-150 mg或约0.5-100 mg，或约1-50 mg活性成分的单位剂量。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于受试者的物种、体重、年龄和个体状况，待治疗的病症或疾病或其严重程度。具有普通技能的医生、临床医生或兽医可以确定预防、治疗或抑制病症或疾病进展所需的每种活性成分的有效量。
[0070]
上文引用的剂量性质在体外测试和有利地使用哺乳动物的体内测试中是可证实的，所述哺乳动物例如小鼠、大鼠、犬、猴或其分离的器官、组织和制备物。本发明的化合物可以以溶液形式例如水溶液的形式在体外应用，并且可以例如作为悬浮液或在水溶液中肠内、肠胃外、有利地静脉内地在体内应用。在体外的剂量范围可以为约10-3
摩尔浓度至10-9
摩尔浓度。取决于施用途径，在体内的治疗有效量范围可以为约0.1-500 mg/kg或约1-100 mg/kg。
[0071]
根据本发明的化合物的活性可以通过体外方法和体内方法，例如在下文实施例中描述的那些方法进行评价。
[0072]
本发明的化合物可以与一种或多种其它治疗剂同时、或之前或之后进行施用。本发明的化合物可以通过相同或不同的施用途径分开施用，或在与其它试剂相同的药物组合物中一起施用。
[0073]
在一个实施方案中，本发明提供了产品，其包含本文公开的化合物和至少一种其它治疗剂作为组合制剂用于在治疗中同时、分开或序贯使用。在一个实施方案中，疗法是由trpc蛋白活性介导的疾病或状况的治疗。在优选的方面，疗法是用于以下的治疗：肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。
[0074]
作为组合制剂提供的产品包括组合物，其包含在同一药物组合物中一起的本文公开的化合物和其它治疗剂，或呈分开形式例如试剂盒形式的本文公开的化合物和其它治疗剂。
[0075]
在一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含如本文公开的化合物和另一种治疗剂。任选地，药物组合物可以包含如上文所述的药学上可接受的载体。
[0076]
在一个实施方案中，本发明提供了试剂盒，其包含两种或更多种分开的药物组合物，其中至少一种含有本文公开的化合物。在一个实施方案中，该试剂盒包括用于分开保留所述组合物的手段，例如容器、分开的瓶或分开的箔包。此类试剂盒的实例是如通常用于包装片剂、胶囊等的泡罩包装。
[0077]
本发明的试剂盒可以用于施用不同的剂型，例如经口和肠胃外，用于以不同的剂量间隔施用分开的组合物，或用于针对彼此滴定分开的组合物。为了帮助顺应性，本发明的试剂盒通常包括施用指导。
[0078]
在本发明的组合疗法中，本发明的化合物和其它治疗剂可以由相同或不同的制造商进行制造和/或配制。此外，可以将本发明的化合物和其它治疗剂一起结合到组合疗法内：(i)在将组合产品释放给医生之前(例如在包含本发明的化合物和其它治疗剂的试剂盒的情况下)；(ii)在施用前不久由医生自己(或在医生的指导下)；(iii)在患者自身内，例如在本发明的化合物和其它治疗剂的序贯施用期间。
[0079]
相应地，本发明提供了如本文公开的化合物用于治疗由trpc蛋白活性介导的疾病或状况的用途，其中所述药剂被制备用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由trpc蛋白活性介导的疾病或状况的用途，其中所述药剂与如本文公开的化合物一起施用。在另一个方面，本发明提供了如本文公开的化合物用于治疗选自以下的疾病或病症的用途：肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良，其中所述药剂被制备用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗选自以下的疾病或病症的用途：肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良，其中所述药剂与如本文公开的化合物一起施用。
[0080]
本发明还提供了用于治疗由trpc蛋白活性介导的疾病或状况的方法的如本文公开的化合物，其中所述化合物被制备用于与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由trpc蛋白活性介导的疾病或状况的方法的另一种治疗剂，其中其它治疗剂被制备用于与如本文公开的化合物一起施用。本发明还提供了用于治疗由trpc蛋白活性介导的疾病或状况的方法的如本文公开的化合物，其中所述化合物与另一种治疗剂一起施用。本发明还提供了用于治疗由trpc蛋白活性介导的疾病或状况的方法的另一种治疗剂，其中其它治疗剂与如本文公开的化合物一起施用。
[0081]
本发明还提供了如本文公开的化合物用于治疗由trpc蛋白活性介导的疾病或状况的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已用另一种治疗剂进行治疗。本发明还提供了另一种治疗剂用于治疗由trpc蛋白活性介导的疾病或状况的用途，其中患者先前(例如在24小时内)已用如本文公开的化合物进行治疗。
[0082]
药物组合物可以单独施用或与其它分子组合施用，所述其它分子已知在肾病的治疗中，或者更特别地在fsgs、肾病综合征、微小病变肾病或糖尿病肾病的治疗中具有有益效应。组合治疗方案可能是相加的，或者它可能产生协同结果(例如，超过对于两种试剂的组合使用预计的肾功能改善)。在一些实施方案中，本发明提供了使用本发明的化合物和选自以下的第二治疗剂，用于预防和/或治疗肾病或更特别地fsgs、肾病综合征或微小病变肾病的组合疗法：ace/arb (如卡托普利、赖诺普利或氯沙坦)、类固醇疗法(如泼尼松)、免疫调节剂(如霉酚酸酯、他克莫司或环孢素a)、促肾上腺皮质激素类似物(如阿克撒(acthar)凝胶)、抗cd20抗体(如利妥昔单抗)、钙通道阻断剂(如氨氯地平)、利尿剂(如氢氯噻嗪)、抗血小板剂(如双嘧达莫)、抗凝剂(如肝素)、dpp-4抑制剂(如西他列汀(sitagliptin))、sglt2抑制剂(如达格列净(dapagliflozin))、抗高脂血症剂(如瑞舒伐他汀)、贫血疗法(达依泊汀α)或抗高尿酸血症剂(非布司他)。
[0083]
在一个实施方案中，本发明提供了抑制受试者中的trpc蛋白活性或更优选地抑制trpc6蛋白活性的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的化合物。本发明进一步提供了通过施用如本文公开的化合物，来抑制受试者中的trpc蛋白活性或更优选地抑制trpc6蛋白活性的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文公
开的化合物。
[0084]
在一个实施方案中，本发明提供了如本文公开的化合物，其用作药剂。
[0085]
在一个实施方案中，本发明提供了如本文公开的化合物用于治疗受试者的病症或疾病的用途，所述病症或疾病的特征在于trpc蛋白的活性或更优选地trpc6蛋白的活性。特别地，本发明提供了如本文公开的化合物用于治疗病症或疾病的用途，所述病症或疾病由trpc蛋白的活性或更优选地trpc6蛋白的活性介导，例如肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在某些优选的方面，本发明提供了如本文公开的化合物用于治疗选自肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭的由trpc6蛋白的活性介导的病症或疾病的用途。
[0086]
在一个实施方案中，本发明提供了如本文公开的化合物在制造用于治疗受试者的病症或疾病的药剂中的用途，所述病症或疾病的特征在于trpc蛋白的活性或更优选地trpc6蛋白的活性。更特别地，制造用于治疗受试者的疾病或病症的药剂，所述疾病或病症的特征在于trpc蛋白的活性或更优选地trpc6蛋白的活性，例如肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在某些优选的方面，本发明提供了如本文公开的化合物在制造用于治疗肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭的药剂中的用途。
[0087]
在一个实施方案中，本发明提供了如本文公开的化合物用于治疗受试者的病症或疾病的用途，所述病症或疾病的特征在于trpc蛋白的活性或更优选地trpc6蛋白的活性。更特别地，本发明提供了本文提供的化合物在治疗疾病或病症中的用途，所述疾病或病症的特征在于trpc蛋白的活性或更优选地trpc6蛋白的活性，例如肾病综合征、微小病变肾病、局灶性节段性肾小球硬化、塌陷性肾小球病、膜性肾病、膜增生性肾小球肾炎、iga肾病、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、败血症、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在某些实施方案中，本文提供的化合物的用途是用于治疗选自肾病综合征、膜性肾病和急性肾功能衰竭的疾病或病症。
[0088]
在一个具体实施方案中，本发明提供了本发明的化合物用于治疗或预防以下的用途：肾病综合征、膜性肾病、急性肾功能衰竭、败血症、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在某些实施方案中，目前无症状但处于发展有症状的以下疾病的风险中的患者适合于用本发明的化合物的施用：肾病综合征、膜性肾病、急性肾功能衰竭、败血症、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良。在治疗或预防肾病综合征、膜性肾病、急性肾功能衰竭、败血症、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良中的用途包括但不限于在治疗或预防肾病综合征、膜性肾病、急性肾功能衰竭、败血症、慢性肾功能衰竭、糖尿病肾病、肺动脉高压、急性肺病症、急性呼吸窘迫综合征(ards)、心力衰竭、中风、恶性肿瘤或肌营养不良的一种或多种症状或方面的
用途。
[0089]
本发明进一步包括本方法的任何变体，其中可在其任何阶段获得的中间产物用作原材料并进行剩余步骤，或其中原材料在反应条件下原位形成，或其中反应组分以其盐或光学纯材料的形式使用。
[0090]
下述实施例预期说明本发明而不应解释为对本发明的限制。温度以摄氏度(℃)给出。如果没有另外提到，则所有蒸发都在减压下执行，通常为约15 mm hg至100 mm hg (=20-133 mbar)。最终产物、中间体和原材料的结构通过标准分析方法加以确认，所述标准分析方法例如微量分析和光谱特性，例如ms、ir、nmr。使用的缩写是本领域常规的那些缩写。
[0091]
本发明还涉及这样的方法形式，其中可在该方法的任何阶段作为中间体获得的化合物用作原材料并进行剩余的方法步骤，或其中原材料在反应条件下形成、或以衍生物的形式例如以受保护的形式或盐的形式使用，或可通过根据本发明的方法获得的化合物在工艺条件下生产并且在原位进行进一步加工。
[0092]
用于合成本发明的化合物的所有原材料、构件块、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂或者是商购可得的，或者可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法进行生产。
[0093]
实验除非另有说明，否则所有材料都得自商业供应商，并且无需进一步纯化而使用。除非另有说明，否则所有份都按重量计，且温度为摄氏度。所有微波辅助反应都用来自biotage的smith synthesizer进行。质谱数据通过电喷雾电离技术进行确定。如通过高效液相色谱法确定的，所有实施例都纯化至》95%的纯度。除非另有说明，否则反应在室温下运行。
[0094]
商购可得的材料购自sigma aldrich、hdh pharma、pharmablock、alfa aesar、enovation chemicals和combi-blocks。
[0095]
关于本技术中描述的化合物的化合物名称，即iupac名称使用chemdraw化合物命名软件生成。
[0096]
使用下述缩写：
一般制备方法本文所述的化合物使用本领域技术人员已知的技术，通过方案1中描述的反应顺序以及通过其它方法进行制备。此外，在下述方案中，当提到具体的酸、碱、试剂、偶联剂、溶剂等时，应理解其它合适的酸、碱、试剂、偶联剂、溶剂等可以使用并包括在本发明的范围内。
[0097]
本发明的所选化合物的合成如方案1中所述进行制备。所需双苯胺的cdi偶联提供了相应的苯并咪唑酮。经受回流的pocl3递送氯代苯并咪唑。这些中间体与碱和亲核试剂一起加热，以提供snar产物。用各种亲电子试剂的烷基化随后为酸性boc脱保护提供了最终化合物。
[0098]
方案1. 最终产物的一般合成方案2. snar中间体的一般合成
中间体i-1：((3r,4r)-1-(4,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯步骤1. 4,6-二氟-1,3-二氢-2h-苯并咪唑-2-酮将3,5-二氟苯-1,2-二胺(210.0 g，1.457 mol，1.0当量)和cdi (236.0 g，1.457 mol，1.0当量)溶解于无水thf (2.5 l，11.9 ml/g)中，并且在室温下搅拌12小时。lcms指示反应完成。反应混合物用水(6.0 l)稀释并用乙酸乙酯(2 x 6.0 l)提取。合并的有机层在硫酸钠上干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供作为黑色固体的粗制4,6-二氟-1,3-二氢-2h-苯并咪唑-2-酮(180.0 g，1.058 mol，72.6%产率)，其无需进一步纯化用于下一步。ms (esi，正离子) m/z：171.0 [m+1]步骤2. 2-氯-4,6-二氟-1h-苯并咪唑将粗制4,6-二氟-1,3-二氢-2h-苯并咪唑-2-酮(180.0 g，1.058 mol，1.0当量)悬浮于pocl
3 (2.0 l)中，并且在搅拌下在110℃下加热2小时。lcms指示反应完成。反应质量在减压下浓缩，并且将残余物用乙腈(1.0 l)和碳酸氢钠饱和水溶液(1.0 l)稀释，并且用
乙酸乙酯(2 x 4.0 l)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥，过滤并且在减压下浓缩，以提供作为棕色固体的2-氯-4,6-二氟-1h-苯并咪唑(105.0 g，557.0 mmol，52.6%产率)，其无需进一步纯化而用于接下来的反应。ms (esi，正离子) m/z：189.0 [m+1]步骤3. ((3r,4r)-1-(4,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(中间体i-1)向8-ml小瓶中加入n-[(3r,4r)-4-氟哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁基酯(0.631 ml，2.92 mmol，1.1当量)、2-氯-4,6-二氟-1h-苯并咪唑(500 mg，2.65 mmol，1.0当量)和1,1'-二甲基三乙胺(0.695 ml，3.98 mmol，1.5当量)的二甲基亚砜(3 ml)溶液。将溶液加热至130℃过夜。允许反应混合物冷却至室温。反应混合物用乙酸乙酯(20 ml)稀释并且倒入水(100 ml)内。分离各层并用etoac (2 x 20 ml)萃取水层。合并的有机提取物在na2so4上干燥。将溶液过滤并且在真空中浓缩，以给出作为棕色固体的粗制((3r,4r)-1-(4,6-二氟-1h-苯并咪唑-2-基)-4-氟哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(i-1，714 mg，2.46 mmol，93%产率)。粗产物无需进一步纯化而使用。(esi，正离子) m/z：371.2 [m+1]使用与上文对于中间体i-1和一般方案2描述的类似的顺序，合成下述中间体：表1. 遵循方案2制备的snar中间体
方案3. snar中间体向最终产物的推进
实施例1：(3r,4r)-4-氟-1-(5-氟-1-((5-氟吡啶-2-基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)哌啶-3-胺步骤1. ((3r,4r)-4-氟-1-(5-氟-1-((5-氟吡啶-2-基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯将烧瓶装满i-1 (4g，11.35 mmol)、2-(溴甲基)-5-氟吡啶氢溴酸盐(4.00 g，14.76 mmol)的乙腈(56.8 ml)和cs2co3 (11.10 g，34.1 mmol)溶液，并且在环境温度下搅拌16小时。反应混合物用水(150 ml)稀释并且用etoac (2x 200 ml)萃取。将有机层用水(100 ml)洗涤，在无水na2so4上干燥，且浓缩以获得浅棕色固体。这通过用etoac的庚烷溶液
洗脱，通过biotage np (100g)柱进行纯化。将纯级分合并，以获得((3r,4r)-4-氟-1-(5-氟-1-((5-氟吡啶-2-基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(4.4 g，9.53 mmol，84%产率，异构体的混合物)。异构体分离通过sfc使用chiralcel oz-h 2x25 cm + chiralcel oz-h 2x15 cm + chiralcel oz-h 2x15 cm，5um柱、15%乙醇w/ 0.2%二乙胺的流动相，使用70 ml/分钟的流速来完成，生成具有ee》99%的1400 mg峰1。(esi，正离子) m/z：462.0 [m+1]步骤2. (3r,4r)-4-氟-1-(5-氟-1-((5-氟吡啶-2-基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)哌啶-3-胺(实施例1)将((3r,4r)-4-氟-1-(5-氟-1-((5-氟吡啶-2-基)甲基)-1h-苯并咪唑-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁基酯(1400 mg，3.03 mmol)溶解于tfa (10当量)/dcm (10 ml)的混合物中。反应在rt下搅拌直至通过lcms分析完成。在减压下去除挥发物，并且使用反相条件(0.1% nh4oh的acn溶液和水作为流动相)纯化残余物，以提供作为白色固体的标题化合物(998 mg，91%产率)。1h nmr (600 mhz，dmso-d6) δ 8.50 (d，j=2.88 hz，1 h) 7.73 (td，j=8.72，2.96 hz，1 h) 7.42 (dd，j=8.68，4.87 hz，1 h) 7.34 (dd，j=8.72，4.28 hz，1 h) 7.07 (dd，j=9.26，2.49 hz，1 h) 6.92 (ddd，j=10.06，8.66，2.53 hz，1 h) 5.40 (s，2 h) 4.32
ꢀ‑ꢀ
4.45 (m，1 h) 3.38
ꢀ‑ꢀ
3.56 (m，2 h) 2.90
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3.09 (m，2 h) 2.78 (dd，j=12.46，8.64 hz，1 h) 1.98
ꢀ‑ꢀ
2.14 (m，1 h) 1.70
ꢀ‑ꢀ
1.80 (m，1 h)。(esi，正离子) m/z：362.2 [m+1]使用与上文对于实施例1和一般方案3描述的类似的顺序，合成下述实施例：表2. 遵循方案3制备的化合物和表征数据
生物学实施例1 trpc6钙通量测定trpc6 (瞬时受体电位通道家族c6)抑制剂的效力通过其抑制由oag (1-油酰基-2-乙酰基-sn-甘油，millipore sigma，06754)刺激对用人trpc6稳定转染的hek293细胞触发的钙流入进行测量，使用flipr tetra系统(bd pbx calcium assay kit；bd biosciences，san jose ca)。细胞在潮湿环境中在37℃和5% co2下生长，使用具有下述选择性试剂的生长培养基(达尔贝科改良伊格尔培养基(dmem)高葡萄糖、10%胎牛血清、1xpsglu (青霉素-链霉素谷氨酰胺)、1x neaa (非必需氨基酸)、1x丙酮酸钠和200ug/ml潮霉素)。对于一般传代，细胞生长至70-90%汇合；去除培养基，并且用不含钙和镁的pbs (磷酸盐缓冲盐水)，将细胞轻轻洗涤2次。胰蛋白酶(3ml)在37℃下应用5分钟。通过将烧瓶靠在手的底部敲打将细胞移出，并且加入7 ml生长培养基，以使胰蛋白酶失活并且将细胞重悬浮。通常的拆分时间表是每2-3天1:5。
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使用多通道移液管或多滴管，在测定前一天将细胞铺平板，铺平板细胞密度为在聚-d-赖氨酸(pdl)包被的384孔板中1.0-1.5x104/25μl/孔。这些细胞在pdl包被的384孔黑色平板上生长过夜后，它们首先在室温下与荧光染料一起温育90-120分钟(染料加载缓冲液10ml示例：9 ml测定缓冲液，1 ml，10x pbx信号增强剂，10 μl钙指示剂)。在用trpc6激动剂oag刺激之前，使细胞与一定剂量的化合物一起温育25分钟。通过将oag加入测定缓冲液(ca林格溶液基：10 mm hepes (4-(2-羟乙基)-l-哌嗪-乙磺酸)、4mm mgcl2、120mm nacl、5mm kcl、 ph=7.2 @25 ℃) + 0.1% bsa + 2mm cacl
2 )至0.2mm/2% dmso的浓度来制备oag溶液，其实现了50um/0.5% dmso的最终细胞浓度。添加12.5 ul oag混合物，并且通过在ffipr terra系统上的细胞内钙水平变化来测量trpc6通道的激活。
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通过在180秒成像帧过程中测量从背景中减去的荧光峰值信号来获取数据。每个数据点进一步针对100%的oag触发信号相对于缓冲液进行标准化。表3提供了每种化合物的ic
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，所述数据通过在化合物剂量上绘制峰值信号而获得。
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表3. 对于实施例1-21测量的htrpc6效力
前述仅是本发明的说明，并不预期将本发明限制于所公开的化合物。对本领域技术人员显而易见的改变和变化都预期在所附权利要求中限定的本发明的范围和性质内。
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根据前述描述，本领域技术人员可以容易地确定本发明的本质特征，并且无需脱离其精神和范围，可以进行本发明的各种变化和修改，以使其适应各种用途和条件。