一种植物复配提取物及其在制备博落回口服液中的应用

1.本发明属于中兽药制备技术领域，具体涉及一种植物复配提取物及其在制备博落回口服液中的应用。


背景技术：

2.长期以来，抗菌素及化学兽药品残留已严重影响到动物性食品安全卫生，影响生态畜牧业的健康发展。全球性的淘汰、限制化学兽药品及抗生素的使用品种越来越多。自2020年1月1日起，退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种。民族中兽药是中华民族长期与动物疾病抗争过程中留下的瑰宝，是一类纯天然绿色动物保健产品，资源丰富，是新兴产业，具有巨大的发展空间和市场前景及出口创汇潜力，是我国及当今世界兽药研发生产方向。
3.博落回又名号筒草、号筒杆、泡桐杆、勃勒回、山大筒、黄薄荷、黄婆娘、三钱三、野麻子、吹火筒，是罂粟科博落回属多年生高大草本，使用博落回治疗疥癣、疔毒及杀虫灭蛆等在我国有悠久的历史。全草有大毒，入药治跌打损伤、关节炎、汗斑、恶疮、蜂螫伤及麻醉镇痛、消肿；作农药可防治稻椿象、稻苞虫、钉螺等。现代医学研究表明，博落回的有效药用成分为生物碱，也提取分离出血根碱(sanguinarine)、白屈菜红碱(chelerythrine)、博落回碱(bocconoline)、原阿片碱(protopine)、别隐品碱(allocryptopine)、小檗碱(berberine)等多种，均属异喹啉类生物碱。博落回生物碱是一种具有抗菌消炎、清热解毒、增强免疫功能、抑制多种病原菌、抗病毒、抗肿瘤等多种功效作用，广泛用于人、畜多种感染性疾病治疗。
4.千里光(climbing groundsel herb)，别名九里明、九里光、黄花母、眼明草、百花草，为菊科植物千里光的全草入药，广泛分布于湖北、四川、贵州、云南、安徽、浙江、江西、湖南等省区。千里光具有清热解毒、凉血消肿、清肝明目、杀虫止痛之功效。用以治疗风热感冒、流行性感冒、目赤肿痛、上呼吸道感染、急性扁桃体炎、咽喉肿痛、肺炎、大叶性肺炎、肠炎，泄泻痢疾等。千里光煎剂对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、志贺痢疾杆菌、鲍氏痢疾杆菌、流感杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌、卡他球菌、变形杆菌等均有抑菌作用。现代医学研究表明，千里光全草含大量的毛莨黄素(flavoxanthin)、千里光宁碱(senecionine)，千里光菲灵碱(seneciphylline)等生物碱以及对
‑
羟基苯乙酸(p
‑
hydroxyphenylacetic acid)、水杨酸(salicylic acid)。此外还含挥发油，黄酮甙，鞣质等成分，花中含类中胡萝卜素(carotenoid)、β
‑
胡萝卜素(β
‑
carotene)。
5.申请号为cn201710863864.x的专利文件公开了一种治疗动物腹泻性疾病的复方博落回组合物制剂及其应用，组合物的活性成分由博落回总生物碱提取物、喹诺酮类化合物，用于治疗动物腹泻性疾病。但其是采用了喹诺酮类化合物与之配伍，喹诺酮类药物有一定的药物安全风险，属于被淘汰和限用的兽用抗菌素，人们在长期食用喹诺酮类药物残留的动物性食品可造成人体易呼吸道感染、基因突变、致癌等，容易诱导耐药性的传递，从而影响该类药物的临床疗效以及动物性食品安全。


技术实现要素：

6.本发明为解决上述问题，提供了一种植物复配提取物及其在制备博落回口服液中的应用。
7.具体是通过以下技术方案来实现的：
8.1、一种植物复配提取物，是以博落回果和千里光全草以55
‑
65％：35
‑
45％的比例混合后，经浸渍增溶、浓缩过滤、澄清定容得到。
9.2、上述植物复配提取物，其制备方法包括以下步骤：
10.(1)浸渍增溶：
11.a.沸水沸腾浸泡：取55
‑
65％博落回果粗粉(20
‑
40目)与35
‑
45％千里光全草粗粉(20
‑
40目)混合均匀，加等量ph为2
‑
3的沸水，在保持沸腾的状态下浸泡30
‑
60min；
12.b.酸乙醇浸渍提取：加入药材量3
‑
5倍的酸乙醇，在60
‑
80℃下浸提1
‑
2小时；
13.进一步，所述的酸乙醇，是采用硫酸进行调节ph，ph为2
‑
3，浓度为95％；
14.c.超声破碎增溶：经酸乙醇浸渍提取后再于50
‑
60℃下以谐振频率为22
‑
26khz的超声波处理1
‑
2小时，得到醇提液；
15.(2)浓缩过滤：将步骤(1)中得到的醇提液过滤后减压回收乙醇，直至提取液中含醇量在30
‑
40％，趁热过滤，得到滤液；
16.(3)澄清定容：在步骤(2)得到的滤液中按体积的0.1
‑
0.2％加入澄清剂，搅拌后于5
‑
15℃静置12
‑
24小时，过滤，按2
‑
3％的总生物碱浓度要求加热后用蒸馏水定容，得到植物复配提取物。
17.进一步，所述的定容，定容后每ml溶液中含有总生物碱20mg以上。
18.3、上述植物复配提取物在制备博落回口服液中的应用，所述口服液，其制备方法包括以下步骤：
19.取成品总量65％的蔗糖加入成品总量30％左右的沸蒸馏水中搅拌溶解后精滤，加入植物复配提取物搅拌均匀，加入蒸馏水至足量，得到粗制口服液；调ph为4
‑
6，加入1
‑
2％助溶剂、0.05
‑
0.1％防腐剂、加红色矫色剂调口服液呈棕红色时止，搅拌均匀，精滤，按50或100ml定量灌装、密封、包装。经质检鉴别，口服液呈特定显紫色，相对密度为1.01
‑‑
1.05。
20.进一步，所述的粗制口服液，每ml中含总生物碱5mg以上，蔗糖含量为65％。
21.进一步，所述口服液是应用于动物腹泻性疾病，针对的腹泻性疾病为牛、羊、猪(特别是仔猪)、家禽下痢(黄痢、红痢、白痢)、肠炎、腹泻疾病。
22.本发明所采用的澄清剂为本领域可接受的澄清剂。
23.综上所述,本发明的有益效果在于：本发明采用博落回与千里光进行复配提取，得到一种植物复配提取物，再采用液体生产法制得一种无抗生素的中兽药复方口服液产品，能有效治疗牛、羊、猪、家禽下痢(黄痢、红痢、白痢)、肠炎、腹泻等腹泻性疾病，治疗效果好，应用范围广，不会造成抗生素在畜禽体内的积累，避免诱导耐药性的传递，使用后无任何毒副残留作用，符合生产无公害畜产品、绿色畜产品的用药要求。
24.其中，药理作用如下：博落回，味苦，寒。有大毒。主治：祛风解毒，散瘀消肿。用于跌打损伤，风湿关节痛，痈疖肿毒，下肢溃疡(鲜品捣烂外敷或研粉撒敷患处)，阴道滴虫(煎水冲洗阴道)，湿疹(煎水外形)，烧烫伤(研粉调搽患处)。并可杀蛆虫。千里光，味苦，寒。主治：痈肿疮毒，感冒发热，目赤肿痛，泄泻痢疾，皮肤湿疹。
25.本发明工艺流程科学简洁、成本低、效益高。整个口服液生产工艺采取了天然产物提取液体生产法，既采用沸水沸腾浸滞、酸化乙醇分级热浸提、超声波破碎增溶、真空浓缩、逐级过滤、澄清剂沉淀除杂、混合配伍新工艺新技术精制而成。在工艺中使用了糖浆剂载体，不需要干燥工艺，而且博落回果粗粉与千里光全草粗粉混合后一次提取，不需要各自单独提取，节省了资源。其成品有效成分含量高、质量稳定、色泽度好。适合于工业化生产，产品包装运输携带方便。恰当浓度的糖浆剂有利于提高制剂的稳定性和澄明度，防止主药的析出沉淀，提升药品有效期质量，增加适口性使动物喜欢吞食。博落回生物碱、千里光生物碱是一种具有抗菌消炎，清热解毒，对畜禽肠道多种病原菌有较好抑制和杀灭作用的纯天然产物，两者配伍组成复方制剂起到药效增强1+1>2效果，口服液通过口服直接到达胃肠吸收的更快、更完全,生物利用度高,呈现的治疗效果也更好，对猪、牛、羊、禽肠道细菌感染性疾病有较好的治疗效果。在使用后无任何毒副残留作用，安全可靠，使用方便，应用范围广，疗效显著，见效快；符合生产无公害畜产品、绿色畜产品的用药要求，即发挥了中草药治病调节的整体性、多效性、双向性、协同性的传统配伍整体效应优势，又体现了现代科学技术对中草药精制优势，使用方便、快捷、易携带等优点。符合“绿色产品”发展方向，是一种较好的“替抗”中兽药产品。
具体实施方式
26.下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
27.实施例1
28.1、一种植物复配提取物，是以博落回果和千里光全草以60％：40％的比例混合后，经浸渍增溶、浓缩过滤、澄清定容得到。
29.2、上述植物复配提取物，其制备方法包括以下步骤：
30.(1)浸渍增溶：
31.a.沸水沸腾浸泡：取5kg含60％博落回果粗粉(30目)与40％千里光全草粗粉(30目)混合均匀，加等量ph为3的沸水，在保持沸腾的状态下浸泡40min；
32.b.酸乙醇浸渍提取：加入药材量4倍的酸乙醇，在70℃下浸提2小时；
33.进一步，所述的酸乙醇，是采用硫酸进行调节ph，ph为2，浓度为95％；
34.c.超声破碎增溶：经酸乙醇浸渍提取后再于55℃下以谐振频率为24khz的超声波处理2小时，得到醇提液；
35.(2)浓缩过滤：将步骤(1)中得到的醇提液过滤后减压回收乙醇，直至提取液中含醇量在35％，趁热过滤，得到滤液；
36.(3)澄清定容：在步骤(2)得到的滤液中按体积的0.2％加入澄清剂，搅拌后于10℃静置18小时，过滤，按2
‑
3％的总生物碱浓度要求加热后用蒸馏水定容，得到植物复配提取物。
37.3、上述植物复配提取物在制备博落回口服液中的应用，所述口服液，其制备方法包括以下步骤：
38.取蔗糖约1300g加入适量沸蒸馏水中搅拌溶解精滤，加入植物复配提取物搅拌均
匀，加蒸馏水至约20000ml，得到粗制口服液；调ph为5，加入1％聚山梨酯
‑
80助溶剂、0.05％山梨酸防腐剂，加红色矫色剂调口服液呈棕红色时止，搅拌均匀，精滤，按50ml/支定量灌装、密封、包装。取本品1ml，蒸干，残渣加硫酸1ml，再加变色酸钠5mg，水浴加热，口服液呈特定显紫色，相对密度为1.04。
39.进一步，所述的粗制口服液，每ml中含总生物碱5mg以上，蔗糖含量为65％。
40.实施例2
41.1、一种植物复配提取物，是以博落回果和千里光全草以55％：45％的比例混合后，经浸渍增溶、浓缩过滤、澄清定容得到。
42.2、上述植物复配提取物，其制备方法包括以下步骤：
43.(1)浸渍增溶：
44.a.沸水沸腾浸泡：取5kg含55％博落回果粗粉(20目)与45％千里光全草粗粉(20目)混合均匀，加等量ph为2的沸水，在保持沸腾的状态下浸泡30min；
45.b.酸乙醇浸渍提取：加入药材量5倍的酸乙醇，在60℃下浸提1小时；
46.进一步，所述的酸乙醇，是采用硫酸进行调节ph，ph为3，浓度为95％；
47.c.超声破碎增溶：经酸乙醇浸渍提取后再于50℃下以谐振频率为22khz的超声波处理2小时，得到醇提液；
48.(2)浓缩过滤：将步骤(1)中得到的醇提液过滤后减压回收乙醇，直至提取液中含醇量在30％，趁热过滤，得到滤液；
49.(3)澄清定容：在步骤(2)得到的滤液中按其体积的0.1％加入澄清剂，搅拌后于15℃静置12小时，过滤，加热后按2％的总生物碱浓度要求用蒸馏水定容，得到植物复配提取物。
50.3、上述植物复配提取物在制备博落回口服液中的应用，所述口服液，其制备方法包括以下步骤：
51.取蔗糖约1300g加入适量沸蒸馏水中搅拌溶解精滤，加入植物复配提取物搅拌均匀，加蒸馏水至约20000ml，得到粗制口服液；调ph为4，加入0.5％聚山梨酯
‑
80助溶剂、0.05％山梨酸防腐剂、红色矫色剂，调口服液呈棕红色，搅拌均匀，精滤，定量灌装、密封、包装。取本品1ml，蒸干，残渣加硫酸1ml，再加变色酸钠5mg，水浴加热，口服液呈特定显紫色，相对密度为1.01。
52.进一步，所述的粗制口服液，每ml中含总生物碱5mg以上，蔗糖含量为65％。
53.实施例3
54.1、一种植物复配提取物，是以博落回果和千里光全草以65％：35％的比例混合后，经浸渍增溶、浓缩过滤、澄清定容得到。
55.2、上述植物复配提取物，其制备方法包括以下步骤：
56.(1)浸渍增溶：
57.a.沸水沸腾浸泡：取5kg含65％博落回果粗粉(40目)与35％千里光全草粗粉(40目)混合均匀，加等量ph为3的沸水，在保持沸腾的状态下浸泡60min；
58.b.酸乙醇浸渍提取：加入药材量3倍的酸乙醇，在80℃下浸提2小时；
59.进一步，所述的酸乙醇，是采用硫酸进行调节ph，ph为3，浓度为95％；
60.c.超声破碎增溶：经酸乙醇浸渍提取后再于60℃下以谐振频率为26khz的超声波
处理1小时，得到醇提液；
61.(2)浓缩过滤：将步骤(1)中得到的醇提液过滤后减压回收乙醇，直至提取液中含醇量在40％，趁热过滤，得到滤液；
62.(3)澄清定容：在步骤(2)得到的滤液中按其体积的0.2％加入澄清剂，搅拌后于5℃静置24小时，过滤，加热后按2％的总生物碱浓度要求用蒸馏水定容，得到植物复配提取物。
63.3、上述植物复配提取物在制备博落回口服液中的应用，所述口服液，其制备方法包括以下步骤：
64.取蔗糖约1300g加入适量沸蒸馏水中搅拌溶解精滤，加入植物复配提取物搅拌均匀，加蒸馏水至约20000ml，得到粗制口服液；调ph为6，加入1％聚山梨酯
‑
80助溶剂、0.05％山梨酸防腐剂、红色矫色剂，调口服液呈棕红色，搅拌均匀，精滤，定量灌装、密封、包装。取本品1ml，蒸干，残渣加硫酸1ml，再加变色酸钠5mg，水浴加热，口服液呈特定显紫色，相对密度为1.03。
65.进一步，所述的粗制口服液，每ml中含总生物碱5mg以上，蔗糖含量为65％。
66.上述实施例中所采用的澄清剂均为本领域可接受的澄清剂。
67.一、博落回复配口服液治疗仔猪感染大肠杆菌病腹泻实验
68.1.1实验动物
69.选择28
‑
35日龄的地方萝卜猪断奶仔猪160头，随机分为9组，其中，为节约猪源，10头一组为健康对照组，10头一组为药物对照组，剩余7组为实验组，实验组每组20头仔猪。
70.1.2实验方法
71.除健康对照组10头仔猪外，其他仔猪人工接种致病性大肠杆菌o149：k88ac，20h后用药物实施治疗。试验用60％博落回+40％千里光组，50％博落回+50％千里光组，40％博落回+60％千里光组，50％博落回+50％十大功劳茎叶，100％博落回100％千里光，硫酸安普霉素对照组各20头仔猪，分别按每头仔猪5ml的剂量灌服博落回口服液，药物对照组20头仔猪，用硫酸安普霉素可溶性粉溶于水中灌服，剂量为每kg体重12.5mg。感染对照组10头仔猪，不用药。各组均每天给药2次，连用3天，于停药3d后统计疗效。
72.1.3实验结果
73.博落回复配口服液对人工感染大肠杆菌病猪的治疗效果对比如表1所示。
74.表1
[0075][0076]
由实验结果可知，博落回与千里光三组不同组成比例配伍处方中，以60％博落回+40％千里光成分配方组对人工感染大肠杆菌病猪的治疗结果最好，治愈率在90.0％以上；在七个不同成分配方组成中，效果最差的为100％千里光组，其次为100％博落回组，博落回与千里光配伍组成的三个复方组治疗结果都优于博落回与千里光单方组，而治疗结果最好的是60％博落回+40％千里光组成的配方组；60％博落回+40％千里光配方组比目前常用的抗菌素硫酸安普霉素对照组治疗效果好出5个百分点。试验结果表明60％博落回+40％千里光组的博落回口服液对人工感染大肠杆菌病猪腹泻治疗效果最好。
[0077]
二、急性毒性实验
[0078]
1、材料
[0079]
1.1实验动物：20只清洁级健康wistar大鼠，体重180
‑
200g，雌雄各半。
[0080]
1.2受试药物：以实施例1的方法制备的博落回复配口服液，即为受试药液。
[0081]
2、实验方法
[0082]
参照《兽药急性毒性试验指导原则》，取20只清洁级健康wistar大鼠，分开饲养(每笼5只)，禁食12h后分别称重、编号，经口给药，采用最大给药剂量法测定博落回复配口服液对wistar大鼠经口染毒的ld
50
，当大鼠经口染毒剂量达到或超过5g/kg b.w时停止染毒。预实验大鼠染毒剂量达到5g/kg b.w以上时，大鼠均存活。按预实验最大染毒剂量5g/kg b.w进行染毒，测定ld
50
，在最后一次染毒结束后持续观察14天，观察并记录大鼠临床症状和死亡情况。观察期间大鼠自由采食和饮水。观察期结束后处死所有存活大鼠，进行眼观病理学检查。
[0083]
3、实验结果
[0084]
观察期内所有大鼠临床表现正常，无明显神经症状，皮肤被毛无异常，采食、饮水和排便等正常，至观察期结束时20只大鼠均存活。剖检存活大鼠，眼观均未发现明显可见的病理变化。结果表明，博落回复配口服液对大鼠的经口染毒ld
50
大于5g/kg b.w以上，是非常
安全的。
[0085]
由上述实验可知，采用博落回与千里光进行配伍得到的口服液具有协同增效性，促生长效果明显，并且使用后无任何毒副残留作用，安全可靠，使用方便，应用范围广，疗效显著，见效快，符合生产无公害畜产品、绿色畜产品的用药要求。