一种抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物，制备方法及其应用

1.本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物，制备方法及其应用。


背景技术：

2.随着人们生活水平的提高和化妆品产业的快速发展，人们对化妆品的需求日趋增长，而专业知识的匮乏确容易使人们在形形色色的化妆品原料和成分中无法选择得到适合自己的化妆品，进而使皮肤出现过敏、泛红等现象；同时，空气污染、紫外线辐射等环境因素也会使人们的身体产生大量的自由基进而引发肌肤过敏或炎症。
3.自由基，化学上也称为“游离基”，是指化合物的分子在光热等外界条件下，共价键发生均裂而形成的具有不成对电子的原子或基团。其在人体内会攻击正常细胞，导致细胞的衰老死亡，进而使皮肤屏障受损，皮肤水分过量散失，细胞生存内环境受到影响，严重破坏细胞间平衡和稳定，最终导致皮肤抵抗力下降，出现干燥、过敏、细菌感染、湿疹皮炎等皮肤疾病，严重影响人们日常的生活质量。
4.目前，市面上的抗氧化、清除自由基、抗敏和舒缓修复组合物及化妆品效果并不明显，且大多为化工原料，副作用明显。因而，开发具备抗氧化、抗炎、舒缓修复作用的天然活性物质，并将其安全地应用到化妆品中以达到抗氧化、抗敏、舒缓修复的效果，是本技术领域亟待解决的问题。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物，制备方法及其应用，本发明提供的组合物具备显著的抗氧化、抗炎和修复功效，并且成分安全无不良反应。
6.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.本发明提供了一种抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物，包括以下重量份数的组分：仙人掌提取物16～24份、甘草提取物3.6～6份和0.96～1.6份香水莲花提取物。
8.优选的，所述组合物还包括以下重量份数的组分：燕麦肽0.8～2.4份，迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
9.更优选的，所述组合物包括以下重量份数的组分：仙人掌提取物16份、甘草提取物3.6份、燕麦肽2.4份、香水莲花提取物1.6份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
10.本发明提供了一种抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物的制备方法，包括如下步骤：
11.将仙人掌，甘草和香水莲花分别依次经过浸泡、超声提取，得上清液，经浓缩、冻干，分别获得仙人掌提取物、甘草提取物和香水莲花提取物；
12.将仙人掌提取物、甘草提取物和香水莲花提取物混合，获得抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物。
13.优选的，所述抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物还包括燕麦肽、迭迭香酸和海藻糖时，所述制备方法还包括：
14.将燕麦籽粒依次经过粉碎、脱脂、tris
‑
hcl缓冲液超声提取获得上清液；将所述上清液与等体积的三氯乙酸混合静置，得到静置上清液；将所述静置上清液依次进行浓缩和冻干，得燕麦肽；
15.将所述仙人掌提取物、甘草提取物、香水莲花提取物、燕麦肽、海藻糖和迷迭香酸混合，获得抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物。
16.优选的，所述浓缩包括：将仙人掌上清液、香水莲花上清液和燕麦肽上清液分别浓缩至对应原有体积的1/3～1/4；
17.将加入三氯乙酸后的甘草上清液浓缩至其原有液体积的1/4～1/5。
18.优选的，所述脱脂溶剂包括正己烷；tris
‑
hcl缓冲液的浓度为0.1mol/l；三氯乙酸的质量百分浓度为12％。
19.本发明还提供了上述抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物在制备具有抗氧化、抗炎和舒缓修复功能的化妆品中的应用。
20.优选的，所述抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物占化妆品总质量的0.05％～20％。
21.更优选的，所述抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物占化妆品总质量的1.0％～3.0％。
22.本发明的有益效果：
23.本发明提供一种抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物，包括以下重量份数的组分：仙人掌提取物16～24份、甘草提取物3.6～6份、0.96～1.6份香水莲花提取物。本发明提供的抗氧化、抗炎、舒缓修复组合物大多源于绿色草本植物，属于温和的活性物质，具有显著的抗氧化、抗炎和舒缓修复功效，且安全不刺激，无不良反应。
24.通过清除自由基实验、透明质酸酶抑制实验、细胞修复活性功效评价实验证明，本技术中的组合物可以有效地清除机体内过多的自由基，同时能减轻局部炎症，镇静舒缓肌肤，修复受损皮肤屏障的功能，辅助肌肤自我修复，维持肌肤健康。其自由基清除率可高达99.95％，透明质酸酶抑制率可高达100％，且对hacat迁移的具有明显地促进作用，hacat细胞划痕愈合率可高达73.92
±
3.68％。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
26.图1为本发明实施例10中不同浓度的组合物处理24h后对hacat细胞增殖影响的结果图；
27.图2为本发明实施例10中不同浓度的组合物处理48h后对hacat细胞增殖影响的结果图；
28.图3为经过本发明实施例10中不同浓度的组合物分别处理0h、12h和24h后，对hacat细胞迁移影响的结果图。
具体实施方式
29.本发明提供了一种抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物，包括以下重量份数的组分：仙人掌提取物16～24份、甘草提取物3.6～6份和0.96～1.6份香水莲花提取物。
30.本发明提供的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物，优选还包括以下重量份数的组分：
燕麦肽0.8～2.4份，迷迭香0.8份和海藻糖0.8份。
31.如无特殊要求，本发明对各组分的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。
32.以质量份计，本发明提供的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物包括16～24份的仙人掌提取物，优选为16～20份，更优选为16份。在本发明中，所述仙人掌提取物中含有丰富的植物营养素，能够增强皮肤免疫力，具有显著的抗氧化、抗感染功效，对于治疗皮肤上的炎症以及青春痘等具有很好的效果；且仙人掌提取物还能够促进细胞的再生和修复，使皮肤恢复弹性，具有很好的护肤作用。
33.以所述仙人掌提取物的质量份数为基准，本发明提供的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物包括3.6～6份的甘草提取物，优选为3.6～4.8份，更优选为3.6份。在本发明中，所述甘草提取物为白色粉末，水溶性好，安全无毒。具有消炎、抗溃疡、抗氧化、抑菌、治疗创伤、有效清除自由基和促进上皮细胞组织再生等作用。
34.以所述仙人掌提取物的质量份数为基准，本发明提供的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物包括0.96～1.6份的香水莲花提取物，优选为1.28～1.6份，更优选为1.6份。在本发明中，所述香水莲花提取物中富含人体所需的蛋白质、碳水化合物、维生素、活性多肽、矿物质、纤维素等营养成份，同时香水莲花提取物中含有的植物胎盘素对平衡人体内分泌系统起到了非常关键的作用，能够提供肌肤营养素与矿物质，长期使用能改善皮肤暗沉，使肌肤润滑细致有光泽，起到显著的抗氧化、抗皱、补水、亮肤等作用。
35.以所述仙人掌提取物的质量份数为基准，本发明提供的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物优选包括0.8～2.4份的燕麦肽，优选为1.6～2.4份，更优选为2.4份。在本发明中，所述燕麦肽是存在于燕麦中的肽，常见的有亮肽素，可强烈抑制蛋白酶活性，具有抗氧化的作用；同时还有助渗透的作用，帮助皮肤更好的吸收其他营养物质；同时赋予皮肤营养，调理肌肤，高效保湿，减少皮肤粗糙度。在化妆品中主要用于抗氧化剂和皮肤调理剂。
36.以所述仙人掌提取物的质量份数为基准，本发明提供的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物优选包括0.8份的迷迭香酸。在本发明中，所述迷迭香酸具有极强的清除体内自由基的活性和抗氧化作用。其作用机理为：迷迭香酸与不饱和脂肪酸竞争性与脂质过氧基结合，以终止脂质过氧化的连锁反应，降低脂质过氧化速率；迷迭香酸可通过减少细胞内钙离子浓度而抑制溶酶体的释放；抑制内皮细胞调节的低密度脂蛋白的氧化。
37.以所述仙人掌提取物的质量份数为基准，本发明提供的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物优选包括0.8份的海藻糖。在本发明中，所述海藻糖对抗氧化多酚具有稳定作用，且与其具有很好的配伍性、相容性、稳定性。海藻糖可以防止蛋白质变性、保持各种蛋白质及多肽类活性成分的功效；还具有多种生物学功能，如保湿性、抗氧化活性、抗菌活性等。同时，海藻糖还能够在皮肤表层形成一层特殊的保护膜，保持皮肤原有营养和水分，保护细胞膜结构，活化细胞；且其将外来热量辐射出去的功能，避免皮肤晒伤及黑色素沉积，有效防止皮肤老化现象。
38.本发明还提供了一种抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物的制备方法，包括如下步骤：将仙人掌、甘草和香水莲花分别依次经过浸泡、超声提取，得上清液，经浓缩、冻干，分别获得仙人掌提取物、甘草提取物和香水莲花提取物；将仙人掌提取物、甘草提取物和香水莲花提取物混合，获得抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物。
39.本发明将仙人掌依次进行浸泡、超声提取，得上清液。本发明优选以仙人掌粉末进
行浸泡；本发明优选将仙人掌原料进行粉碎，过筛后，得到仙人掌粉末。在本发明中，所述仙人掌粉末的目数优选为60～80目，更优选为80目。
40.在本发明中，所述浸泡用剂优选为蒸馏水；所述仙人掌粉末与蒸馏水的质量体积比优选为1g：25～30ml，更优选为1g：25ml。在本发明中，所述浸泡的时间优选为1～2h，更优选为1h。在本发明中，所述超声提取的功率优选为350～400w，更优选为400w；温度优选为30～35℃，更优选为30℃；时间优选为40～50min，更优选为45min。所述上清液优选通过超声提取后离心获得，所述离心条件优选为在4℃，8000～10000r/min，离心10～15min，更优选为4℃，10000r/min，离心15min。本发明通过调控浸泡用水量、超声条件，使得有效物质充分被提取，得到更为有利于增强皮肤免疫力、抗氧化、抗感染的仙人掌提取物。本发明对超声提取和离心设备均没有特殊限定，采用本领域常规超声和离心设备即可。
41.得到上清液后，本发明将上清液浓缩，冻干得到仙人掌提取物。在本发明中，所述仙人掌提取物优选为粉末状。本发明优选浓缩至原有上清液体积的1/3～1/4，更优选浓缩为原有体积的1/4。得到浓缩液后，本发明优选将所述浓缩液在
‑
4℃条件下，存放24h后再进行冻干。在本发明中，所述冻干的时间优选为32～36h，更优选为36h。在本发明中，所述浓缩和冻干可保证样本的稳定性和后续样本的定量，下文如无特殊要求，所述浓缩和冻干均具备相同的作用，不再进行赘述。本发明对浓缩和冻干的方法和所使用的设备均没有特殊限定，采用本领域常规浓缩和冻干的方法及设备即可。
42.本发明将甘草依次进行浸泡、超声提取，得上清液。本发明优选以甘草粉末进行浸泡；进一步优选将甘草原料进行粉碎，过筛后，得到甘草粉末。在本发明中，所述甘草粉末的目数优选为60～80目，更优选为80目。
43.在本发明中，所述浸泡用剂优选为蒸馏水；所述甘草粉末与蒸馏水的质量体积比优选为1g：10～15ml，更优选为1g：10ml。在本发明中，所述浸泡时间优选为1～2h，更优选为1h。在本发明中，所述超声提取的功率优选为250～300w，更优选为300w；温度优选为40～45℃，更优选为45℃；时间优选为30～40min，更优选为30min；所述上清液优选通过超声提取后离心获得，所述离心条件优选为在4℃，8000～10000r/min，离心10～15min，更优选为4℃，10000r/min，离心15min。本发明通过调控浸泡用水量、超声条件，使得有效物质充分被提取，得到更为有利于抗氧化、治疗创伤、有效清除自由基和促进上皮细胞组织再生的甘草提取物。本发明对超声提取和离心设备均没有特殊限定，采用本领域常规超声和离心设备即可。
44.得到上清液后，本发明将上清液浓缩，冻干得到甘草提取物。在本发明中，所述甘草提取物优选为粉末状。所述浓缩优选浓缩至原有体积的1/4～1/5，更优选浓缩为原有体积的1/5。所述浓缩后的上清液优选在
‑
4℃条件下，存放24h后再进行冻干。所述冻干时间优选为32～36h，优选为36h。本发明对浓缩和冻干的方法和所使用的设备均没有特殊限定，采用本领域常规浓缩和冻干的方法及设备即可。
45.本发明将香水莲花依次进行浸泡、超声提取，得上清液。本发明优选以香水莲花粉末进行浸泡；进一步优选将香水莲花原料进行粉碎，过筛后，得到香水莲花粉末。在本发明中，所述香水莲花粉末的目数优选为60～80目，更优选为80目。
46.在本发明中，所述浸泡用剂优选为蒸馏水；所述香水莲花粉末与蒸馏水的质量体积比优选为1g：30～35ml，更优选为1g：35ml。在本发明中，所述浸泡时间优选为1～2h，更优
选为1h。在本发明中，所述超声提取的功率优选为350～400w，更优选为400w；温度优选为50～55℃，更优选为50℃；时间优选为30～40min，更优选为30min；所述上清液优选通过超声提取后离心获得，所述离心条件优选为在4℃，8000～10000r/min，离心10～15min，更优选为4℃，10000r/min，离心15min。本发明通过调控浸泡用水量、超声条件，使得有效物质充分被提取，得到具有显著抗氧化、抗皱、补水、亮肤作用的香水莲花提取物。本发明对超声提取和离心设备均没有特殊限定，采用本领域常规超声和离心设备即可。
47.得到上清液后，本发明将上清液浓缩，冻干得到香水莲花提取物。在本发明中，所述香水莲花提取物优选为粉末状。所述浓缩优选浓缩至原有体积的1/3～1/4，更优选浓缩为原有上清液体积的1/4。所述浓缩后的上清液优选在
‑
4℃条件下，存放24h后再进行冻干。所述冻干时间优选为32～36h，更优选为36h。本发明对浓缩和冻干的方法和所使用的设备均没有特殊限定，采用本领域常规浓缩和冻干的方法及设备即可。
48.本发明将得到的仙人掌提取物、甘草提取物和香水莲花提取物混合，获得抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物。
49.在本发明中，当所述抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物还包括燕麦肽、迷迭香酸和海藻糖时，本发明优选将燕麦籽粒依次经过粉碎、脱脂、tris
‑
hcl缓冲液超声提取获得上清液；将所述上清液与等体积的三氯乙酸混合静置，得到静置上清液；将所述静置上清液依次进行浓缩和冻干，得燕麦肽。本发明进一步优选将燕麦籽粒进行粉碎，过筛后，得到燕麦籽粒粉末。在本发明中，所述筛子的目数优选为60～80目，更优选为80目。
50.得到燕麦籽粒粉末后，本发明优选将燕麦籽粒粉末与提取溶剂混合脱脂，tris
‑
hcl缓冲液超声提取获得上清液。在本发明中，所述燕麦籽粒粉末与提取溶剂的质量体积比优选为1g：10～15ml，更优选为1g：10ml；所述提取溶剂优选为正己烷。所述脱脂后，超声提取前本发明优选还包括将脱脂液进行干燥。在本发明中，所述tris
‑
hcl缓冲液的浓度优选为0.1mol/l，所述tris
‑
hcl缓冲液的体积优选为20～22ml，更优选为20ml。在本发明中，所述超声提取的功率优选为350～400w，更优选为400w；温度优选为25～30℃，更优选为30℃；时间优选为35～40min，更优选为40min。本发明优选对超声提取料液进行离心获得上清液，所述离心条件优选为在4℃，8000～10000r/min，离心10～15min，更优选为4℃，10000r/min，离心15min。本发明优选将所述上清液与等体积三氯乙酸混合静置，获得静置上清液。所述三氯乙酸的质量浓度优选为8％～15％，更优选为12％；所述静置的时间优选为30～40min，更优选为35min。本发明优选对所述混合静置溶液进行离心获得静置上清液；所述离心条件优选为在4℃，8000～10000r/min，离心10～15min，更优选为4℃，10000r/min，离心15min。本发明对超声提取和离心设备均没有特殊限定，采用本领域常规超声和离心设备即可。
51.得到静置上清液后，本发明将静置上清液浓缩，冻干得到燕麦肽。在本发明中，所述燕麦肽优选为粉末状。所述浓缩优选浓缩至原有体积的1/3～1/4，更优选浓缩为原有上清液体积的1/4。所述浓缩后的上清液优选在
‑
4℃条件下，存放24h后再进行冻干。所述冻干时间优选为32～36h，更优选为36h。本发明对浓缩和冻干的方法和所使用的设备均没有特殊限定，采用本领域常规浓缩和冻干的方法及设备即可。
52.本发明优选将得到的仙人掌提取物、甘草提取物、香水莲花提取物、燕麦肽海藻糖和迷迭香酸混合，获得抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物。
53.本发明还提供了上述抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物在制备具有抗氧化、抗炎和舒缓修复功能的化妆品中的应用。
54.本发明优选将上述抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物与本领域常规辅料混合制备成多种用于舒缓、抗敏的化妆品，所述抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物占化妆品总质量的0.05％～20％，优选为0.1％～5％，进一步优选为1.0％～3.0％。本发明提供的上述化妆品，成分明确，除了具备显著的抗氧化功效外，还具备抗炎、修护等多种功效，且安全无不良反应，有广阔的应用前景。本发明对所述化妆品辅料的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。
55.为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
56.实施例1
57.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下(质量)：仙人掌提取物20份、甘草提取物3.6份、燕麦肽1.6份、香水莲花提取物1.28份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
58.按以上比例配比制备组合物：
59.仙人掌提取物的制备：将原料样品仙人掌粉碎，过60目筛后，取1g的仙人掌粉末加入到装有25ml的蒸馏水的烧杯中，浸泡1h，然后在超声功率400w，超声温度为30℃的条件下超声45min，再在4℃10000r/min的条件下离心15min，取上清液，再经浓缩，再经浓缩，浓缩到原有体积的1/4，放入
‑
4℃的冰箱24h，取出，再用冷冻干燥机36h，冻干得粉末，获得仙人掌提取物。
60.甘草提取物的制备：将原料样品甘草粉碎，过80目筛后，取1g的甘草粉末加入到装有10ml的蒸馏水的烧杯中，浸泡1h，然后在超声功率300w，超声温度为45℃的条件下超声30min，再在4℃10000r/min的条件下离心15min，取上清液，再经浓缩，浓缩到原有体积的1/5，放入
‑
4℃的冰箱24h，取出，再用冷冻干燥机36h，冻干得粉末，获得甘草提取物。
61.香水莲花提取物的制备：将原料样品香水莲花粉碎，过80目筛后，取1g的香水莲花粉末加入到装有35ml的蒸馏水的烧杯中，浸泡1h，然后在超声功率400w，超声温度为50℃的条件下超声提取30min，再在4℃10000r/min的条件下离心15min，取上清液，再经浓缩，浓缩到原有体积的1/3～1/4，放入
‑
4℃的冰箱24h，取出，再用冷冻干燥机36h，冻干得粉末，获得香水莲花提取物。
62.燕麦肽的制备：称取燕麦籽粒粉碎后，过80目筛后，取1g的燕麦籽粒粉末放入锥形瓶中，用10ml的正己烷脱脂处理。干燥后加入20ml的0.1mol/l tris
‑
hcl缓冲液在超声功率400w，超声温度为30℃的条件下超声提取40min后，在4℃10000r/min离心15min取上清液。上清液中加入等体积12％三氯乙酸，混合后静置30～40min，在4℃8000～10000r/min离心10～15min，取上清液，再经浓缩，浓缩到原有上清液体积的1/4，放入
‑
4℃的冰箱24h，取出，再用冷冻干燥机36h，冻干得粉末，获得燕麦肽。
63.按以上比例配比，将仙人掌提取物0.7858g、甘草提取物0.141444g、燕麦肽提取物0.062864g、香水莲花提取物0.0502912g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合，制备抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物。
64.实施例2
65.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下：仙人掌提取物16份、甘草提取物3.6份、燕麦肽0.8份、香水莲花提取物0.96份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
66.按以上比例配比，将仙人掌提取物0.62864g、甘草提取物0.141444g、燕麦肽提取物0.031432g、香水莲花提取物0.0377184g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合制备组合物，制备方法同实施例1。
67.实施例3
68.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下：仙人掌提取物24份、甘草提取物3.6份、燕麦肽2.4份、香水莲花提取物1.6份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
69.按照以上比例配比，将仙人掌提取物0.94296g、甘草提取物0.141444g、燕麦肽提取物0.094296g、香水莲花提取物0.062864g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合制备组合物，制备方法同实施例1。
70.实施例4
71.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下：仙人掌提取物20份、甘草提取物4.8份、燕麦肽2.4份、香水莲花提取物0.96份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
72.按照以上比例配比，将仙人掌提取物0.7858g、甘草提取物0.188592g、燕麦肽提取物0.094296g、香水莲花提取物0.0377184g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合制备组合物，制备方法同实施例1。
73.实施例5
74.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下：仙人掌提取物24份、甘草提取物4.8份、燕麦肽0.8份、香水莲花提取物1.28份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
75.按照以上比例配比，将仙人掌提取物0.94296g、甘草提取物0.188592g、燕麦肽提取物0.031432g、香水莲花提取物0.0502912g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合制备组合物，制备方法同实施例1。
76.实施例6
77.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下：仙人掌提取物16份、甘草提取物4.8份、燕麦肽1.6份、香水莲花提取物1.6份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
78.按照以上比例配比，将仙人掌提取物0.62864g、甘草提取物0.188592g、燕麦肽提取物0.062864g、香水莲花提取物0.062864g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合制备组合物，制备方法同实施例1。
79.实施例7
80.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下：仙人掌提取物24份、甘草提取物6份、燕麦肽1.6份、香水莲花提取物0.96份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
81.按照以上比例配比，将仙人掌提取物0.94296g、甘草提取物0.23574g、燕麦肽提取物0.062864g、香水莲花提取物0.0377184g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合制
备组合物，制备方法同实施例1。
82.实施例8
83.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下：仙人掌提取物16份、甘草提取物6份、燕麦肽2.4份、香水莲花提取物1.28份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
84.按照以上比例配比，将仙人掌提取物0.62864g、甘草提取物0.23574g、燕麦肽提取物0.094256g、香水莲花提取物0.0502912g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合制备组合物，制备方法同实施例1。
85.实施例9
86.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下：仙人掌提取物20份、甘草提取物6份、燕麦肽0.8份、香水莲花提取物1.6份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
87.按照以上比例配比，将仙人掌提取物0.7858g、甘草提取物0.23574g、燕麦肽提取物0.031432g、香水莲花提取物0.062864g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合制备组合物，制备方法同实施例1。
88.实施例10
89.本实施例中抗氧化、抗敏和舒缓修复组合物的组分和含量如下：仙人掌提取物16份、甘草提取物3.6份、燕麦肽2.4份、香水莲花提取物1.6份、迷迭香酸0.8份和海藻糖0.8份。
90.按照以上比例配比，将仙人掌提取物0.62864g、甘草提取物0.141444g、燕麦肽提取物0.094296g、香水莲花提取物0.062864g、海藻糖0.031432g和迷迭香酸0.031432g混合制备组合物，制备方法同实施例1。
91.对比例1
92.对比例1与实施例10的唯一区别在于，对比例1中以相同份数的蒸馏水代替仙人掌提取物，其总重量份与实施例10相同。
93.对比例2
94.对比例1与实施例10的唯一区别在于，对比例1中以相同份数的蒸馏水代替甘草提取物，其总重量份与实施例10相同。
95.对比例3
96.对比例1与实施例10的唯一区别在于，对比例1中以相同份数的蒸馏水代替香水莲花提取物，其总重量份与实施例10相同。
97.为了验证本发明所述抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物的功效，本发明分别利用清除自由基实验、透明质酸酶抑制实验、细胞修复活性功效评价实验对组合物进行检测。
98.实验例1
99.对实施例1～10以及对比例1～3得到的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物的清除abts自由基实验。
100.abts自由基清除率的测定方法：将浓度为7mmol/l的abts溶液与2.45mmol/l的过硫酸钾溶液按照体积比1:1的比例进行混合，配制abts自由基的阳离子工作液，避光12～14小时，从而激发abts自由基。用pbs稀释abts自由基直至吸光值为0.7
±
0.02制成abts工作液。
101.将样品分别配制成9.9mg/ml(1％)、29.7mg/ml(3％)、49.5mg/ml(5％)三个浓度的
溶液，分别取各浓度溶液0.09ml，分别加入0.11mlabts工作液，混合均匀，避光37℃反应10min，于734nm处测定吸光值a；分别取上述各浓度溶液0.09ml，分别加入0.11ml pbs，反应后，于734nm处测得吸光值a
i
，再分别以0.11mlabts工作液和0.09ml去离子水反应，于734nm处测得吸光值a0作为参比。清除率计算公式为:
102.eabts＝[1
‑
(a
i
‑
a))/a0]
×
100％
[0103]
式中：eabts为对abts自由基的清除率，％；
[0104]
a为0.09ml样品溶液加入0.11ml的abts工作液的吸光值；
[0105]
a
i
为0.09ml样品溶液加入0.11mlpbs的吸光值；
[0106]
a0为0.11ml的abts溶液加入0.09ml去离子水的吸光值。
[0107]
平行测试三次取平均值，结果如表1所示。
[0108]
表1实施例1～10及对比例1～3中不同浓度组合物对abts自由基清除率
[0109][0110][0111]
实验例2
[0112]
实施例1～10以及对比例1～3得到的抗炎、舒缓修复组合物对透明质酸酶抑制作用
[0113]
1.实验原理：透明质酸酶是引起过敏反应的主要因素。过敏原初次侵入机体时，机体会产生抗体ige，当过敏原再次入侵机体，会与肥大细胞表面的ige抗体结合，从而启动活化信号，释放组胺，组胺在透明质酸酶的活化作用下产生过敏反应。因此抑制透明质酸酶的活性可以有效阻止过敏反应的发生，透明质酸酶与炎症反应、过敏反应有强的相关性。抗过敏活性以透明质酸酶抑制率为标准，透明质酸酶抑制率越大则抗过敏活性越强。
[0114]
2.实验步骤：
[0115]
2.1.1配制醋酸缓冲溶液(ph＝5.6)：
[0116]
(1)量取572μl冰乙酸用超纯水稀释至100ml，混匀后取其中4.8ml为a溶液。
[0117]
(2)称取0.82g乙酸钠结晶溶于超纯水中，用超纯水定容至100ml，混匀后取其中45.2ml为b溶液。
[0118]
(3)混合溶液a、b，用超纯水定容至100ml，混匀。精密测定其ph值，用溶液a或b调至5.6即可。
[0119]
2.1.2配制透明质酸酶溶液：
[0120]
称取透明质酸酶0.01g置于烧杯中，加入4ml醋酸缓冲溶液溶解。
[0121]
2.1.3配制透明质酸钠溶液(0.5mg/ml)：
[0122]
称取透明质酸钠0.01g置于烧杯中，加入20ml醋酸缓冲溶液溶解。
[0123]
2.1.4配制埃尔利希试剂(ehrlichreagent)：
[0124]
称取0.8g对二甲氨基苯甲醛溶于15ml浓盐酸和15ml无水乙醇中，可保存两个月。
[0125]
2.1.5配制碳酸钠溶液(1.0mol/l)：
[0126]
称取5.3g碳酸钠，用超纯水溶解并定容至50ml。
[0127]
2.1.6配制乙酰丙酮溶液：
[0128]
取乙酰丙酮3.5ml溶于50ml 1.0mol/l的碳酸钠溶液中，现用现配。
[0129]
2.1.7配制氯化钙溶液(0.25mmol/l)：
[0130]
称取0.13873g氯化钙，用超纯水溶解并定容至100ml。
[0131]
2.1.8配制氢氧化钠溶液(0.4mol/l)：
[0132]
称取1.6g氯化钙，用超纯水溶解并定容至100ml。
[0133]
2.2透明质酸酶活性抑制率测定：
[0134]
选择实施例1～10及对比例1～3得到的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物作为样品进行以下操作，得到样品组的吸光值：
[0135]
(1)取0.1ml 0.25mmol/l氯化钙溶液和0.5ml透明质酸酶溶液于37℃保温培养20min；
[0136]
(2)加入实验例1中配制得到的样品液0.5ml，继续37℃保温培养20min；
[0137]
(3)加入0.5ml透明质酸钠溶液，37℃保温培养30min，常温放置5min；
[0138]
(4)加入0.1ml 0.4mol/l氢氧化钠溶液和0.5ml乙酰丙酮溶液，置于沸水浴中加热15min后，立即用冰水进行冷却5min；
[0139]
(5)加入埃尔利希试剂1.0ml，并用3.0ml无水乙醇进行稀释，常温放置20min显色，待用分光光度计测定吸光值；
[0140]
3.结果分析
[0141]
透明质酸酶抑制率(％)＝[(a
‑
b)
‑
(c
‑
d)]/(a
‑
b)
×
100％
[0142]
式中：a为空白组的吸光值，空白组是指用醋酸缓冲溶液代替样品液；
[0143]
b为空白对照组的吸光值，空白对照组是指用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及透明质酸酶溶液；
[0144]
c为样品组的吸光值；
[0145]
d为样品对照组的吸光值，样品对照组是指用醋酸缓冲溶液代替透明质酸酶溶液。
[0146]
平行测试三次取平均值，结果如表2所示。
[0147]
表2实施例1～10及对比例1～3中不同浓度组合物对透明质酸酶的抑制率
[0148][0149][0150]
实验例3
[0151]
实施例1～10以及对比例1～3得到的抗炎、舒缓修复组合物对皮肤修复活性的功效评价
[0152]
1.组合物对人永生化表皮细胞(hacat)的细胞毒性研究(cck
‑
8法)所述人永生化表皮细胞(hacat)购买自中国科学院上海细胞库。
[0153]
1.1细胞复苏
[0154]
从液氮中取出hacat细胞，37℃水浴使之迅速融化，防止形成的冰晶损害细胞。3000r/min，室温离心5min，弃上清，加入l ml dmem(生产商为gibco)培养基吹打混匀(含10％胎牛血清和1％双抗)，得到细胞悬液，将细胞悬液转移至25cm2细胞培养瓶，加入10ml dmem培养基，在37℃、5％co2饱和湿度的孵箱中培养。次日弃去培养基用无菌pbs轻柔洗涤后，更换新鲜dmem培养基。
[0155]
1.2细胞传代
[0156]
当细胞生长至对数生长期后，弃去培养基，用pbs洗涤3次，加入l ml胰酶，在孵箱中放置3min之后在倒置显微镜下观察，若细胞间隙变大，细胞变圆加入2ml培养基终止消化，将细胞混悬液吸入到15ml离心管中。3000r/min，室温离心5min，弃上清，加入3ml完全培养基吹打混匀，均分至25cm2细胞培养瓶中，每个培养瓶中加10ml dmem培养基，在37℃、5％co2饱和湿度的孵箱中继续培养。
[0157]
1.3细胞计数
[0158]
胰酶消化细胞后，3000r/min，室温离心5min，弃上清，加入3ml完全培养基吹打混匀，吸取600μl细胞悬液加入到细胞计数管中，放置于细胞计数仪下计数，得出结果，单位为个/ml(重复两次求均值)。
[0159]
1.4实验步骤(cck
‑
8法)
[0160]
cck
‑
8试剂中含有wst
‑
8，它在电子载体(1
‑
methoxy pms)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒染料，生成的甲瓒物的数量与活细胞数量成正比，故可用于检测细胞增殖。
[0161]
(1)将hacat细胞以10
ⅹ
104cells/ml的密度，100μl/孔接种于96孔板，于孵箱中培养，待细胞密度约为80％，加入不同浓度(如表3所示)的待测组合物孵育24h、48h。
[0162]
(2)以1:9将cck
‑
8用培养液稀释，吸弃96孔板内的液体，每孔加入i00μl稀释后的cck
‑
8溶液。
[0163]
(3)培养箱内孵育30min后取出，用酶标仪在450nm处检测每个孔的吸光度值(od)，此实验重复三次以上，进行统计分析每组之间的差异。
[0164]
(4)细胞存活率(％)＝模型组或样品组od/正常组od
×
100％。
[0165]
1.5实验结果与分析
[0166]
采用cck
‑
8法检测了实施例1～10及对比例1～3中组合物对于hacat的细胞毒性，实施例10的结果如表3所示，其中ctrl为不添加本发明中组合物只用培养基培养的hacat的细胞。从表3和图1可以看出，检测了不同浓度组合物处理hacat细胞24h后对细胞增殖的影响。结果如下：组合物在9.90～30.69mg/ml(1.0％～3.2％)的质量浓度范围内，对正常hacat细胞无明显细胞毒性，当组合物的浓度达到33.66mg/ml(3.4％)时，hacat细胞存活率显著下降(p<0.05)从表3和图2可以看出，检测了不同浓度组合物处理hacat细胞48h后对细胞增殖的影响。结果如下：组合物在9.90～29.70mg/ml(1.0％～3.0％)的质量浓度范围内，对正常hacat细胞无明显细胞毒性，当组合物的浓度达到30.69mg/ml(3.1％)时，hacat细胞存活率显著下降(p<0.05)说明，组合物的浓度过高对于hacat细胞有一定的刺激性，影响力其存活率。因此，后续实验时组合物的浓度范围控制在9.90～29.70mg/ml(1.0％～3.0％)表3不同浓度组合物处理hacat细胞24h和48h后对细胞增殖的影响
[0167]
组合物浓度(mg/ml)细胞活性(％)(24h)细胞活性(％)(48h)ctrl100
±
0.65100
±
3.489.9(1.0％)94.74
±
1.2193
±
2.4913.86(1.4％)95.43
±
2.5095.07
±
2.7917.82(1.8％)96.75
±
5.5196.48
±
2.1921.78(2.2％)100.27
±
3.0198.31
±
3.1525.74(2.6％)100.47
±
3.2094.81
±
4.3027.72(2.8％)100.75
±
3.5092.51
±
2.4429.70(3.0％)98.47
±
2.8091.07
±
2.3230.69(3.1％)91.68
±
1.9985.61
±
4.3031.68(3.2％)89.98
±
3.7180.32
±
3.3833.66(3.4％)80.79
±
2.6471.09
±
2.9434.65(3.5％)73.86
±
3.0567.48
±
4.31
[0168]
2.组合物对hacat细胞创伤愈合的影响(细胞划痕实验)
[0169]
2.1实验原理：细胞划痕法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，去除中央部分的细胞，然后继
续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力。
[0170]
2.2实验步骤：
[0171]
将所需的材料进行灭菌，包括直尺和marker笔
[0172]
(1)利用直尺和marker笔在在6孔板背后均匀划横线，大约每隔0.5～1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
[0173]
(2)在孔中加入约50
×
105个hacat细胞，接种原则为过夜后融合率达到100％。
[0174]
(3)第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
[0175]
(4)pbs洗细胞3次，去除划下的细胞，在冲洗完成后的培养孔中分别加入不同浓度的待测组合物2ml并标记。
[0176]
(5)放入37℃、5％co2培养箱，培养。可按12，24h时间点取样，拍照。
[0177]
(6)用image pro
‑
plus软件来测定每张照片上细胞划痕的宽度，根据公式：划痕愈合率＝(0h的划痕宽度
‑
该检测时间点的划痕宽度)/0h的划痕宽度
×
100％，用划痕愈合率来反映迁移的速度。
[0178]
2.3实验结果
[0179]
由图3可知抗炎、舒缓修复组合物对hacat迁移的促进作用。采用细胞体外划痕实验，探讨了不同浓度的组合物对hacat细胞迁移能力的影响。组合物对hacat细胞迁移的影响如表4所示，在组合物浓度为9.90mg/ml(1.0％)和29.70mg/ml(3.3％)时，划痕后不同时间点细胞迁移率较对照组均增加。在划痕后12h与对照组迁移率11.39
±
2.93％相比，9.90mg/ml(1.0％)组合物组迁移率达到了26.54
±
2.49％，在划痕后24h与对照组迁移率24.81
±
1.95％相比，9.90mg/ml(1.0％)组合物组迁移率达到了43.91
±
3.06％，并且较对照组有显著差异(p<0.05)。在划痕后12h与对照组迁移率11.39
±
2.93％相比，29.7mg/ml(3.0％)组合物组迁移率达到了59.07
±
4.02％，在划痕后24h与对照组迁移率24.81
±
1.95％相比，29.7mg/ml(3.0％)组合物组迁移率达到了73.92
±
3.68％,并且较对照组有显著差异(p<0.05)。以上结果表明，组合物在浓度为9.90mg/ml(1.0％)和29.70mg/ml(3.0％)的较低剂量时能够促进hacat细胞的迁移，并且组合物在浓度为29.70mg/ml(3.3％)的剂量时能够显著促进hacat细胞的迁移。
[0180]
表4组合物对hacat细胞划痕愈合率的结果(％)
[0181]
组合物0h12h24h对照组control011.39
±
2.93％24.81
±
1.95％9.90mg/ml(1.0％)026.54
±
2.49％43.91
±
3.06％29.7mg/ml(3.0％)059.07
±
4.02％73.92
±
3.68％
[0182]
由表4可知抗炎、舒缓修复组合物对hacat迁移的促进作用。采用细胞体外划痕实验，探讨了不同浓度的组合物对hacat细胞迁移能力的影响。组合物对hacat细胞迁移的影响如图3所示。以上结果表明，以上结果表明，组合物在浓度为9.90mg/ml(1.0％)和29.70mg/ml(3.0％)的较低剂量时能够促进hacat细胞的迁移，并且组合物在浓度为29.70mg/ml(3.0％)的剂量时能够显著促进hacat细胞的迁移。
[0183]
由以上实施例和实验例可知，本发明制备的抗氧化、抗炎和舒缓修复组合物具有：(1)抗氧化性：制备的组合物对abts自由基的清除率均在90％以上，具有很好的抗氧化性；
(2)抗敏性：制备的组合物的透明质酸抑制率均在80％以上，具有改善皮肤细腻程度、增强皮肤抵抗力、缓解过敏症状、清爽肌肤的功效；(3)无刺激性：通过hacat细胞毒性实验，得到制备的组合物浓度范围控制在9.90～29.70mg/ml(1.0％～3.0％)，呈无刺激性；(4)修复性：添加有本发明制备的组合物在浓度为9.90mg/ml(1.0％)和29.70mg/ml(3.0％)的较低剂量时能够促进hacat细胞的迁移，并且组合物在浓度为29.70mg/ml(3.0％)的剂量时能够显著促进hacat细胞的迁移，具有显著的舒缓修复的效果，具有提升肌肤抵御能力、综合调理肌肤状态的作用。
[0184]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。