咖啡酰丁二胺在制备药品、保健品或功能性食品中的应用

1.本发明涉及药物化学技术领域，更具体的说是涉及咖啡酰丁二胺在制备药品、保健品或功能性食品中的应用。


背景技术：

2.失眠作为生活中较为常见的病症之一，与人们的生活工作息息相关。失眠病症的产生与年龄、性别和疾病等多种因素相关，而且失眠的患病率随着年龄的增加而增加。近年来，失眠症的发病率越来越高。失眠不仅会导致患者出现焦躁不安、抑郁等情绪，也会导致各种疾病的发生。因此，开发寻找天然治疗失眠的药物变得尤为重要。
3.目前临床用于治疗失眠的药物主要包括巴比妥类、苯二氮类以及非苯二氮类镇静催眠药；褪黑素类药物；orexin受体拮抗剂；5-ht2a受体拮抗剂；抗精神病、抗抑郁以及抗癫痫药物等。以上这些均为化学合成药物，表现出不良反应较多，长期使用可能产生耐药性及依赖性。近年来，一些新发现的镇静催眠中药活性单体也被用于治疗和改善睡眠障碍相关疾病的研究，如丁香酸、异甘草素等经证实对睡眠障碍具有显著的改善作用。
4.因此，从天然药物中寻找具有镇静催眠作用，可用于预防和治疗失眠、焦虑和抑郁等疾病的活性单体成分成为目前研究热点。
5.咖啡酰丁二胺，分子式c
13h18
n2o3，分子量250.29，是从枸杞中分离得到的一种咖啡酸酰胺。目前有关咖啡酰丁二胺的研究报道较少，还没有关于咖啡酰丁二胺的生物活性的任何报道。
6.因此，如何提供咖啡酰丁二胺的应用是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

7.有鉴于此，本发明提供了咖啡酰丁二胺在制备药品、保健品或功能性食品中的应用。通过前期动物实验发现咖啡酰丁二胺具有显著的镇静催眠作用。进一步地，将其开发为能够用于预防和治疗失眠、焦虑及抑郁等疾病的保健食品、功能食品或药物，将具有极大的临床应用价值。
8.咖啡酰丁二胺的结构如式(1)所示：
[0009][0010]
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0011]
咖啡酰丁二胺在制备药品、保健品或功能性食品中的应用。
[0012]
优选的：药品为预防和治疗失眠、焦虑及抑郁的药品；所述保健品、功能性食品具有改善失眠、焦虑及抑郁的保健功效。
[0013]
优选的：药品、保健品或功能性食品降低小鼠自主活动次数；增加体重、睡眠时间、脑组织中5-ht、5-hiaa、gaba的含量；降低glu的含量和glu/gaba值。
[0014]
优选的：咖啡酰胺丁二胺的单次应用剂量为1～100mg/kg。
[0015]
本发明还提供了一种药品，包括咖啡酰丁二胺，单次应用剂量为1～100mg/kg。
[0016]
优选的：药品剂型为口服剂型、外用贴剂或注射剂型。
[0017]
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了咖啡酰丁二胺在制备药品、保健品或功能性食品中的应用，取得的技术效果为首次证实咖啡酰丁二胺具有镇静催眠作用，试验动物给予1～100mg/kg的剂量范围内，咖啡酰丁二胺可显著减少失眠小鼠活动次数，缩短其睡眠潜伏期，延长其睡眠时间，同时能够显著回调失眠小鼠脑组织中的5-ht、5-hiaa、gaba、glu等神经递质指标水平，以上均证实了咖啡酰丁二胺能够用于失眠、焦虑及抑郁等精神疾病的预防和治疗。
附图说明
[0018]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0019]
图1附图为本发明提供的咖啡酰丁二胺对小鼠自主活动实验的影响示意图，其中，1-g、z、d分别表示为咖啡酰丁二胺高、中、低剂量组；与模型组比较，***p《0.001。
[0020]
图2附图为本发明提供的咖啡酰丁二胺对小鼠睡眠潜伏期的影响示意图，其中，1-g、z、d分别表示为咖啡酰丁二胺高、中、低剂量组；与正常对照组比较，###p《0.001；与模型组比较，**p《0.01，***p《0.001。
[0021]
图3附图为本发明提供的咖啡酰丁二胺对小鼠脑组织中5-ht的影响示意图，其中，1-g、z、d分别表示为咖啡酰丁二胺高、中、低剂量组；与正常对照组比较，###p《0.001；与模型组比较，**p《0.01，***p《0.001。
[0022]
图4附图为本发明提供的咖啡酰丁二胺对小鼠脑组织中5-hiaa的影响示意图，其中，1-g、z、d分别表示为咖啡酰丁二胺高、中、低剂量组；与正常对照组比较，###p《0.001；与模型组比较，*p《0.05，***p《0.001。
[0023]
图5附图为本发明提供的咖啡酰丁二胺对小鼠脑组织中gaba的影响示意图，其中，1-g、z、d分别表示为咖啡酰丁二胺高、中、低剂量组；与正常对照组比较，##p《0.01；与模型组比较，**p《0.01。
[0024]
图6附图为本发明提供的咖啡酰丁二胺对小鼠脑组织中glu的影响示意图，其中，1-g、z、d分别表示为咖啡酰丁二胺高、中、低剂量组；与正常对照组比较，#p《0.05；与模型组比较，**p《0.01，***p《0.001。
[0025]
图7附图为本发明提供的咖啡酰丁二胺对小鼠脑组织中glu/gaba比值的影响示意图，其中，1-g、z、d分别表示为咖啡酰丁二胺高、中、低剂量组；与正常对照组比较，##p《0.01；与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01。
具体实施方式
[0026]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于
本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0027]
本发明实施例公开了咖啡酰丁二胺在制备药品、保健品或功能性食品中的应用。
[0028]
实施例中的原料等均为市售获得，所需设备均为常规实验设备，在此不再赘述。
[0029]
实施例1
[0030]
一种咖啡酰丁二胺注射剂，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为1mg/kg。
[0031]
实施例2
[0032]
一种咖啡酰丁二胺注射剂，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为10mg/kg。
[0033]
实施例3
[0034]
一种咖啡酰丁二胺口服剂，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为1mg/kg。
[0035]
实施例4
[0036]
一种咖啡酰丁二胺口服剂，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为10mg/kg。
[0037]
实施例5
[0038]
一种咖啡酰丁二胺口服剂，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为100mg/kg。
[0039]
实施例6
[0040]
一种咖啡酰丁二胺外用贴剂，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为10mg/kg。
[0041]
实施例7
[0042]
一种咖啡酰丁二胺外用贴剂，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为100mg/kg。
[0043]
实施例8
[0044]
一种咖啡酰丁二胺口服保健品，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为1mg/kg。
[0045]
实施例9
[0046]
一种咖啡酰丁二胺口服保健品，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为10mg/kg。
[0047]
实施例10
[0048]
一种咖啡酰丁二胺口服保健品，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为100mg/kg。
[0049]
实施例11
[0050]
一种咖啡酰丁二胺口服功能性食品，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为1mg/kg。
[0051]
实施例12
[0052]
一种咖啡酰丁二胺口服功能性食品，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为10mg/kg。
[0053]
实施例13
[0054]
一种咖啡酰丁二胺口服功能性食品，其中咖啡酰丁二胺单次应用剂量为100mg/kg。
[0055]
技术效果：
[0056]
动物实验设计
[0057]
采用注射对氯苯丙氨酸(pcpa)致小鼠失眠模型对咖啡酰丁二胺进行改善睡眠作用药效学评价。通过小鼠自主活动次数记录、体重记录、戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠实验等评价方法，观察咖啡酰丁二胺对失眠小鼠的镇静催眠作用。取脑组织测定神经递质5-ht、5-hiaa、gaba、glu水平，探讨咖啡酰丁二胺改善睡眠作用的可能机制。
[0058]
实验过程
[0059]
1、取健康的spf级雄性icr小鼠(18～22g)，由宁夏医科大学动物实验中心提供(实
验动物许可证编号scxk(宁夏医科大学)2020-0001)。适应性饲养于spf级标准实验室，各组动物饲养条件相同：环境温度(25℃)、相对湿度(50％～60％)。自由进食、进水。
[0060]
2、实验方法：icr小鼠在接受造模前适应性喂养3天，造模前一天随机分为正常对照组、模型组、阳性药组、咖啡酰丁二胺组(低剂量组1mg/kg/d、中剂量组10mg/kg/d、高剂量组100mg/kg/d)共6组，每组10只。适应性喂养后，连续造模2天，正常对照组给予生理盐水(0.1ml/10g/d)，其余各组腹腔注射pcpa混悬液(400mg/kg/d)。注射后28～30h内，白天持续活动，进食减少，攻击性增强，表明造模成功。
[0061]
造模成功之后，正常对照组和模型组给予等体积生理盐水(0.1ml/10g/d)，阳性药组给药剂量为褪黑素10mg/kg/d，咖啡酰丁二胺给药剂量分别为1、10和100mg/kg/d。各组小鼠均在每日上午8:00～12:00依次给药，连续给药7天。
[0062]
3、观察指标
[0063]
(1)自主活动次数：按照上述分组后，分别在造模成功后和第7天给药后半个小时，记录小鼠在5min内的自主活动次数。每次记录前，先将小鼠放进设备中适应3min。
[0064]
(2)体重：分别在造模前、造模后、给药第3天、给药第7天，记录每组小鼠体重，观察小鼠体重变化。
[0065]
(3)翻正反射实验测定睡眠时间：在第7天给药后1h，每组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠混悬液(50mg/kg)，记录小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间。(从腹腔注射结束到小鼠翻正反射消失1min以上开始记录睡眠潜伏期；从小鼠入睡到小鼠翻正反射恢复记为睡眠时间。)
[0066]
4、神经递质水平测定
[0067]
给药7天后，小鼠颈椎脱臼处死，在冰台上断头取脑，用组织匀浆器研磨均匀，加入生理盐水制成10％脑组织匀浆液。于4℃条件下3000r/min离心15min，收集上清液，采用elisa法检测上清液中神经递质5-ht、5-hiaa、glu、gaba水平。
[0068]
5、数据处理
[0069]
采用spss 18.0进行数据分析和统计，所得结果均以均值
±
标准差(x
±
s)表示，组间差异性比较采用单因素方差分析(one-wayanova)进行数据处理，差异性具有统计学意义以p《0.05作为标准。
[0070]
结果表明：
[0071]
1、对小鼠自主活动次数的影响
[0072]
咖啡酰丁二胺对小鼠自主活动次数的影响结果见表1和附图1所示。
[0073]
表1咖啡酰丁二胺对小鼠自主活动实验的影响
[0074]
[0075][0076]
注：#表示给药前模型组与正常对照组比较，
###
p《0.001；*表示末次给药后与对应给药前比较，
***
p《0.001。
[0077]
给药前，与正常对照组(190
±
30.85)比较，pcpa致失眠组小鼠自主活动次数显著增加(p《0.001)。末次给药后，与给药前比较，正常对照组和模型组小鼠自主活动次数无明显变化，阳性药组小鼠自主活动次数(174
±
20.81)显著降低(p《0.001)；咖啡酰丁二胺高中低剂量组小鼠自主活动次数均显著降低(p《0.001)。
[0078]
2、对小鼠体重的影响
[0079]
咖啡酰丁二胺对小鼠体重的影响结果见表2所示。
[0080]
表2咖啡酰丁二胺对小鼠体重的影响
[0081][0082]
注：与造模前比较，
##
p《0.01；与模型组比较，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
[0083]
造模后与造模前比较，随着实验的进行正常对照组小鼠体重逐渐增加(p《0.01)，而造模组小鼠体重基本无变化，无统计学差异。给药第3天，与正常对照组(31.71
±
2.27g)比较，模型组小鼠体重(26.50
±
3.39g)显著降低(p《0.001)；与模型组比较，阳性药组小鼠体重(31.33
±
4.21g)显著增加(p《0.001)；咖啡酰丁二胺各剂量组小鼠体重均显著增加(p《0.001)。给药第7天，与正常对照组(32.45
±
1.34g)比较，模型组小鼠体重(29.95
±
4.07g)有一点程度的降低，但不具有统计学意义；与模型组比较，阳性药组小鼠体重(33.67
±
3.80g)显著增加(p《0.01)；咖啡酰丁二胺各剂量组小鼠体重均明显增加(p《0.01)。
[0084]
3、对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响
[0085]
咖啡酰丁二胺对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响结果见表3和附图2所示。
[0086]
表3咖啡酰丁二胺对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响
[0087][0088]
注：与正常对照组比较，
#
p《0.01,
###
p《0.001；与模型组比较，
**
p《0.01，
***
p《0.001。
[0089]
结果显示，在睡眠潜伏时间指标水平方面，与正常对照组(229.00
±
13.70s)比较，模型组小鼠睡眠潜伏时间(332.67
±
62.76s)显著增加(p《0.001)，表明pcpa致小鼠失眠模型成功，使小鼠出现入睡困难现象。与模型组比较，阳性药和咖啡酰丁二胺各剂量组小鼠睡眠潜伏时间均显著缩短(p《0.01)，表明阳性药褪黑素和咖啡酰丁二胺均可以调节小鼠睡眠潜伏时间，对于pcpa致小鼠失眠具有改善作用。在睡眠时间指标水平方面，与正常对照组(15.29
±
7.60min)比较，模型组小鼠睡眠时间(7.38
±
3.81min)显著缩短(p＜0.05)，表明pcpa致小鼠失眠模型成功，使小鼠睡眠时间缩短。与模型组比较，阳性药和咖啡酰丁二胺各剂量组小鼠睡眠时间均显著增加(p＜0.001)，表明阳性药褪黑素和咖啡酰丁二胺均可以增加小鼠睡眠时间，对于pcpa致小鼠失眠具有改善作用。
[0090]
综上，小鼠失眠后出现白天持续活动、进食和睡眠减少等现象，导致自主活动次数增多(p《0.001)、睡眠潜伏期延长(p《0.001)、睡眠时间缩短(p《0.05)，小鼠体重增长速率下降。咖啡酰丁二胺不同剂量组均能不同程度的降低失眠小鼠自主活动次数，缩短睡眠潜伏期，增加睡眠时间，改善pcpa致失眠小鼠体重增长速率下降。以上数据说明咖啡酰丁二胺具有显著的镇静催眠作用。
[0091]
4、对小鼠单胺类神经递质水平的影响
[0092]
咖啡酰丁二胺对单胺类神经递质水平的影响结果见表4和附图3和4所示。
[0093]
表4咖啡酰丁二胺对小鼠单胺类神经递质的影响
[0094][0095]
注：与正常对照组组比较，
###
p《0.001；与模型组比较，**p《0.01，***p《0.001。
[0096]
咖啡酰丁二胺对小鼠脑组织中5-ht和5-hiaa的影响结果见表4和附图3和4所示。与正常对照组(322.96
±
28.00ng/g)比较，模型组小鼠脑组织中5-ht(238.66
±
34.66ng/g)
含量显著降低(p＜0.001)，表明pcpa致失眠小鼠模型成功。与模型组比较，阳性药组小鼠脑组织中5-ht(318.30
±
34.56ng/g)含量显著增加(p＜0.001)。咖啡酰丁二胺各剂量组小鼠脑组织中5-ht含量均显著增加(p＜0.05)，且具有一定的剂量正相关，即给药剂量越大，5-ht含量越高。与正常对照组(34.37
±
3.71ng/g)比较，模型组小鼠脑组织中5-hiaa(29.66
±
1.74ng/g)含量显著降低(p＜0.001)，表明pcpa致失眠小鼠模型成功。与模型组比较，阳性药组小鼠脑组织中5-hiaa(37.15
±
1.56ng/g)含量显著增加(p＜0.001)。咖啡酰丁二胺各剂量组小鼠脑组织中5-hiaa含量均显著增加(p＜0.05)。
[0097]
综上，小鼠失眠后，脑组织中5-ht和5-hiaa含量降低(p＜0.001)。咖啡酰丁二胺不同剂量组均能够不同程度的增加5-ht和5-hiaa的含量，推测咖啡酰丁二胺可能直接通过增加失眠小鼠脑组织中5-ht和5-hiaa的含量来改善睡眠。
[0098]
5、对小鼠氨基酸类神经递质水平的影响
[0099]
咖啡酰丁二胺对氨基酸类神经递质水平的影响结果见表5和附图5、6和7所示。
[0100]
表5咖啡酰丁二胺对小鼠氨基酸类神经递质的影响
[0101][0102]
注：与正常对照组组比较，
#
p《0.05，
##
p《0.01；与模型组比较，**p《0.01，***p《0.001。
[0103]
咖啡酰丁二胺对小鼠脑组织中gaba、glu和glu/gaba值的影响结果见表5和附图5、6和7所示。与正常对照组(8.47
±
2.31nmol/l)比较，模型组小鼠脑组织中gaba(5.94
±
0.83nmol/l)含量显著降低(p＜0.01)，表明pcpa致失眠小鼠脑组织中gaba含量降低。与模型组比较，阳性药组小鼠脑组织中gaba(6.89
±
1.11nmol/l)含量增加，但无统计学意义。咖啡酰丁二胺高剂量组小鼠脑组织中gaba含量显著增加(p＜0.01)，中、低剂量组小鼠脑组织中gaba含量增加，但无显著性差异。与正常对照组(60.31
±
1.93μmol/gprot)比较，模型组小鼠脑组织中glu(65.56
±
4.33μmol/gprot)含量显著增加(p＜0.05)，表明pcpa致失眠小鼠脑组织中glu含量增加。与模型组比较，阳性药组小鼠脑组织中glu(53.52
±
7.23μmol/gprot)含量显著降低(p＜0.001)。咖啡酰丁二胺高剂量组小鼠脑组织中glu含量显著降低(p＜0.01)，中、低剂量组小鼠脑组织中glu含量降低，但无显著性差异。与正常对照组(8.00
±
1.94)比较，模型组小鼠脑组织中glu/gaba值(10.79
±
1.96)显著增大(p＜0.01)。与模型组比较，阳性药组小鼠脑组织中glu/gaba值(8.51
±
1.55)显著降低(p＜0.05)。咖啡酰丁二胺高剂量组小鼠脑组织中glu/gaba值显著降低(p＜0.01)，中、低剂量组小鼠脑组织中glu/gaba值降低，但无显著性差异。
[0104]
综上，小鼠失眠后，脑组织中gaba含量降低(p＜0.01)，glu含量和glu/gaba值增加
(p＜0.05)。咖啡酰丁二胺高剂量能够显著增加失眠小鼠脑组织中gaba的含量，降低glu的含量和glu/gaba值。推测咖啡酰丁二胺可能通过降低glu含量，增加gaba含量，降低glu/gaba值来改善睡眠。
[0105]
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
[0106]
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。