抑制CYP1A1的药物在制备用于减轻临床使用何首乌造成的肝损伤的药物中的应用

抑制cyp1a1的药物在制备用于减轻临床使用何首乌造成的肝损伤的药物中的应用
技术领域
1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及抑制cyp1a1的药物在制备用于减轻临床使用何首乌造成的肝损伤的药物中的应用。


背景技术：

2.中药何首乌是蓼科何首乌的块根，具有广泛的生物活性和药理作用。生何首乌可活血安神、截疟消痈；制何首乌具备补益精血、强筋补肝之疗效。关于其主要化学成分，早已进行多项实验研究，除了含有二苯乙烯苷类、蒽醌类及鞣质类外，还有黄酮类、花青素类、卵磷脂类等；目前《药典》主要以2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯苷-2-o-β-d-葡萄糖苷(c20h22o9)和结合性蒽醌(以大黄素记)作为指标成分来表征何首乌的质量，要求两者的含量分别不得少于1.0％和0.10％。何首乌作为中国传统中药，因其广泛的药理活性，临床上常被用于补肝肾、益精血、乌须发等，然而临床应用何首乌会造成肝损伤。ch223191是芳烃受体(ahr)的有效特异性拮抗剂。3-mc是经典的cyp1a1诱导剂。
3.药物性肝损伤(drug-induced liver injury，dili)是指药物在使用过程中，因药物本身或其代谢物或由于特殊体质对药物的超敏感性或耐受性降低所导致的肝脏损伤。作为急性或慢性肝脏疾病的重要诱因之一，dili引发肝脏损伤的主要方式有两种，一种是由药物及其中间产物对肝脏的直接毒性作用；另外一种是机体对药物的特异质肝毒性。


技术实现要素：

4.为了减轻临床使用何首乌造成的肝损伤，本发明提供了一种抑制cyp1a1的药物在制备用于减轻临床使用何首乌造成的肝损伤的药物中的应用。
5.进一步地限定，所述抑制cyp1a1的药物为ch223191。
6.进一步地限定，所述ch223191的化学式为c
19h19
n5o，结构式为
7.进一步地限定，所述应用是将ch223191与何首乌联用用于减轻肝损伤。
8.进一步地限定，以生物体的体重计，所述ch223191的用量为3.8g/kg，所述ch223191的用量为10mg/kg。
9.本发明的有益效果：
10.本发明发现当小鼠高表达cyp1a1时，3-mc+大黄素组、3-mc+何首乌组小鼠表现出更低的存活率。表现为3-mc+何首乌组小鼠最终未有存活，3-mc+大黄素组存活率仅为50％。与正常组相比，大黄素给药组及ch223191各组对c57小鼠肝脏等各脏器系数均无明显作用，而3-mc+大黄素组、3-mc+何首乌组小鼠肝脏系数显著升高。其中3-mc+大黄素组、3-mc+何首乌组小鼠各肝功能生化指标显著升高。ch223191+大黄素组、ch223191+何首乌组小鼠各肝
功能生化指标低于何首乌单用组。与正常对照组相比，3-mc+大黄素组汇管区周围大面积肝细胞坏死、核碎裂、炎性细胞浸染、坏死区出血；3-mc+何首乌组部分肝细胞核空泡变性、肝细胞点状坏死。以上结果说明3-mc与何首乌联合使用增强肝毒性，ch223191与何首乌联合使用减轻肝毒性，提示我们可以通过抑制cyp1a1表达达到预防何首乌所致的肝毒性作用。
附图说明
11.图1为何首乌对小鼠生存率和体重影响的结果图；其中，图1中的a为何首乌对小鼠生存率影响的结果图，图1中的b为何首乌对小鼠体重影响的结果图；数据以平均值
±
标准误差表示，*p《0.05，**p《0.01，与玉米油组相比显著增加，##p《0.01，与对照组相比显著增加；
12.图2为何首乌对小鼠脏器系数影响的结果图；其中，图2中的a为何首乌对小鼠肝脏系数影响的结果图，图2中的b为何首乌对小鼠肺系数影响的结果图，图2中的c为何首乌对小鼠睾丸系数影响的结果图，图2中的d为何首乌对小鼠脾脏系数影响的结果图，图2中的e为何首乌对小鼠肾脏系数影响的结果图；数据以平均值
±
标准误差表示，*p《0.05，**p《0.01，与玉米油组相比显著增加，##p《0.01，与对照组相比显著增加；
13.图3为何首乌对血清中alt，ast，alp和ldh水平的影响结果图；其中，图3中的a为何首乌对血清中alt水平的影响结果图，图3中的b为何首乌对血清中ast水平的影响结果图，图3中的c为何首乌对血清中alp水平的影响结果图，图3中的d为何首乌对血清中ldh水平的影响结果图；数据以平均值
±
标准误差表示，*p《0.05，**p《0.01，与对照组相比显着增加；
14.图4为何首乌对小鼠肝脏切片的影响结果图；数据以平均值
±
标准误差表示，*p《0.05，**p《0.01，与玉米油组相比显著增加，##p《0.01，与对照组相比显著增加。
具体实施方式
15.以下结合具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明。本发明所使用的药品、试剂、仪器、设备等如无特殊说明，均可通过商业化途径购买获得，涉及的pcr扩增等分子生物学实验操作如无特殊说明，均为本领域常规实验操作或依照相应试剂的产品说明书进行。
16.实验动物：四周龄spf级c57bl/6j小鼠，雄性，购自军事医学科学院动物中心，许可证号scxk(京)2016-0006，所有动物实验均通过伦理委员会审核。
17.实验分组：将c57小鼠分为对照组(0.5％cmc-na)、玉米油组、ccl4组(10％ccl4)、大黄素组(emodin)(40mg/kg、120mg/kg、360mg/kg)、何首乌组(rpma 3.8g/k)、3-mc、3-mc+rpma、3-mc+emodin(emodin剂量为360mg/kg)、ch223191、ch223191+rpma、ch223191+emodin(emodin剂量为360mg/kg)，共13组，每组6只(具体分组情况见表1)。用ch223191对c57小鼠预处理7天抑制体内cyp1a1水平，后给予大黄素、何首乌灌胃30天检测组织病理学、血清生化学等改变。
18.ch223191的化学式为c
19h19
n5o，结构式为
19.3-mc分子式为c
21h16
，结构式为
20.表1 c57小鼠实验分组情况
[0021][0022]
实验方法：动物的饲养及使用完全按照军事医学科学院动物中心制度指导实施，给予标准饲料和饮用水，12h日夜节律，室内温度为(22
±
1)℃，相对湿度为40-50％。对照组小鼠给予橄榄油灌胃；cyp1a1诱导组给予50mg/kg 3-mc灌胃；cyp1a1抑制组给予10mg/kg ch223191灌胃。预处理1周后，灌胃给药30天后，统计各组小鼠的生存率和体重，股动脉取血处死，取组织进行相关毒理学研究。
[0023]
血清生化学分析：采集小鼠血清，采用全自动生化分析仪检测肝功能指标alt、ast、ldh、alp。
[0024]
病理切片he染色分析：取小鼠肝脏组织，采用10％甲醛固定一周，包埋、切片、he染色，光镜下观察并显微拍照。
[0025]
统计学方法如下：所有数据重复3次，每次设置3个复孔，收集数据进行统计学分析。实验数据用x
±
s表示，采用spss统计学软件，两组间比较采用t检验，p《0.05表示具有显著统计学差异。
[0026]
实验结果：
[0027]
本发明通过对各组小鼠存活率和体重的调查发现，ch223191预处理组的小鼠体重较何首乌单用组有所升高，提示在cyp1a1被抑制时何首乌的毒性作用明显减弱(见图1)。
[0028]
本发明通过对各组小鼠各脏器系数的检测发现，何首乌给药组及ch223191各组对c57小鼠肝脏等各脏器系数均无明显作用，而3-mc+大黄素组、3-mc+何首乌组小鼠肝脏系数显著升高。这也从侧面证明了cyp1a1被抑制时导致何首乌致肝损伤效应减弱，被诱导时效应增强(见图2)。
[0029]
小鼠肝功能生化指标主要是alt、ast、ldh、alp，本发明通过对各组小鼠血清的检
测发现，ch223191+大黄素组、ch223191+何首乌组小鼠各肝功能生化指标低于何首乌单用组(见图3)。
[0030]
本发明对各组小鼠进行肝脏切片观察小鼠的病理指标发现，通过与正常对照组相比，3-mc+大黄素组汇管区周围大面积肝细胞坏死、核碎裂、炎性细胞浸染、坏死区出血；3-mc+何首乌组部分肝细胞核空泡变性、肝细胞点状坏死；ch223191+大黄素组，ch223191+何首乌组出现部分肝组织损伤、肝细胞排列紊乱(见图4)。
[0031]
实验结果表明：当小鼠高表达cyp1a1时，3-mc+大黄素组、3-mc+何首乌组小鼠表现出更低的存活率。表现为3-mc+何首乌组小鼠最终未有存活，3-mc+大黄素组存活率仅为50％。与正常组相比，大黄素给药组及ch223191各组对c57小鼠肝脏等各脏器系数均无明显作用，而3-mc+大黄素组、3-mc+何首乌组小鼠肝脏系数显著升高。其中3-mc+大黄素组、3-mc+何首乌组小鼠各肝功能生化指标显著升高。ch223191+大黄素组、ch223191+何首乌组小鼠各肝功能生化指标低于何首乌单用组。与正常对照组相比，3-mc+大黄素组汇管区周围大面积肝细胞坏死、核碎裂、炎性细胞浸染、坏死区出血；3-mc+何首乌组部分肝细胞核空泡变性、肝细胞点状坏死。以上结果说明3-mc与何首乌联合使用增强肝毒性，ch223191与何首乌联合使用减轻肝毒性，提示我们可以通过抑制cyp1a1表达达到预防何首乌所致的肝毒性作用。
[0032]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。